绵羊Fsp27基因5'-UTR区碱基突变与 尾脂沉积能力的关联性

[目的]明确绵羊脂肪特异蛋白27基因(Fsp27)5'端非编码区(5'-UTR)g.16767527位点和g.16767779-16767780位点突变与其尾脂沉积能力的关联性,为低脂肪绵羊品种选育提供理想的分子标记,提高低脂肪绵羊品种改良选育效率.[方法]以5个不同尾脂沉积能力的绵羊品种为研究对象,包括脂尾型绵羊品种阿勒泰羊,短脂尾型绵羊品种小尾寒羊和湖羊,长瘦尾型绵羊品种中国美利奴细毛羊和萨福克羊,采用PCR-SSCP结合基因测序对绵羊Fsp27基因5'-UTR区碱基突变情况进行检测,并分析相关突变与绵羊尾脂沉积能力的关联性.[结果]绵羊Fsp27基因5'-UTR区g.16767527位点为C/A突变,在所检测的绵羊群体中均存在3种基因型(CC、CA和AA),但在不同尾脂沉积能力绵羊品种群体中的基因型频率存在明显差异:阿勒泰羊群体中以CC基因型为主,基因型频率为0.869;小尾寒羊和湖羊群体中以CA基因型为主,基因型频率分别为0.698和0.628;中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体则以AA基因型为主,基因型频率分别为0.616和0.833.g.16767527位点的基因型分布在阿勒泰羊、小尾寒羊和湖羊群体中极显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(PHWE<0.01),在萨福克羊群体中显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(PHWE<0.05).g.16767779-16767780位点为双碱基突变,对应为GG/GG、GG/TC和TC/TC基因型;在尾脂沉积能力强的阿勒泰羊、小尾寒羊和湖羊群体中,g.16767779-16767780位点以TC为优势等位基因,对应的等位基因频率分别为0.862、0.954和0.927;在尾脂沉积能力差的中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体中则以GG等位基因为主,其等位基因频率分别为0.980和0.983.这2个位点的突变均对绵羊Fsp27基因5'-UTR区二级结构产生明显影响.[结论]绵羊Fsp27基因5'-UTR区g.16767527位点的C/A突变和g.16767779-16767780位点的GG/TC突变与其尾脂沉积能力密切相关,可作为分子标记应用于低脂肪绵羊品种的辅助选育.     

TCF7基因增强子区域一处SNP在三尾型极端差异的绵羊群体中的多态分析

[目的]检测尾型极端差异的阿勒泰羊、湖羊和藏羊三群体中TCF7基因增强子一处SNP是否存在分化现象,从而确定该SNP是否可作为一个有效地筛选脂尾与瘦尾性状的分子标记.[方法]对三品种绵羊286份基因组进行目标SNP片段的扩增,并采用PCR-RFLP方法对以上样本扩增片段进行酶切分型,最后采用卡方检验的方法验证各基因型在各群体中的Hardy-Weinberg平衡性.[结果]高效扩增出所有样本含该SNP DNA扩增,经MfeⅠ酶切分型后共鉴定出了三种基因型(CC、TT和CT),其中CC基因型在瘦尾藏羊群体中的百分比高达80.3;,是脂尾型阿勒泰羊与湖羊的两倍以上.C/T等位基因的比率显示藏羊群体中这一比值分别为其他两种脂尾型绵羊品种的8倍,提示T等位基因可能与脂尾性状相关.[结论]该SNP可作为脂、瘦尾羊选育的一个分子标记.     

中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建

【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因,为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA文库,并对差异基因进行测序和生物信息学分析;应用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。【结果】①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA文库中分别获得153和143个ESTs,其中分别包括5和4个未知功能的ESTs,推测可能是新基因;对部分已知功能ESTs进行了GO聚类分析、通路分析和蛋白互作分析,结果显示粗、细毛羊之间存在一定差异;②文库中的3个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin和KRTAP3-2均能在皮肤中特异性地高表达,其中KRTAP8-2和Trichohyalin基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨克羊的3.45和2.07倍,而KRTAP3-2基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87倍。【结论】成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA文库,初步筛选出一批可能影响羊毛性状的差异表达ESTs。     

转基因克隆绵羊的亲子鉴定

利用IASG上公布的绵/山羊的11个微卫星标记,鉴定转基因克隆羊与供体细胞系和代孕母羊间的亲子关系。结果表明转基因克隆羊与供体细胞系之间11个微卫星标记的基因型一致,而与代孕母羊基因型差异很大,由此确定转基因克隆羊来源于供体细胞系。     

绵羊BMPR-IB基因作为多胎性能的候选基因在肉用多胎品种选育中的应用研究

以中国美利奴多胎细毛羊和南非肉用细毛羊为亲本，以BMPR-IB基因作为多胎性能的候选基因，进行多胎肉用品种的选育。通过对其后代多胎基因型检测分析表明：多胎这一性状的选择，符合孟德尔遗传规律，从而验证其多胎性状由一对多胎基因(FecB)控制。通过BMPR-IB基因分子标记辅助选择，多胎性状的选择仅需3个世代(3～6年)的时间就可以达到要求，对于肉用这一性状的选择，还有待于进一步选配选育。     

