真鲷虹彩病毒自然感染杂交石斑鱼“褐龙斑”的组织病理分析

褐龙斑是雌性褐石斑鱼(Epinephelus bruneus)和雄性鞍带石斑鱼(E. lanceolatus)杂交产生的子代。作为杂交石斑鱼的新品种，国内外尚没有褐龙斑疾病的报道。2017年7月，某养殖场褐龙斑出现急性死亡，10 d内累积死亡率高达80%。现场调查发现，病鱼外观无明显异常，但反应迟钝，伏底死亡。临床检查和剖检可见脾和肾严重肿大、易碎。组织病理切片观察发现，各组织中存在数量不等的嗜碱性、细胞质均一、直径为10~15 µm的肿大细胞。超薄组织切片中发现，肿大细胞胞质内存在大量直径为130~150 nm的虹彩病毒样颗粒。使用特异性的PCR引物，从病鱼脾、头肾等组织中均检测到真鲷虹彩病毒(Red seabream iridovirus, RSIV)的高强度感染。测定了该病毒主要衣壳蛋白(Major capsid protein, MCP)基因1362 bp的全长编码区，构建了19种(株)虹彩病毒系统发育树，结果显示，该病毒属于虹彩病毒科肿大细胞病毒属RSIV类群。本研究首次描述了褐龙斑虹彩病毒病的组织病理特征，揭示了褐龙斑是RSIV新的敏感宿主，为杂交石斑鱼病毒病的诊断与防治提供了重要的参考依据。     

真鲷虹彩病毒引起养殖斑石鲷大规模死亡的研究

2017年8月，山东省烟台市某养殖场网箱养殖的斑石鲷(Oplegnathus punctatus)幼鱼突然发病并大量急性死亡。疾病调查显示，养殖海域水温为26℃~28℃；病鱼为4~5月龄，全长为(16.3± 1.6) cm，体重为(156.9±37.0) g；80万尾斑石鲷幼鱼2周内累积死亡率达90%以上，经济损失惨重。临诊检查发现，病鱼体表无明显损伤，但活力差、呼吸急促。剖检可见病鱼脾肿大、质地脆、易碎，肾糜烂，肝有出血点。组织切片观察发现，病鱼脾、肾造血组织中可见许多直径约为20 μm的肿大细胞，肿大细胞内含有大量直径约为145 nm、呈六边形的病毒颗粒。用过滤除菌的病鱼脾组织匀浆液，腹腔注射感染健康斑石鲷，感染组14 d内累积死亡率达95%。人工感染病鱼表现出与自然发病鱼类似的外观症状，且在脾、肾组织切片中也可观察到大量的肿大细胞及相似的病毒粒子。使用特异性PCR引物，从自然发病鱼和人工感染病鱼的肝、脾和肾组织中均检测到鱼类虹彩病毒的高强度感染。克隆、测序得到了1362 bp的病毒主要衣壳蛋白基因(MCP)，序列比对显示，该病毒的MCP序列与真鲷虹彩病毒(RSIV) RIE12-1的相应序列完全相同。构建的虹彩病毒系统发育树也显示，该病毒属于虹彩病毒科肿大细胞病毒属RSIV类群，是RSIV的一个分离株。本研究首次证实RSIV可以导致斑石鲷大规模死亡，研究结果为诊断和防治斑石鲷病毒病提供了重要参考。     

凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)病原分离鉴定及其致病性分析

本研究从患急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中分离到一株优势菌,编号为20160303005-1,通过16S rRNA和分子伴侣蛋白groEL基因序列分析,并结合生理生化特征,将该细菌鉴定为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),其血清型为O1:KUT(K untypeable)。基因分析结果显示,该菌株携带可引起对虾AHPND的相关毒力蛋白基因pirA~(VP)和pirB~(VP),但不携带副溶血弧菌临床菌株毒力基因:耐热直接溶血毒素(Thenmostable direct hemolysin,tdh)和相对耐热直接溶血毒素(TDH-related hemolysin,trh)基因。菌株对凡纳滨对虾具有较强的致病性,浸泡感染的半数致死剂量(LD_(50))为7.96×10~3 CFU/ml。对虾急性感染后,6 h肝胰腺颜色变浅,肠胃变空;9 h肝胰腺呈浅白色,萎缩变小。9 h死亡数过半,24 h全部死亡。组织病理学分析显示,感染后对虾肝胰腺小管崩塌,上皮细胞严重脱落,呈现出典型的AHPND病理症状。药敏实验结果显示,该菌对庆大霉素、环丙沙星和头孢他啶等16种药物敏感,对阿莫西林、替卡西林和头孢噻吩等5种药物表现为耐药。上述研究可为该病原的流行病学及药物防控研究提供基本数据。