肉鹅巴氏杆菌病的诊治

通过流行病学调查、临床剖检、细菌分离鉴定、生化试验、PCR检测、动物试验和药敏试验对一起鹅巴氏杆菌感染病例进行了确诊,并参考药敏试验结果进行用药治疗,控制疫情。药敏试验结果表明,该巴氏杆菌分离株对菌必治、头孢噻吩、头孢他啶、头孢唑肟和氟苯尼考5种药物较为敏感。     

斑点叉尾鮰暴发性出血溃疡症的病理学研究

【目的】探究两起斑点叉尾鮰Ietalurus punetaus暴发性体表出血溃疡症的发病病因和病理特征。【方法】利用湿片法对鳃组织和体表黏液进行压片,观察寄生虫寄生情况。从发病鱼的肝脏、脾脏和肾脏中分离病原菌,检测细菌感染情况;利用PCR法检测患病斑点叉尾鮰的肝、脾、肾混合组织匀浆中斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)的携带情况。运用组织病理学方法观察病鱼的病理损伤特点,综合分析并推测该病的致病原因。【结果】该出血溃疡症的靶器官主要为脾脏、肾脏、肝胰脏、肠道以及皮肤肌肉。主要表现为严重的血管反应,实质细胞可见肿胀、变性、坏死;而胃、脑和心脏病变较轻,仅有轻微的炎症;鳃丝、眼球和鳔等未见明显病变。所有的患病个体均出现中度至重度出血性坏死性脾炎、中度肾炎、轻度至中度坏死性肝胰腺炎和肠炎。患病斑点叉尾鮰体内未检测到寄生虫、细菌以及CCV。【结论】综合病理学、细菌学和病毒学检测结果,推测此次斑点叉尾鮰暴发性疾病由某种非CCV的病毒感染所致,温度应激可能是引发该病的条件诱因。     

复合微生物制剂对重口裂腹鱼生长、消化酶活性、肠道菌群及水质指标的影响

本试验旨在研究复合微生物制剂对重口裂腹鱼生长、肠道消化酶和菌群以及水质指标的影响.选取健康平均体重(250.00±0.50)g的重口裂腹鱼180尾,随机分成2组(对照组和试验组),每组3个重复,每个重复30尾,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂在基础日粮中添加2‰复合微生物制剂的试验日粮,试验期120 d.结果显示:与对照组相比,饲喂复合微生物制剂可提高重口裂腹鱼的特定生长率和饲料效率,且随养殖时间的增加作用效果越明显;可显著提高前肠、中肠和后肠的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性(P<0.01);可显著或极显著增加前、中、后肠芽孢杆菌、双歧杆菌和乳杆菌的菌群数量(P<0.01或P<0.05);可显著或极显著降低试验中、后期水体中活性磷酸盐和氨氮浓度(P<0.01或P<0.05).由结果可知,复合微生物制剂能改善水质,提高重口裂腹鱼肠道消化酶活性、增加肠道有益菌群数(芽孢杆菌、双歧杆菌和乳杆菌),促进鱼体生长.     

浸泡对浮性饲料粗蛋白含量及水质的影响

在11℃与25℃下,测定养殖池水浸泡浮性饲料24 h后粗蛋白及水体中总氨氮和总磷含量的变化。试验结果表明,随着浸泡时间的延长,饲料粗蛋白逐渐下降,而水体总氨氮和总磷浓度逐渐升高。浸泡4 h,25℃组饲料粗蛋白从初始(29.983±0.262)%降至(12.930±0.339)%,降幅56.9%,极显著高于11℃组的下降幅度(P<0.01),浸泡24 h,2个温度组饲料粗蛋白均下降80%以上。浸泡24h,11℃组和25℃组水体中的总氨氮浓度由初始的(0.135±0.001)mg/L分别增至(0.427±0.003)mg/L和(0.590±0.002)mg/L;总磷含量由初始的(0.075±0.001)mg/L分别增至(1.199±0.002)mg/L和(1.271±0.008)mg/L。建议在养殖过程中,尤其是高温季节,尽量缩短浮性饲料在水中的停留时间。     

