中国美利奴成母羊促甲状腺激素受体基因的克隆与组织表达

[目的]探讨绵羊TSHR基因序列及组织表达特征,为进一步研究TSHR在绵羊季节性繁殖中作用的分子机理奠定基础.[方法]利用RT-PCR技术克隆绵羊TSHR基因,并对序列进行生物信息学分析;采用半定量RT-PCR技术检测TSHR在绵羊不同组织的表达情况.[结果]以中国美利奴羊卵巢组织cDNA为模板,获得了3 276 bp的TSHR cDNA序列,包括全部编码区序列(Coding Sequence,CDS)长2 295 bp,编码764个氨基酸.TSHR蛋白结构经预测发现存在多个磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点.半定量RT-PCR结果显示,绵羊TSHR基因在所检测组织中均有表达,其中在下丘脑、松果体和垂体中呈高丰度表达,在甲状腺、子宫等组织呈中等丰度表达.[结论]从绵羊卵巢组织中克隆到TSHR基因并进行了序列分析;TSHR基因在绵羊各组织中广谱表达,但在下丘脑、松果体、垂体、甲状腺中表达水平较高,提示TSHR在绵羊季节性繁殖等重要生理活动的神经内分泌调节过程中发挥重要作用.     

试析风险投资的运作流程

风险投资是以冒高风险、追求高收益为特征的一种新型投资行为,通过分析风险投资的4个运作阶段：选择投资项目、谈判进入风险企业、参与风险企业管理、退出风险企业来揭示风险投资的基本特征。     

规模化猪场中生长育肥猪的饲养管理

对于规模化猪场,生长育肥期的生产成绩可能决定着猪场的盈亏,但多数情况下,猪场往往侧重于种猪和仔猪的投入,而忽视对生长育肥猪的投入,导致其生产性能下降和疾病发生率的增加,影响了猪场的经济效益。通过加强生长育肥猪的饲养管理,改善营养和合理使用药物等,可以提高其猪只的生产性能,降低发病率,主要措施有以下几方面。     

夏季北黄海贝类养殖区环境因子、长牡蛎糖原和免疫指标变化的调查研究

为解析夏季环境胁迫和长牡蛎（Crassostrea gigas）机体响应特征,实验针对2021年北黄海夏季高温降雨期的长牡蛎养殖海区开展了2次调查研究和对比分析。结果显示,7月份海区表层水温分别为25.3 ℃和24.9 ℃,盐度分别为26.41和27.87;表层海水中硅藻丰度分别为3.6×103和3×103 个/L,低于往年平均水平,甲藻多样性增加,表层海水中细菌的总丰度分别为2.10×109和2.77×1010 拷贝/L,弧菌丰度分别为3.37×108和5.40×108 拷贝/L;长牡蛎肝胰腺糖原含量分别为40.96和31.58 mg/g、闭壳肌糖原含量分别为6.63和8.91 mg/g;鳃MDA含量分别为13.74和8.69 nmol/mg prot、鳃T-AOC分别为0.46和0.77 U/mg prot;海区养殖长牡蛎血淋巴细胞中CgIL17-5和CgTNF-1的mRNA表达量在第一次调查时相对室内暂养长牡蛎均剧烈升高;血淋巴细胞中CgCaspase3的mRNA表达量升高但差异不显著。综上,2021年北黄海贝类养殖区在经历6—7月夏季高温降雨期后出现水温升高和盐度降低现象,硅藻丰度较往年平均水平下降而甲藻多样性增加,细菌总丰度较入夏前水平降低而弧菌丰度显著升高。与室内暂养对照组长牡蛎相比,海区养殖长牡蛎的糖原含量下降,并发生轻度氧化应激。研究结果有助于我们进一步理解夏季养殖环境的变化规律和长牡蛎机体响应特征,为预防夏季大规模死亡发生提供理论依据和参考。     

实时光电微生物检测技术在乳品质控中的应用

对酸奶中的霉菌酵母菌同时采用实时光电微生物检测系统与国标法进行检测,分析比较两种检测方法所得的检测数据.本实验利用实时光电微生物检测系统的霉菌酵母检测试剂瓶对市售酸奶及阳性添加样品采用半定量的检测方法进行快速检测,能快速地检测到目标菌存在,继而给系统提前预警.结果表明,当霉菌酵母菌含量在10～3.5×105CFU/mL时,实时光电微生物检测方法在1.8～33h内预警.当平板计数法的检测结果小于10CFU/mL时,实时光电微生物检测方法的检测时间均大于33h,在仪器设置运行48h内未出现预警现象.实时光电微生物检测技术与国标平板法两种检测方法的检测结果相当吻合.应用实时光电微生物检测技术能快速便捷,对酸奶产品中霉菌酵母菌进行监测,其检测速度和灵敏度均能满足工厂实验室的快速筛选检测,还利于产品的关键控制点的监测.     

