山羊卵母细胞的显微受精及胚胎培养

采用胞质内精子注射（ICSI）构建山羊显微受精胚，在两种培养液（CR1aa和SOFaa）与颗粒细胞共培养条件下，分别添加不同浓度的牛卵泡液（BFF）和胎牛血清（FBS），研究其对山羊卵母细胞显微受精胚体外发育的影响。结果表明：①在CR1aa培养液与颗粒细胞共培养条件下，添加10％BFF的ICSI胚的囊胚发育率最高（22．2％），显著高于添加5％（13．1％）和15％（2．7％）组。②在SOFaa培养液与颗粒细胞共培养条件下，添加10％BFF的ICSI胚的囊胚发育率（25．1％）显著高于添加5％（12．9％）和15％（3．0％）组。③在两种培养液中，分别添加10％BFF和10％FBS，ICSI胚的囊胚率分别为22．6％和26．9，5．8％和6．1％。表明：CR1aa和SOFaa两种培养液都适宜山羊的1CSI胚体外培养；在早期胚胎培养中，添加10％BFF可显著提高ICSI胚的囊胚发育率：添加10％BFF比添加10％FBS对提高早期胚胎培养质量更为有效。     

山羊超数排卵和同期发情研究

用ＦＳＨ（以４种程序注射）配合ＬＨ和前列腺素对安哥拉山羊和奶山羊进行超排处理，结果表明：ＦＳＨ各给予方式的超排樟没有显著差异（Ｐ〉０．０５）；安哥拉山羊对超排的反应弱于奶山羊（Ｐ〈０．０５）；超排后回收的可用卵母细胞数显著高于可用胚胎数（Ｐ〈０．０１）。１５－甲基ＰＧＦ２α和氯前列烯醇对奶山羊的同期发情率基本一致；但二者从注以发情的间期具有显著差异＊（Ｐ〈０．０５）。注射前列腺素的时间显著影响诱导     

兔关节软骨细胞的获取及培养

试验采用组织块法和酶消化法获取兔关节软骨细胞,并对这两种方法取得的效果进行对比分析。在酶消化方法上,运用Ham-F12培养液和无Ca2 、Mg2 的PBS液配制2g/L的Ⅱ型胶原酶进行消化,同时结合酶阶段性消化法收获软骨细胞,对细胞成活率进行测定。对最终收获的细胞进行培养观察,测定软骨细胞的分泌活性。结果表明:在获取细胞的数量上,酶消化法明显优于组织块法;在成活率比较试验中,Ham-F12配制组明显高于常规的PBS液(无Ca2 、Mg2 )配制组,两组之间存在显著差异(P<0.05);对体外培养的软骨细胞进行鉴定,结果显示软骨细胞仍具有较强的分泌基质能力。在此试验消化分离体系下,可得到大量的、高活性的软骨细胞,且在体外能维持良好的生长特性。     

山羊腔前卵泡的分离

采用两种方法分离山羊卵巢腔前卵泡。方法１（Ｍ－１）：将卵巢剪成碎块（＜３ｍｍ）,用０１％胶原酶消化处理,吸管吹打,离心洗去胶原酶并置入网筛内过筛后检卵。方法２（Ｍ－２）：用组织切碎机将卵巢切成碎块,经吸管吹打制成的组织悬液置入网筛内过筛后检卵。将不同年龄山羊对称分成两组,Ｍ－１和Ｍ－２分离的腔前卵泡头均数分别为１１６４和１３８３个,其中正常卵泡比例分别为２９６％和２７４％,差异不显著（ｐ＞００５）。采用Ｍ－１分离初情期前山羊腔前卵泡效果最佳,平均每只羊可获得１６０８２个腔前卵泡,其中正常卵泡数平均为４９３６个;而在成年山羊则分别为３５００和６６７个（ｐ＜００１）。采用Ｍ－２分离成年山羊腔前卵泡头,其效果明显优于Ｍ－１（ｐ＜００５）。     