大鲵蛙病毒感染大鲵的动态病理损伤及病原的组织分布

本研究旨在观察大鲵在大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)感染过程中组织的动态病理损伤,同时定量检测CGSRV在组织中的动态分布。对大鲵腹腔注射1.0×106.5 TCID50/m L的CGSRV进行人工感染,在感染的0d,3d,5d,7d,9d,13d,16d随机采集3尾,取肝、肾、脾、肺、肠、皮肤、肌肉、脑、心脏和胃等组织,石蜡切片和HE染色对CGSRV感染大鲵的病理损伤过程进行观察,采用SYBR Green q PCR技术对病毒在组织中的动态分布进行定量研究。组织病理结果表明,CGSRV感染导致大鲵多组织器官损伤,其中肝、脾、肾和皮肤肌肉病变严重,为损伤靶器官,且在一些损伤的细胞内见嗜碱性或嗜酸性包涵体。感染后3d肝细胞与肾小管上皮细胞变性,肾间以及肝小叶中央静脉周围淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润;感染后5~7d实质性器官变性、坏死,炎症加重,胃肠道呈卡他性炎。感染后9d表皮细胞坏死、脱落,肌纤维变性、坏死。感染后13~16d肝出现广泛变性、坏死与炎症,脾淋巴细胞数量显著减少,肾小球渗出性-坏死性炎,皮肤肌肉呈出血性坏死性炎和实质性心肌炎。SYBR Green qPCR结果显示,整个感染进程中各组织CGSRV含量呈上升趋势,不同组织中病毒量为2.36×103~1.84×109 copy/mg组织,其中肺、肠、肝、脾、肾和皮肤肌肉含量高,表明CGSRV具有广泛的组织分布特征,但肝、脾、肾、皮肤肌肉为其复制和损伤的靶器官,且病毒分布量与病理损伤程度呈正相关。     

铜对鲤鱼损害的电镜X射线显微分析

用电镜X射线显微分析法,研究铜在鲤（Cyprinus carpio）肝细胞和肾细胞中的分布和相对含量,从细胞水平探讨鲤的铜中毒机理。结果表明,铜进入鲤体内后,在肝细胞、肾细胞的溶酶体中分布最多,溶酶体旁、细胞核次之,细胞质内最少,中毒组与正常组差异显著。鲤中毒后肝细胞核膜扩张、线粒体呈空泡状,溶酶体数量增多、体积增大;肾小管上皮细胞核膜扩张,线粒体肿胀,嵴断裂。     

鲤益生茵筛选及部分菌株对鲤前肠黏液的体外黏附作用

从养殖池、水族箱和健康鲤肠道等分离20株细菌,通过耐热和体外拮抗试验筛选出5株细菌,经生化试验和细菌:16SrDNA测序鉴定为2株芽孢杆菌(Bacillus)、2株肠球菌(Enterococci)和1株柠檬酸杆菌(Citrobacter).进一步采用体外固定鲤前肠黏液蛋白,结合同位素32P标记细菌并示踪的方法,研究来源于鲤肠道的肠球菌和柠檬酸杆菌以及鲤养殖水体中的芽孢杆菌对鲤前肠黏液的体外黏附活性,建立筛选鲤(Cyprinus carpio)益生菌的方法.结果表明,5株细菌均能黏附到黏液体外模型,肠球菌的相对黏附率极显著高于芽孢杆菌与柠檬酸杆菌(P<0.01),柠檬酸杆菌与芽孢杆菌的相对黏附率差异不显著(P>0.05),而肠球菌L2的相对黏附率极显著高于肠球菌E2(P<0.01).研究证明,鱼源的肠球菌对鲤前肠黏液的黏附率高于异源的芽孢杆菌,而且不同种属的肠球菌在黏附能力上也存在差异.     

