两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对常用的兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测方法,在检测猪血清抗体时的敏感性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的最佳试剂盒。采用上述两种阻断ELISA试剂盒对170份猪血清样品进行ELISA检测。结果表明,两种试剂盒的阳性检出率相差不大,阳性检出率分别为5. 29%和5. 88%。本试验表明:兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于口蹄疫血清学筛选性试验。     

广西部分地区猪群PEDV N基因克隆及序列分析

【目的】了解广西区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染及病毒的遗传变异特点,为更好防控猪流行性腹泻提供科学依据。【方法】应用RT-PCR方法从2012-2016年广西地区25个猪场收集的PEDV病料中扩增出86株PEDV的N基因,并进行序列比对及遗传进化分析。【结果】86株PEDV的N基因核苷酸同源性为94.2%~100.0%,与参考毒株核苷酸同源性为94.1%~100.0%。N基因遗传进化分析显示广西的PEDV可分为2个群,Cluster2由韩国株DR13、日本株83P-5、中国株CH/S以及本研究的GP35-8、LC37-22、LC107-5、LC107-19和LC107-16毒株组成,其他81株毒株属于Cluster 3,包括中国株DX、LJB-03、Hu N、JS-2004-2;Cluster 1和Cluster 4则由其它参考毒株组成。【结论】PEDV是引起广西规模化猪场新生仔猪腹泻的主要病原,广西地区的PEDV流行毒株可分为2个群且其N基因仍然保守。     

A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达、纯化及鉴定

[目的]通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持.[方法]以含A型FMDV VP1基因的重组质粒pMD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩增A型FMDV的VP1基因,构建表达质粒pET-32a-VP1和pGEX-6p-1-VP1,然后转入感受态细胞E.coli BL21 (DE3)中诱导表达融合蛋白.[结果]诱导表达获得的VP1融合蛋白主要以包涵体形式存在,分别经His· Bind和GST· Bind柱层析纯化,SDS-PAGE分析结果表明融合蛋白纯度较高;Western blotting检测分析发现,VP1融合蛋白能与豚鼠抗A型FMDV阳性血清发生特异性结合,但不与豚鼠抗O型和Asia1型FMDV阳性血清反应.[结论]经原核表达及纯化获得的A型FMDV VP1融合蛋白具有良好的特异性和抗原性,可用于易感动物的免疫及血清抗体筛查.     

猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及其3D基因分子特征的分析

采集临床疑似脑心肌炎死亡仔猪的组织作为接种材料,接种于BHK-21细胞系,观察细胞病变（CPE）,并用RT-PCR和间接荧光抗体试验（IFA）进行鉴定,证实分离到1株脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）,命名为GXLC株。应用RT-PCR方法扩增GXLC株的3D基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的3D基因序列进行分析。序列分析结果表明,GXLC株3D基因全长1380 nt,编码460个氨基酸,含有7个抗原表位。同源性分析结果表明,GXLC株与国内外其它EMCV分离株3D基因核苷酸序列的同源性在84.7%～99.7%之间,氨基酸序列的同源性在96.1%～99.6%之间。遗传进化分析结果表明,基于3D基因核苷酸序列绘制的系统进化树可将所有EMCV分离株分成2个群：Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群可再细分为Ⅰa亚群和Ⅰb亚群,其中猪源EMCV在Ⅰ群和Ⅱ群中均有分布,而鼠源EMCV分布在Ⅰ群,人源EMCV分布在Ⅱ群;GXLC株与其它中国分离株均属于Ⅰa亚群。     

γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用

【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况,为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查,共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头,阳性检出率分别为1.15％和1.08％,总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测,发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应,且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时,先以变态反应检疫牛群,再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断,更有利于牛结核病的检测与净化。     

鸭疫里氏杆菌病的防治试验

鸭疫里氏杆菌病又称传染性浆膜炎，以心包炎、肝周炎、气囊炎为特征性病变。它严重危害１～８周龄的小鸭，引起较高的死亡率和生长障碍，给养鸭业造成较大的损失。本病的药物预防效果不明显，病原对一些抗菌素不敏感。污染的场地很难净化，几乎同一场地的每一批鸭都在差不...     

应用PCR方法对广西公猪精液的伪狂犬病、圆环病毒2型和细小病毒混合感染情况的检测

应用PCR技术,2006年对广西11个猪场的公猪精液235头份进行猪伪狂犬病(PRV)、圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)混合感染情况的检测。结果,235份样品中PRV阳性率为5.53%,PCV2阳性率为17.02%,PPV阳性率为13.62%;PRV与PCV2、PPV均存在不同的混合感染现象。结果表明,我区公猪精液PRV、PCV2和PRV带毒情况比较严重,成为当前造成母猪繁殖障碍和规模场猪群发病的主要原因,这将为今后种猪场对PRV、PCV2和PRV的控制与净化工作提供了依据。     

应用PCR技术对广西规模猪场母猪流产病料主要疫病混合感染的流行病学调查

应用PCR和RT-PCR技术,对2005-2006年送检的广西22个规模猪场的母猪流产病料176份进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）混合感染情况的调查。结果,176份病料中检出CSFV阳性样品21份,阳性率11.9%,PRRSV阳性样品37份,阳性率21.0%,PRV阳性样品14份,阳性率8.0%,PPV阳性样品35份,阳性率19.9%;其中有45份样品存在不同程度的混合感染,混合感染阳性率达25.6%。结果表明,我区规模猪场母猪流产病料CSFV、PRRSV、PRV和PPV的感染和混合感染情况比较严重,提示广西近年来母猪发生繁殖障碍性疾病的病因与CSFV、PRRSV、PRV和PPVSV的感染密切相关,是今后广西规模猪场重点防范的主要疫病。     

广西部分种猪场公猪精液中猪瘟和PRRS带毒情况的调查

应用RT-PCR技术,对广西部分种猪场的公猪精液328份进行猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)带毒情况的调查。结果,328份猪瘟病料中检出CSFV阳性样品55份,阳性率16.76%,PRRSV阳性样品38份,阳性率11.59%;其中有14份样品同时检出CSFV和PRRSV,混合感染阳性率达4.27%。结果表明,我区公猪精液CSFV和PRRSV带毒情况比较严重,提示近年来CSFV和PRRSV的发生与日趋复杂化可能与公猪精液带毒传播有关,为今后猪场对CSFV和PRRSV的控制与净化工作提供了科学依据。     

广西当前猪传染病流行特点与防治对策

随着人们生活水平的不断提高,养猪业也得到了快速发展,广西的养猪业由农村散养逐渐向集约化转变,规模化养猪不断增多,生产规模逐渐增大.由于种猪、生猪及其产品频繁流通,忽视防疫工作,特别是广大个体养猪专业户,普遍存在忽视疫病防治工作.另外,广大农村仍以散养为主,各方面的条件较差,给动物疫病防治增加了难度.再有,我区疫病的防控基础还比较薄弱,防疫、检疫和疫病监测手段还不够健全和完善,这些因素造成了猪的疫病发生和传播.笔者结合近年来的从事动物疫病诊断和防治工作,分析了当前广西猪传染病的发生现状和特点,并提出相应的防治对策.