不同C:N条件下一株溶藻弧菌对不同种类氮源的吸收特性

在不同C:N(5、10、15、20)条件下研究了一株溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Z5对单一氮源(有机氮源、NH₄-N、NO₂-N)及混合氮源(有机氮源与NH₄-N、有机氮源与NO₂-N、NH₄-N与NO₂-N)的吸收利用特性及蛋白酶、谷氨酰胺合成酶(GS)和亚硝酸还原酶(NiR)等3种氮代谢相关酶的活力响应。研究结果表明, 溶藻弧菌Z5对有机氮与无机氮的吸收均受到环境中碳含量的影响, 在C:N=20时, 对NH₄-N和NO₂-N的吸收率分别是C:N=5时吸收率的3.39倍和2.25倍。在C:N=15和C:N=20的水平下, 溶藻弧菌Z5对NH₄-N和NO₂-N的吸收均没有显著性差异(P>0.05)。溶藻弧菌(Z5)吸收利用NH₄-N和NO₂-N的途径分别为NH₄-N→细菌菌体蛋白和NO₂-N→NH₄-N→细菌菌体蛋白。在高C:N条件下, 溶藻弧菌Z5对无机氮源(NH₄-N和NO₂-N)的吸收增强, 细菌菌体蛋白中来自NH₄-N和NO₂-N的量分别由C:N=5时的25.0%和19.4%上升到C:N=20时的41.3%和43.0%。GS酶活力受NH₄-N调控明显, 相比之下, 蛋白酶和NiR酶受氮源种类调控不明显。

     

基于逆向工程的拖拉机造型CAD混合建模

针对国产拖拉机造型设计的特点,提出了基于逆向工程的拖拉机造型CAD混合建模方法.依据拖拉机造型三维效果图,建立了其油泥模型;采用Comet 250与AICON 3D Studio相结合的方法,基于特征进行点云数据的测量及处理,从测量数据中提取可重新进行设计的特征、约束及设计意图,在对数据进行分析的基础上,制定了建模方案...     

前置挖掘式小型履带川麦冬收获机的设计与试验

针对川麦冬收获时根土分离难度大、易损伤茎苗等问题,设计了一种前置挖掘式小型履带麦冬收获机,由挖掘装置、输送筛选装置、液压装置和行走装置等组成。为确定收获机的可行性,根据三因素三水平响应面试验法构建入土角度、振动链的输送速度、振动轮的振动频率对麦冬收获损伤率、明茎率和带土率的回归模型,优化回归模型得到最优参数组合,即机器的前进速度为0.1m/s、入土角度为20°、振动链的转速为190r/min、振动轮的振动频率为600Hz。试验结果表明：在最优参数组合下,麦冬收获损伤率为2.94%,明茎率为96.7%,带土率为12.5%,达到了较为理想的收获效果。研究可为麦冬收获机的完善和作业参数优化提供参考。     

中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建

【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因,为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA文库,并对差异基因进行测序和生物信息学分析;应用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。【结果】①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA文库中分别获得153和143个ESTs,其中分别包括5和4个未知功能的ESTs,推测可能是新基因;对部分已知功能ESTs进行了GO聚类分析、通路分析和蛋白互作分析,结果显示粗、细毛羊之间存在一定差异;②文库中的3个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin和KRTAP3-2均能在皮肤中特异性地高表达,其中KRTAP8-2和Trichohyalin基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨克羊的3.45和2.07倍,而KRTAP3-2基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87倍。【结论】成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA文库,初步筛选出一批可能影响羊毛性状的差异表达ESTs。     

TCF7基因增强子区域一处SNP在三尾型极端差异的绵羊群体中的多态分析

[目的]检测尾型极端差异的阿勒泰羊、湖羊和藏羊三群体中TCF7基因增强子一处SNP是否存在分化现象,从而确定该SNP是否可作为一个有效地筛选脂尾与瘦尾性状的分子标记.[方法]对三品种绵羊286份基因组进行目标SNP片段的扩增,并采用PCR-RFLP方法对以上样本扩增片段进行酶切分型,最后采用卡方检验的方法验证各基因型在各群体中的Hardy-Weinberg平衡性.[结果]高效扩增出所有样本含该SNP DNA扩增,经MfeⅠ酶切分型后共鉴定出了三种基因型(CC、TT和CT),其中CC基因型在瘦尾藏羊群体中的百分比高达80.3;,是脂尾型阿勒泰羊与湖羊的两倍以上.C/T等位基因的比率显示藏羊群体中这一比值分别为其他两种脂尾型绵羊品种的8倍,提示T等位基因可能与脂尾性状相关.[结论]该SNP可作为脂、瘦尾羊选育的一个分子标记.