农业昆虫学课程教学改革实践

农业昆虫学是植物保护专业的一门专业骨干课。从培养适合社会需求的专业人才出发,根据农业昆虫学的课程特点,为适应学科的不断发展及植保专业人才培养的需要,提出了调整课程体系和教学内容、改革教学方法和教学手段、加强实践教学的具体措施,取得良好效果。     

农业昆虫学实验教学改革探索

农业昆虫学实验课是农业昆虫学课程的重要组成部分,研究总结了本门课程存在的问题,课程组提出了一系列改革方案,并取得了一定的成效,为昆虫学教学提供了一定的理论依据。     

猪APOE基因外显子4的多态性分析

生物的寿命受到遗传和环境的影响,利用模式生物对衰老相关基因的研究已取得显著成果.母猪利用年限作为一个复杂的适应性性状,与寿命直接相关.母猪的利用年限缩短会导致母猪群的繁殖寿命缩短.本研究根据比较基因组学和生物信息学,以猪APOE基因作为影响母猪利用年限的重要候选基因,研究了长白和大花白两个猪种的APOE基因外显子4的多态性并对不同基因型及基因频率作统计分析.结果表明:猪APOE基因外显子4的第227位碱基发生了C→T转换,这一变异导致相应蛋白质序列中的氨基酸发生了亮氨酸和脯氨酸替换.该位点基因型:大花白CC型频率为42%,CT型频率为30%,TT型频率为28%,而长白猪CC型为100%.长白母猪与大花白母猪的利用年限差异较大,而猪APOE基因外显子4等位基因频率的差异可能说明了两者之间的利用年限差异的原因.     

昆虫学综合实验教学改革的必要性与可行性

基于卓越人才教育培养计划的要求,结合沈阳农业大学植物保护学院昆虫学综合实验的实际情况,分析了课程教学中存在的问题,探讨了昆虫学综合实验教学改革的必要性与可行性。     

猪BMSCs成脂分化中细胞膜钙离子通道、钙敏感受体及成脂定向相关基因表达研究

【目的】研究猪骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)定向分化为脂肪细胞过程中细胞膜上钙离子通道、钙敏感受体(Calcium-sensing receptor,Ca SR)基因及成脂定向相关基因的表达。【方法】从5~7日龄仔猪骨髓中分离纯化出猪BMSCs,诱导猪BMSCs成脂分化。油红O法和三酰甘油法检测细胞分化聚酯状况。在成脂分化不同时间(0、1、2、5和10 d)收集细胞,利用荧光定量PCR检测锌指蛋白423(Zinc finger protein423,Zfp423)、脂肪前体细胞因子(Preadipocyte factor 1,Pref-1)、骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、骨形态发生蛋白4(Bone morphogenetic protein 4,BMP4)、细胞膜钙离子通道及Ca SR基因的mRNA表达变化。【结果】油红O染色和三酰甘油检测结果表明,成功诱导猪BMSCs成脂分化;定量PCR结果显示,在猪BMSCs成脂分化第5天,成脂定向标志基因Zfp423、脂肪前体细胞标志基因Pref-1及促进成脂分化基因BMP2、BMP4的mRNA相对表达量显著提高(P0.05),说明第5天是猪BMSCs成脂定向形成脂肪前体细胞的关键时期;同时,细胞膜上的电压门控钙离子通道亚基电压依赖型α/δ亚型1(Voltage-dependentalpha-2/delta subunit 1,CACNA2D1)、钙释放激活钙通道调节分子1(Calciumr elease-activated calcium channel modulator 1,Orai1)、瞬时受体电位通道传统型1(Transient receptor potential canonical type 1,TRPC1)、瞬时受体电位通道M型7(Transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)、瞬时受体电位通道香草素受体亚型1(Transient receptor potential vanilloid receptor1,TRPV1)基因和Ca SR基因在诱导成脂第5天mRNA相对表达量也显著提高(P0.05),提示细胞膜钙离子通道及Ca SR基因可能参与了猪BMSCs成脂分化过程。【结论】揭示了猪BMSCs成脂分化过程中细胞膜钙离子通道、钙敏感受体及成脂定向相关基因的表达模式。     

