兔出血症病毒TP株VP60基因DNA免疫小鼠的实验研究

为评价兔出血症病毒(RHDV)VP60基因在小鼠体内诱导产生体液免疫和细胞免疫情况,本研究构建了RHDV VP60基因的真核表达质粒pcDNA-VP60,并将其免疫小鼠。利用ELISA方法检测特异性抗体和小鼠外周血细胞因子水平,MTT法和流式细胞术(FACS)检测小鼠外周血T淋巴细胞增殖情况和T淋巴细胞亚群的动态变化。抗体检测结果显示,重组质粒免疫组抗体水平在免疫后5周～6周达到峰值,而且与对照组比较差异显著(p<0.05);细胞因子检测结果显示,重组质粒免疫组血清中IFN-γ、IL-2、IL-4因子水平随免疫时间延长而升高,并且能够维持较高水平,与对照组比较差异显著(p<0.05);T淋巴细胞检测结果显示,重组质粒免疫组T淋巴细胞明显增殖,CD4+T淋巴细胞数量免疫后明显增高,与对照组比较差异显著(p<0.05);所有检测指标显示重组质粒免疫组和灭活苗免疫组比较均无显著差异(p>0.05)。以上结果表明pcDNA-VP60重组质粒可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,为研制预防兔病毒性出血症的候选DNA疫苗提供了实验依据。     

家兔氟中毒的实验研究

本文选择体重0.7～1.2kg,20～30日龄健康的新西兰白兔24只,随机分为实验和对照两组,对照组饮自来水(含氟量0.25ppm),实验组饮按每公斤体重45mg氟化钠(化学纯)配制的水溶液。实验组每隔30天剖杀一次、进行尿样、血样及毛、爪、骨、肝、肾等氟含量的测定。实验结果证明,临床上实验30天即出现中毒症状,60～90天后发育迟缓,体重明显下降;投氟30天后,实验组家兔骨氟、血氟、爪氟、毛氟、尿氟、尿HYP含量明显高于未投氟的对照组(p<0.01);因此,羟脯氨酸(HYP)的测定是监测和诊断慢性氟中毒的早期辅助指标;尿氟和血氟的测定可作为诊断慢性氟中毒参考指标;爪氟含量与骨氟含量呈正相关,爪氟含量测定可以监测和诊断中毒程度,是目前早期诊断氟中毒的一种比较理想可靠的方法。     

穴位接种IBD双价细胞苗鸡的抗原定位及免疫活性细胞监测

１５日龄滨白鸡后海穴接种鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）双价细胞苗，采用免疫荧光组化跟踪抗原定位和免疫活性细胞的免疫形态学监测，以评价其免疫效果，同时与口服和肌肉免疫途径进行了对比试验，结果表明，后海穴穴位免疫优于口服免疫和肌肉免疫，本文穴位免疫机制进行了探讨。     

家兔外用免疫器官β－内腓肽的免疫组织化学研究

采用荧光免疫组织化学方法，对家兔外周免疫器官β－内腓肽（β－Ｅｐ）进行定位研究．β－Ｅｐ阳性反应细胞存在于Ｔ淋巴细胞区，而Ｂ淋巴细胞区不存在。推恻β－Ｅｐ对外周免疫器官调节作用是通过Ｔ淋巴细胞完成的。在Ｔ淋巴细胞区即有细胞膜上的β－Ｅｐ阳性细胞反应，又有细胞浆内β－Ｅｐ阳性细胞反应，说明β－Ｅｐ对免疫器官的调节作用可能存在反馈调节机制。     

鸡新城疫V4株油乳剂灭亡活苗免疫效果观察

鸡新城疫Ｖ４株油乳剂灭活苗接种１月龄ＳＰＦ来航鸡，进行了正常免疫剂量的安全性试验和接种前后血凝抑制抗体效价的动态监测。     

实验用巴马小型猪的遗传多样性研究

为了研究屏障环境下小规模保存实验用巴马小型猪的遗传学背景,试验运用19个微卫星基因座,对长期在屏障环境下封闭饲养的同世代、同父本但不同母本的3窝巴马小型猪(BM/HVRI猪)进行分子群体遗传学检测,计算平均等位基因数(Na)、平均观察杂合度(Ho)和平均期望杂合度(He),检验Hardy-Weinberg平衡并进行遗传分化分析。结果表明:该群体的Na、Ho和He分别为3.05±0.71,0.703 7±0.019 2和0.574 6±0.023 1,3窝仔猪的He分别为0.558 3±0.029 3,0.552 0±0.037 3和0.549 2±0.030 8,且差异不显著(P>0.05);经完全枚举法检验,A窝和C窝分别有3个和5个基因座偏离Hardy-Weinberg平衡;经U检验,A窝和C窝分别有4个和6个基因座存在杂合子过剩,仅C窝1个基因座表现出杂合子缺失现象。说明该猪群遗传多样性较低,处于低度杂合状态,窝系之间不存在遗传分化。     

产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立

为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314 bp;最终确定dNTP终浓度0.4 mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25 μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。     

巴马小型猪主要细胞因子的克隆及序列分析

为了丰富广西巴马小型猪细胞因子生物学数据,本试验采取广西巴马小型猪的外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR扩增,将克隆出的与目的基因大小相符的片段回收,再与T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆,将重组菌测序后提交NCBI,比较克隆序列与已知序列的同源性,并利用软件对克隆序列进行分析。结果表明,已克隆出的巴马小型猪细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α基因序列长度分别为338、377、380、402 bp,测序结果均与目的基因预期估计值吻合。序列分析结果发现与已知的家猪或野猪的相应基因同源性较高,IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α序列同源性分别为98.9%、99.5%、99.2%、100%。研究巴马小型猪细胞因子基因序列不仅丰富了生物学数据,而且为细胞因子的功能研究提供了依据,也为细胞因子的定量检测奠定了基础。     

犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析

为获得具有天然构象及良好抗原性的犬瘟热病毒（CDV）血凝蛋白（H）,本研究以HLJ2-07毒株为模板,利用RT-PCR方法扩增出H基因,将其克隆到pFastBac^TMHTA载体中,利用大肠杆菌DH10Bac^TM同源重组构建穿梭质粒reBACmid-rH,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,进行杆状病毒表达。利用Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。同时,利用在线网站与软件对CDV H蛋白进行B细胞表位分析预测。结果显示,在杆状病毒系统中表达的H蛋白能与His-tag单克隆抗体及CDV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白成功表达,且具有良好的反应原性;用Swiss-model同源建模软件及B细胞表位预测软件,预测H蛋白可能具有的B细胞表位有5处,分别是175-195、240-250、365-380、480-508及526-555。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,可为诊断试剂开发、单克隆抗体制备及表位筛选等工作奠定基础。