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型、Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞。２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代培养的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２～３代后,可获得纯化的成纤维细胞。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。胎儿和皮肤成纤维细胞可分别传至第１３代与第１１代,传代后染色体数目不变。     

体外成熟对牛卵母细胞孤雌激活后发育潜力的影响

本试验在卵母细胞体外成熟的研究基础上,研究了培养用水、卵泡液和成熟时间对卵母细胞体外成熟及孤雌激活后发育潜力的影响.结果表明(1)将卵母细胞分别于蒸馏水和Milli-Q超纯水配制的成熟培养液中培养22～24 h, 孤雌激活后, 卵裂率无显著差异(P>0.05); 但孤雌卵在超纯水配制的胚胎培养液中培养,囊胚发育率为22.3%, 明显高于在蒸馏水配制的培养液中的囊胚发育率14.1%(P<0.05).(2)在成熟培养液中添加10%、20%卵泡液,成熟卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率(32.3%, 30.9%)明显高于添加5%和0%卵泡液组的囊胚发育率(21.8%, 22.7%,P<0.05).卵母细胞在添加20%卵泡液的培养液中成熟培养,孤雌激活后囊胚孵化率明显低于添加0、5%、10%卵泡液组的囊胚孵化率(P<0.05).(3)成熟28 h或30 h的卵母细胞孤雌激活后,其囊胚发育率(30.5%或29.4%)明显高于成熟24 h或26 h组的囊胚发育率(20.5%或22.1%,P<0.05).     

母体免疫因素与早期胚胎死亡

母体免疫识别失败是引起早期胚胎死亡的主要原因。一些参与正常妊娠活动的免疫细胞,如自然杀伤细胞、巨噬细胞及中性白细胞等的过量集结或活性加强可引起早期胚胎死亡。肿瘤坏死因子、干扰素γ、白细胞介素－２等细胞因子的过量表达亦可导致早期胚胎死亡。原癌基因ＡＰ－１家族、ｒａｓ家族及ｖ－ｅｒｂＡ、ｖ－ａｂｌ、ｃ－ｍｙｃ等的表达量增加可引起巨噬细胞或淋巴细胞的活化,而参与早期胚胎死亡过程。     

基于FCFF的公司价值评估:DCF方法的应用

企业价值评估是现代价值管理领域的重要项目,本文选用现金流折现(DCF)模型中公司自由现金流(FCFF)模型,以上市公司价值的价值评估为实证研究,估算出公司价值并与实际价格相对比,并进一步说明DCF模型在我国企业价值评估中的适用性。     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的采集和体外成熟

酶消化配合机械分离，采集１０日龄小鼠腔前卵泡中的卵母细胞一颗粒细胞复合作（ＯＧＣｓ），以自制的胶原膜为底物，在 ＭＥＭ培养液中培养 １０ ｄ．卵母细胞－颗粒细胞复合体由 １１０． ５±１８． ６ μｍ增长到 １８４．４±６０． ６ μｍ，卵母细胞由 ５６． ２５±２． ０ μｍ增长到 ８２． ０±１０． ５μｍ．３６．７％的ＯＧＣ．具有５层以上颗粒细胞，其中９．１％放出第一极体。     

鼠、兔核质杂交及早期胚胎发育的研究

以2~8细胞期鼠胚细胞为供体核,选用注射hCG后15h、17h的兔卵母细胞为受体胞质,施加1.6kv/cm、160、两次脉冲的电场条件,间隔20min,融合液为含Ca、Mg的0.3mol/L甘露醇,适于鼠、兔种间EOBC的融合激活。小鼠2-细胞、4-细胞期胚细胞与兔去核卵母细胞融合率高于8-细胞期胚细胞,分别为83%、80%及62.5%,桑囊胚发育率差异不显著。体细胞共同培养系统和Taurine能显著提高鼠、兔核质杂交胚的体外发育能力。