鲤益生菌筛选及部分菌株对鲤前肠黏液的体外黏附作用

从养殖池、水族箱和健康鲤肠道等分离20株细菌,通过耐热和体外拮抗试验筛选出5株细菌,经生化试验和细菌16S rDNA测序鉴定为2株芽孢杆菌（Bacillus）、2株肠球菌（Enterococci）和1株柠檬酸杆菌（Citrobacter）。进一步采用体外固定鲤前肠黏液蛋白,结合同位素^32P标记细菌并示踪的方法,研究来源于鲤肠道的肠球菌和柠檬酸杆菌以及鲤养殖水体中的芽孢杆菌对鲤前肠黏液的体外黏附活性,建立筛选鲤（Cyprinus carpio）益生菌的方法。结果表明,5株细菌均能黏附到黏液体外模型,肠球菌的相对黏附率极显著高于芽孢杆菌与柠檬酸杆菌（P〈0.01）,柠檬酸杆菌与芽孢杆菌的相对黏附率差异不显著（P〉0.05）,而肠球菌L2的相对黏附率极显著高于肠球菌E2（P〈0.01）。研究证明,鱼源的肠球菌对鲤前肠黏液的黏附率高于异源的芽孢杆菌,而且不同种属的肠球菌在黏附能力上也存在差异。     

拟态弧菌感染黄颡鱼的动态病理损伤及病原分布研究

以1.0×106CFU·m L~(-1)拟态弧菌(Vibrio mimicus)浸浴感染黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco),于第0、第4、第8、第16、第24、第36、第48、第60、第72小时剖杀取样,研究病理损伤及病原菌的体内动态分布。结果显示,皮肤肌肉、鳃、肠道出现病变最早,其中皮肤肌肉损伤最严重。第16小时表皮变性、坏死,鳃上皮肿胀,肠绒毛水肿;第24~第48小时表皮坏死、脱落,真皮严重出血,肌纤维变性、坏死,鳃出血,上皮局部坏死,肠上皮变性与灶性坏死;第48~第72小时皮肤肌肉坏死更严重,形成溃疡灶,鳃灶性坏死。肾、肝、脾与心36 h后相继出现不同程度的淤血、出血,变性和灶性坏死。q PCR检测发现,第4小时即在鳃、肠、皮肤肌肉检出病菌,细菌含量分别为1.3×102CFU·mg~(-1)、2.6×102CFU·mg~(-1)、4.7×102CFU·mg~(-1);鳃与皮肤肌肉中菌量随时间延长而增加,第72小时皮肤肌肉中菌量达到4.5×107CFU·mg~(-1);第24小时后相继在肾、肝、脾、心检出病菌,菌量介于1.9×10~4.7×102CFU·mg~(-1)之间。结果表明皮肤、鳃和肠道是病菌的入侵位点,并在体内多组织、器官分布。     

RNA干扰对大鲵蛙病毒主要功能基因表达及其增殖的影响

采用q PCR与病毒滴度测定观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)对大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)、甲基转移酶(methyltransferases,MTases)、DNA多聚酶(DNA polymerase)基因表达与病毒增殖的影响。结果表明,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能推迟鲤鱼上皮瘤细胞(epithelioma papillosum cyprini,EPC)出现病变,且病变程度也较对照组轻。在各功能基因表达量上,NC-FAM对照组与阴性对照组差异不显著(P0.05);而干扰组的干扰率极显著高于阴性对照组,其中siR-DP-1组siRNA对MCP基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P0.01);siR-MT-1、siR-MT-2组siRNA对MTases基因的干扰率为77%,极显著高于其余组(P0.01);siR-DP-1组siRNA对DNA polymerase基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P0.01)。干扰实验组病毒滴度与NC-FAM对照组和阴性对照组相比也有不同程度的降低。阴性对照组lg TCID50为8.362,NC-FAM对照组lg TCID50为7.848,siR-MCP、siR-MT、siR-DP实验组最低lg TCID50分别为5.764、5.317、5.362。证实RNAi能够抑制CGSRV主要功能基因的表达并影响病毒的复制。