玻璃化冷冻前平衡及解冻后恢复处理对卵母细胞质量的影响

以小鼠为动物模型，研究了玻璃化冷冻前的平衡和解冻后的恢复处理对卵母细胞质量的影响程度。结果表明：1）无论是受精卵还是卵母细胞，其集聚FDA（乙酰荧光素）没有明显差异，可以用其检测卵母细胞活力；2）在产销认中添加CB组的卵母细胞细胞膜完整率与CB组没有明显差异；但是明显低于对照组。3）恢复处理在无CB时对卵母的激活作用并不明显，虽然活化率有一定的提高，但是添加CB组的卵母细胞激活率却明显增加，但是激活的类型多是排出第二极体，形成原核的比率很低。     

小鼠获能精子体外短期保存的初步研究

本实验以小鼠为实验动物 ,检测已获能精子在 4℃、 2 4℃保存能否维持其受精能力 ,以期为家畜的体外受精提供有益参考。结果表明 :1) 2 4℃保存的精子受精率明显高于 37℃和 4℃保存的精子 (P <0 0 5 ) ;2 ) 2 4℃保存的精子浓度增加 ,其受精率明显增加 (P <0 0 5 ) ;3)获能精子于 2 4℃、 5 %CO2 和空气保存 2 4h ,其受精率没有明显差异 (P >0 0 5 ) ;4 )获能精子于 2 4℃保存 5 %CO2 2 4、 4 8和 72h后的体外受精率有明显的差异 (P <0 0 5 )。     

猪精液冷冻技术的研究

以解冻后的精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和人工授精结果为判定指标 ,比较了几种冷冻稀释液、解冻液及冷冻 -解冻程序对猪精液冷冻的效果 ,并对所筛选出的最佳稀释液和冷冻程序做了改进。结果如下 :(1) 号稀释液冷冻解冻后的精子活力 (32 .4± 7.3) %、活率 (4 2 .2± 3.2 ) %、顶体完整率 (6 2 .3± 0 .8) %和弯尾率 (4 2 .6± 7.5 ) %均显著高于 、 、 号稀释液 (P<0 .0 5 )。 (2 )在 号稀释液中添加 0 .5 %、1%和 2 %的 O.E.P(氨基 -钠 -十二烷硫酸酯 )使精子活率提高 5 %、弯尾率提高 6 %、顶体完整率提高近 10 % ,与对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 )。 (3)应用改进的稀释液 ( 液加 1% O.E.P) ,细管法比颗粒法冷冻精子活率提高近 7个百分点 ,活力提高 6个百分点 (P<0 .0 5 )。(4 )室温预平衡 4h的精子活力和活率都比对照组 (0 h)有显著提高 (P<0 .0 5 ) ,而预平衡 2、6 h的精子活力和活率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 )。 (5 ) 号解冻液解冻后精子活力 (4 2 .9± 2 .6 ) %显著高于 、 、 号解冻液 (P<0 .0 5 )。 (6 )用 5 0℃水浴解冻精子的活力 (4 6 .3± 2 .6 ) %显著高于 39℃ (4 2 .9± 2 .6 ) %和 70℃水浴 (4 1.1± 5 .7) %解冻的精子活力 (P<0 .0 5 )。 (7)精清和 号解冻液     

不同发育阶段小鼠胚胎S、M—期卵裂球的检测以及低温对胚胎细胞DNA合成的影响

利用放射自显影技术检测了小鼠着床前胚胎(4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚)不同发育阶段(早、中、晚)S期和M期卵裂球的比率，并研究了低温(4℃)对小鼠胚胎发育及DNA合成的影响。结果显示，早期和中期4-细胞胚胎S期卵裂球比率较高，分别是75%、92%，没有M期卵裂球，晚期4-细胞胚胎S期卵裂球比率较低(30%)，M期卵裂球比率为11%；早期和中期8-细胞胚胎S期卵裂球比率仍很高，分别是73%、80%，M期卵裂球分别为0、2.5%，晚期8-细胞胚胎S期卵裂球比率增至64%，M期卵裂球减少至9%；早、中、晚期桑葚胚的S期卵裂球比率分别是77%、72%和79%，M期卵裂球的比率分别是5%、3%和3%；早、中、晚期囊胚的S期卵裂球比率分别是78%、74%和77%，M期卵裂球的比率分别是4%、3%和4%。4℃的低温对小鼠早期胚胎的发育和DNA合成都没有明显影响；4-细胞、8-细胞胚胎和桑葚胚经低温处理及培养后其囊胚形成率和平均卵裂球数分别是62%和(26±6)个、54%和(25±7)个、87%和(34±8)个；4-细胞、8-细胞胚胎、桑葚胚和囊胚经低温处理后S期卵裂球比率分别是97%、77%、70%和74%。     