绵羊X染色体59194976位点多态分析及其与尾（臀）脂性状相关性研究

尾脂沉积能力在脂尾型绵羊和瘦尾型绵羊问存在很大的差异,但其沉积脂肪的遗传特性与分子机制仍不明晰。为此,本研究选择尾型极端差异的阿勒泰羊（巨型脂臀）、湖羊（短脂尾）和黑萨福克羊（长瘦尾）,采用PCR-RFLP方法检测绵羊X染色体59194976位点多态性,分析其与尾（臀）脂沉积能力的相关性。结果表明：在阿勒泰羊群体中G等位基因属优势等位基因,其两等位基因比值（G／A）分别是湖羊和黑萨福克羊的6倍和68倍,且G等位基因在阿勒泰羊中趋于纯合。卡方检验结果表明,阿勒泰羊在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（p〉0．05）,而湖羊和黑萨福克羊在该位点均处于Hardy-Weinberg极不平衡状态（p〈0．01）。以上结果提示,绵羊x染色体59194976位点SNP可作为理想的分子标记应用于高、低脂绵羊品种选育。     

阿勒泰羊Fsp27基因5'UTR区g.16767667位点G>A突变与其尾脂沉积能力关联性分析

Fsp27基因在动物脂肪代谢过程中发挥着重要的调控作用。为了研究Fsp27基因5'UTR区g.16767667位点G>A突变与绵羊尾脂沉积能力的关联性,以尾脂沉积能力极强的脂尾(臀)型绵羊品种阿勒泰羊(Ovis aries)为研究对象,采用PCR-SSCP及测序技术研究了该SNP位点不同基因型在阿勒泰羊群体中的分布,并通过比较不同基因型个体尾形数据的差异,评估其与阿勒泰羊尾脂沉积能力的关联性。结果表明,在阿勒泰羊群体中Fsp27基因5'UTR区g.16767667位点G>A突变可以检测到GG、AG和AA三种基因型,基因型频率分别47.2%、38.4%和14.4%;卡方检验结果表明该位点在阿勒泰羊群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。通过250只不同基因型阿勒泰羊尾形数据对比发现,GG和AG基因型个体脂尾(臀)的长、宽和厚3项数据均显著高于AA基因型个体(P<0.05),GG基因型个体亦略高于AG基因型个体,但差异不显著(P>0.05),推断G等位基因有利于阿勒泰羊尾脂沉积。     

绵羊生长激素基因的克隆、序列分析及真核表达

利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从新疆阿勒泰×中国美利奴杂交F1代绵羊脑垂体总RNA扩增出编码绵羊生长激素(oGH)基因序列,T-A克隆入载体质粒pT-Adv.测序结果表明所克隆的oGH cDNA在重组质粒的阅读框架是正确的,共含有654个碱基,其核苷酸序列与已知的3条绵羊序列相比共有7个碱基的差异,除第472位和529位的碱基差异能够引起氨基酸序列的变化外,其余均为无义突变,说明从新疆阿勒泰×中国美利奴杂交绵羊中获得的羊生长激素存在有不同品系间的基因多态性变化.将重组质粒pT-Adv/oGH cDNA定向克隆入真核表达载体质粒pcDNA3.1/myc-HisA,构建成重组oGH基因的真核表达载体pcDNA3.1A/oGH.利用脂质体转染法,将重组质粒导入到小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞中,经间接ELISA检测,证明在转染细胞的上清中存在有目的基因产物的外泌表达.     

岩藻多糖的理化性质、生物学功能及其在畜禽生产中的应用

岩藻多糖主要来源于褐藻，是一类含有岩藻糖和硫酸基团的多糖，具有抗氧化、抗炎、抑菌、增强免疫力等作用。近年来研究发现，岩藻多糖可调控动物消化道微生物群落结构，促进其发育，在提高营养物质消化率及动物生产性能方面发挥着重要作用。作为一种绿色安全无害的添加剂，岩藻多糖在畜禽生产中应用的研究越来越多。在查阅相关文献并结合本团队前期研究的基础上，本综述介绍了岩藻多糖的理化性质，归纳了岩藻多糖的生物学功能，并重点总结了岩藻多糖在畜禽生产中的应用，以期为进一步开发利用岩藻多糖提供参考。     

阿勒泰羊臀脂沉积性状4个候选基因的表达及分析

阿勒泰羊的抗寒性能与其肥硕的尾脂(臀脂)高度相关。试验旨在通过检测影响脂肪沉积相关基因THRSP、CEBPα、PRKAG3和SREBF1的组织表达模式,期望寻找到影响阿勒泰羊臀脂沉积的关键基因,为进一步阐明绵羊臀脂沉积的分子调控机理提供参考。采集3只3岁健康阿勒泰母羊心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮下脂肪、尾脂8个组织,运用荧光定量PCR技术对上述基因在以上各个组织中的表达情况进行分析。结果表明,THRSP和CEBPα基因在阿勒泰羊肝、皮下脂肪和尾脂中的表达量显著高于其他组织(P0.01),暗示此2个基因可能与脂肪的生成密切相关。PRKAG3基因在脂肪合成组织中低表达(P0.01),提示其可能与脂肪的分解密切相关。研究结果为进一步阐明阿勒泰羊臀脂消长的生物学现象提供了科学思路。