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171.
Signature-tagged mutagenesis(STM)信号标签突变技术是一种有效的负向选择方法,主要用来鉴定能使病原体在宿主体内成功存活和复制的决定性基因。问世十几年以来,STM技术已经应用于31种细菌中,筛选了大量的转座插入突变体,有大约1700多种细菌的基因得到认识和鉴定,包括毒力因子。由于在信号标签和鉴定方法的改进,使得STM技术有了很大发展,增加其多样性和灵活性,扩大了其应用范围。本文就STM技术中关键步骤的改进进行综述。 相似文献
172.
本研究应用限制性内切酶MboⅠ消化胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组DNA,回收500bp~3000bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamHⅠ酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有10^6个克隆)。将该文库随机分为10个亚文库(10个Clone pool),分别提取每个亚文库的重组质粒免疫小鼠(n=130只),免疫剂量为100μg,免疫3次后以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,通过相对保护率、肺组织荷菌数、病理组织学3个指标测定其对小鼠的免疫保护作用。试验结果表明,Clone pool3、Clone pool2、Clone pool6和Clone pool7的免疫效果明显优于其他免疫组,尤其是Clone pool3的免疫保护效果最佳。本研究成功构建了7型胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库,从而为筛选和获得新的保护性抗原基因奠定基础。 相似文献
173.
牛结核病是一种严重的人畜共患病,其传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,还会引起奶牛产乳率和乳质下降,更严重威胁着人类的身心健康。据统计,人结核病有10%以上是由牛分枝杆菌引起,因此控制牛结核病具有重大的公共卫生学意义。 相似文献
174.
175.
猪胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅳ A2.5kb基因片段的分子克隆及其表达 总被引:2,自引:1,他引:1
以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清1型国内分离株72—1株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出ApxⅣA基因2.5kb特异片段,将其克隆于pMD 18-T中,经酶切鉴定筛选重组质粒后进行核苷酸序列测定,并与GenBank中登录的血清1型ApxⅣA(AⅪ302405)基因进行比较,结果显示核苷酸同源性为99.5%。将该片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的EfoRⅠ/SalⅠ位点,成功地构建了重组表达载体pGEX—apxⅣA,并转化大肠埃希氏菌BL2l,获得了表达。SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为117ku,与预期片段大小相符;Western-blotting分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。 相似文献
176.
鸡传染性支气管炎病毒疫苗株和中国流行株鉴别诊断的研究 总被引:3,自引:1,他引:2
根据国外已发表的IBV核蛋白基因序列设计一对特异性引物,引物跨度为15Kb,包括整个开放阅读框架。由于疫苗株M41在核蛋白基因3′末端非编码区缺失近02Kb的基因片段,因此RTPCR扩增将得到13Kb的基因产物。我们应用这对引物扩增9株IBV的核蛋白基因,结果表明,除8株IBV扩增出15Kb的预计大小的基因产物外,疫苗株M41则扩增出13Kb的基因产物,与实际设计相符。经酶切分析、分子杂交及序列分析鉴定证实我们获得的PCR产物为IBV的核蛋白基因。 相似文献
177.
为研究结核分枝杆菌(M.tb)rv0199基因在该病原致病性中可能发挥的作用,本研究克隆了rv0199基因,在耻垢分枝杆菌(Ms)中异源表达,并对其表达进行检测。将大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261进行改造,向载体中引入常用的6His和Strep Ⅱ重组蛋白标签,命名为pMV262。使用Ms/pMV262表达系统对rv0199基因进行超表达,用抗6His标签抗体和抗Strep Ⅱ标签抗体均能特异的检测到重组蛋白。本试验改造的pMV262穿梭表达载体可很方便的检测M.tb的基因在Ms中的异源表达,不用制备针对蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体。构建的重组菌Ms/262-99为进一步研究rv0199基因的功能提供了材料,奠定了基础。 相似文献
178.
利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1 050 bp的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCA(pcDNA3.1-OmpA),将该重组质粒体外转染Vero细胞,检测其转录和表达情况。结果表明重组质粒pCA构建成功,通过RT-PCR由转染了重组质粒的Vero细胞中扩增出了目的条带,间接免疫荧光试验分析表明在转染了pCA的Vero细胞中出现绿色荧光,Western blotting分析显示重组质粒pCA转染的Vero细胞泳道出现约37.5 ku的特异条带,说明ompa基因在Vero细胞中成功表达了活性蛋白,从而为进一步研究禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。 相似文献
179.
为了制备抗牛γ-干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究,试验用重组牛IFN-γ蛋白免疫小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术和间接ELISA方法进行试验.结果表明:共获得5株抗IFN-γ的单克隆抗体,Ig亚类鉴定均为IgGI,轻链为k链;经Weatern-blot试验证实5株McAb均能与IFN-γ发生特异性反应,而与其他蛋白不发生反应,特异性好;以5株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备腹水,效价均达到1:50 000以上. 相似文献
180.