动物前脂肪细胞研究进展

前脂肪细胞是动物脂肪组织的重要组成部分,在动物脂肪组织发育、形成过程中有着重要的作用。其增殖、分化过程调控机制的研究是目前研究的一大热点,对这一调控机制的阐明有助于动物品种的改良,甚至引发人类医学的革命。本文着重总结了动物前脂肪细胞在分化、增殖过程的基因调控作用,并概述了其潜在的应用前景。     

新城疫病毒广东分离株F基因的克隆与序列分析

为研究新城疫病毒(NDV)基因变异情况,用RT-PCR扩增了9个广东分离株的F基因cDNA片段,并将其分别克隆到pGEM-Teasy载体中。序列分析结果表明,上述分离株F基因长度为1 662 bp,编码553个氨基酸,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.1%~99.2%和96.0%~99.8%;但与LaSota、Roakin、F48E9及B1等常见疫苗株的氨基酸同源性仅为87.6%~92.2%。9个NDV分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q/R-K-R-F-I-G119,与平均致死鸡胚时间(MDT)、脑内接种指数(ICPI)等病毒致病力测定结果相符,均属于基因Ⅶ型NDV。     

不同H9N2亚型鸭流感病毒NS1基因克隆和功能进化分析

禽流感病毒（AIV）在高免疫压力情况下会发生变异而逃避免疫系统的监视。其NS1蛋白共有230个氨基酸,其中前73个氨基酸残基以二聚体形式存在,包含了所有RNA的结合活性。NS1的氨基端1—73位是mRNA的结合区,氨基端1—100位是双股RNA依赖性蛋白激酶（PKR）的结合区。PKR抗病毒作用机制如下：病毒侵染宿主细胞时,在宿主干扰素的诱导下,双股RNA与PKR结合,同时真核翻译启动子α亚单位发生磷酸化,导致PKR的激活。激活的PKR能同时抑制宿主细胞和病毒mRNA的翻译,从而最终抑制入侵病毒在细胞中的有效繁殖和扩散。     

马氏珠母贝4种壳色选育系RAPD反应体系优化

旨在筛选出马氏珠母贝RAPD反应的最佳体系,为不同壳色马氏珠母贝种质资源遗传多样性和亲缘关系的研究奠定基础。试验以4种壳色马氏珠母贝为材料,采用SDS法进行闭壳肌的总DNA提取并对影响RAPD扩增效果的因素进行优化。通过单因素优化筛选出最佳的25μL反应体系：10×Taqbuffer2.5μL,DNA2.0ng/μL,Mg^2＋3.0mmol/L,引物0.25μmol/L,0.2mmol/LdNTP,Taq酶1.0U;反应程序：94℃预变性5min,然后进行40个循环：94℃变性45s,39℃退火60s,72℃延伸90s,最后72℃延伸10min,4℃终止反应。结果发现,采用SDS法所提取马氏珠母贝的DNA达到RAPD反应的要求,筛选体系扩增出清晰稳定的多态性条带,可用于对马氏珠母贝遗传育种方面的研究。     

H9N2亚型AIV NS1基因的克隆及其在杆状病毒系统的表达

应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H9亚型毒株NS1基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的NS1基因,通过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切位点将NS1基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9NS1并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9NS1,再将其转染昆虫细胞sf9,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDS-PAGE和WesternBlot检测,H9 NS1基因在sf9细胞中得到了表达,H9 NS1大小约为28kD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性。     

猪圆环病毒Ⅱ型衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达

将PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白在大肠杆菌中融合表达。利用PCR技术扩增猪圆环病毒Cap基因。将Cap基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因（T4噬菌体表面非结构蛋白基因）下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达Cap的表达载体pSOC-Cap。将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导后表达的目的蛋白SOC-Cap进行SDS-PAGE与Western-blot方法检测。表达的SOC-Cap蛋白相对分子质量约28kD,表达量占菌体总蛋白量的22.31%,并具有与PCV2特异性抗体反应的活性。PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达后,表达量较高,并具有免疫活性,有望用于猪圆环病毒II型的诊断和预防。     

异绿原酸A体外抗小反刍兽疫病毒活性及其作用机制研究

【目的】研究异绿原酸A(isochlorogenic acid A,IAA)体外抗小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminant virus, PPRV)的效果及其作用机制。【方法】采用MTT法测定IAA对非洲绿猴肾细胞(verda reno, Vero)的最大无毒质量浓度、半数细胞毒性质量浓度(50%cytotoxic mass concentration,CC₅₀);空斑形成试验测定IAA的半数有效质量浓度(median effect mass concentration,EC₅₀)并计算治疗指数(therapeutic index,TI);MTT法观察IAA对PPRV感染的Vero细胞活性的影响;采用空斑形成试验、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、免疫印迹试验和间接免疫荧光试验观察IAA对PPRV增殖和分布的影响;采用活性氧(reactive oxygen species, ROS)荧光探针、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)比色...     

H5亚型禽流感病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测技术

根据GenBank中H5N1亚型流感病毒HA基因保守区的序列,设计1组对应HA序列6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP反应体系,优化LAMP反应条件,最佳等温扩增反应条件为65℃保温60min。扩增后产物加入核酸染色剂SYBRⅠ和4 mmol/L Mg2+,结果可视。扩增产物可用特异性内切酶KpnⅠ进行酶切鉴定。用已建立的RT-LAMP技术检测临床样品,检测结果与RT-PCR方法一致。RT-LAMP技术整个检测过程只需1~2 h,不需要PCR仪和成像系统,仅需要一恒温水浴锅即可完成试验。通过特异性、敏感性试验,验证了建立的RT-LAMP技术可以作为一种操作简单,灵敏性、特异性高的检测H5亚型禽流感病毒的方法。     

多不饱和脂肪酸在母猪营养中的研究进展

本文综述了多不饱和脂肪酸的营养特性、生理功能及其在母猪日粮中的转运,最后探讨了ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸对母猪生产性能的影响。由于妊娠和泌乳期间母猪的营养和生理状态会直接影响到胎儿和新生仔猪的生长性能和健康,为了提高母猪生产性能、改善胎儿生长发育和仔猪存活率及生长性能,营养学家不仅要重视必需脂肪酸的充分供给,也要重新考虑母猪营养中必需脂肪酸及其衍生物比例的平衡问题。     

鸡Toll样受体的研究进展

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是一种天然免疫分子,它通过识别病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)在其宿主有机体的天然免疫系统中起着重要的防御作用[1].它的结构包括以下3个部分:胞外区、跨膜区和胞内区.