成年鸡肝细胞的分离与原代培养

以8~10周龄的雄性黄羽鸡为对象,比较了原位两步胶原酶灌流法、改良的原位两步灌流法及原位一步灌流结合组织块消化法对成年鸡肝细胞的分离效果,同时比较了不同基础培养液对成年鸡肝细胞体外培养的影响。结果表明,采用改良的原位两步灌流法可以获得分离效果很好,均匀一致且活率达90%以上的肝细胞;以Williams’medium E为基础培养液,以1×105个/cm2密度接种,4 h后肝细胞贴壁,随后在含φ=7%新生牛血清的培养液中培养24 h后,肝上皮细胞呈现典型的多角形,核圆透亮,聚集呈岛屿状生长,48 h后增殖旺盛,96 h后基本铺满培养皿底部,出现胆小管样结构,并可维持存活13 d以上。本试验为进一步建立成年鸡肝细胞无血清培养体系,体外研究其功能奠定了基础。     

白僵菌Bb2菌株生物学特性及对小麦蚜虫的毒力测定

白僵菌Bb2菌株菌丝生长和孢子萌发最适温度为25～30℃,最适pH值为5.0～6.0.孢子萌发最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为蛋白胨.测定结果表明,Bb2菌株对两种小麦蚜虫的毒力均达80%以上.     

患腹水病牙鲆病原菌分离、鉴定及病原菌的特性

为确定引起河北北戴河地区养殖牙鲆患腹水病死亡的病原,本实验从患腹水病牙鲆体内分离到3株优势菌,对分离株进行生理生化鉴定和16S rRNA序列比对来确定分离株的生物学地位,进一步通过毒力基因(toxR、vhhA、vhhB)鉴定及组织病理学分析其病理特征,并通过人工回感实验分析分离株毒性。结果显示,通过生理生化实验及16S rRNA序列比对,确定此次从患病牙鲆中分离到的3株菌株均为哈维氏弧菌;经鉴定,3株分离株毒力基因(toxR、vhhA、vhhB)结果均为阳性,病理组织切片结果显示,该分离株对牙鲆多器官(肠、肾脏、脾脏和肝脏)均可造成不同程度的病理损伤,呈全身性感染;人工回感实验显示,菌株BDHYPFS-Y1G对牙鲆的半致死浓度为LD50=5.88×106 CFU/mL,低于自然状态毒性;药敏实验表明,3株分离株均对呋喃妥因高度敏感。本实验确认了此次牙鲆腹水病的病原菌,并初步研究了病原菌致病性以及药物敏感性,以期为牙鲆工厂化养殖疫病防控提供科学依据。     

高盐胁迫对黄河口四角蛤蜊摄食与生长的影响

选取黄河口优势种四角蛤蜊为受试生物,采用半静水实验法研究高盐胁迫对四角蛤蜊摄食与生长的影响,并探讨了高盐胁迫对贝类摄食与生长影响的盐度阈值.结果表明,高盐胁迫对四角蛤蜊的摄食与生长都有显著影响,四角蛤蜊壳长和体重的日均增长量以及适应胁迫后的摄食率均随盐度的升高而逐渐降低;而盐度突变时的摄食率随盐度的增加呈先升高后降低的趋势.通过显著差异性分析,发现显著影响四角蛤蜊摄食的盐度阈值范围为26～28,显著影响生长的盐度阈值范围为22～24,最终确定高盐胁迫对黄河口四角蛤蜊摄食与生长的影响阈值为22～24.     

苹果蠹蛾对高效氯氟氰菊酯的抗性现状、机制及治理策略

苹果蠹蛾Cydia pomonella属鳞翅目卷蛾科,是全球仁果类水果种植地区最重要的果树害虫之一,也是我国重大农业入侵物种,对全球水果生产造成严重威胁。当前主要采用高效氯氟氯氰菊酯等杀虫剂对苹果蠹蛾进行防治,杀虫剂的频繁使用导致其对高效氯氟氰菊酯产生了抗性。针对苹果蠹蛾对高效氯氟氰菊酯的抗性问题,该文综述了全球苹果蠹蛾种群对高效氯氟氰菊酯的抗性现状,指出由编码细胞色素P450（cytochrome P450,P450）、羧酸酯酶（carboxylesterase,CarE）和谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase,GST）的解毒酶基因过表达导致代谢能力增强是其最普遍的抗性机制,提出合理的抗性治理策略,并对苹果蠹蛾的绿色防控进行展望。