罗同丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟及其后续发育的影响

观察了卵丘细胞共培养对小鼠生发泡期部分裸露（PNO）和裸卵（NO）成熟和发育能力的影响；分别用小鼠、大鼠、猪的卵丘细胞与小鼠PNO和NO进行了共培养。检测了小鼠PNO和NO的减数分裂能力、生发泡构型、受精和胚胎发育能力。结果，PNO、NO的减数分裂能力显著（P〈0．05）低于卵丘完整复合体（COCs）的减数分裂能力。COCs中SN型卵母细胞比率显著高于PNO和NO中SN型卵母细胞比率（P〈0．05），大部分PNO和NO的卵母细胞核型为NSN型。与对照组相比，与小鼠或大鼠卵丘细胞共培养的小鼠PNO和NO的减数分裂能力没有显著提高，但是与猪卵丘细胞共培养却可以提高小鼠PNO和NO的减数分裂能力。结果表明，猪卵丘细胞能促进小鼠卵母细胞的体外成熟，但并不影响小鼠卵母细胞的受精和胚胎发育。     

猪卵丘扩展与卵母细胞核成熟关系的研究

 以猪卵丘卵母细胞复合体（COC）为实验对象研究了猪卵丘扩展与卵母细胞核成熟之间的关系,结果表明,（1）全程培养均暴露于激素环境中不利于卵丘的扩展;（2）卵丘扩展良好与卵丘扩展不好的卵母细胞核成熟比例无统计学差异（P>005）;（3）去除卵母细胞的COC培养后,卵丘细胞仍然能发生扩展;（4）培养24h后去掉COC的卵丘细胞不仅不影响卵母细胞的核成熟,而且极体完整的卵母细胞数目还显著增多（P<0.01）;但去颗粒细胞组卵母细胞的质膜不如对照组光滑;（5）带有壁颗粒细胞（mural granulosa cell,MGC）的COC扩展情况明显优于不带MGC的,其中含有极体的成熟卵数也显著高于后者（P<0.01）。     

次黄嘌呤对小鼠卵母细胞成熟的抑制作用

试验以小鼠为试验动物,研究了次黄嘌呤(HX)对小鼠卵母细胞减数分裂恢复抑制作用,以期更好地掌握小鼠卵母细胞的成熟机制,提高卵母细胞成熟效率。研究表明,①HX能有效地抑制卵母细胞发生生发泡成熟;②HX作为抑制剂对裸卵成熟的抑制作用是可逆的;③在生发泡抑制期间,卵母细胞胞质并没有成熟。结果显示,次黄嘌呤是一种有效的生发泡破裂抑制剂。     

移植奶牛胚胎冷冻解冻后分割成的 二分胚生产同卵双生犊牛的实验

对解冻后品质优良的A级囊胚进行分割,并将二分胚移植生产同卵双生犊牛。结果表明,9枚A级囊胚切割成18枚半胚,胚胎分割成功率100%（9/9）。单胚移植受体6头,妊娠2头,妊娠率33.3%;双半胚移植6头,妊娠2头,妊娠率33.3%。     

金黄地鼠体外受精的初步研究

实验用ＴＹＨ、Ｔ６两种培养液做为精子获能培养液和受精培养液进行了金黄地鼠的体外受精。用经获能培养的精子分别与具卵丘和去卵丘的卵子进行受精培养。结果在ＴＹＨ中分别得到了２７．５％和３３．３％的受精率。在Ｔ６中得到了４７．２％和２６．３％的受精率；用未经获能培养的精子分别与具卵丘和不具卵丘卵子进行受精培养，结果在ＴＹＨ中得到了４１．８％和７．１％的受精，在Ｔ６中得到了４８．５％和５７．７％的受精率。实验结果说明：（１）适用于小鼠体外受精的培养液Ｔ６和ＴＹＨ并不适合于金黄地鼠，其主要原因是不能使精子有效获能；（２）卵丘细胞的存在有使受精率提高的趋势；（３）来自不同公鼠的精子的受精能力差异很大，进行体外受精时必须严格挑选公鼠