江苏地区6株猪圆环病毒2全基因的克隆与分析

根据已发表的猪圆环病毒2基因序列设计1对PCR引物,用PCR方法从6株PCV2江苏分离株(YZ60615,YZ60721,YZ70717,TZ60607,TZ60804、YC60711)中扩增出相应的全基因组DNA片段。按常规方法克隆,获得6个含有相应片段的重组质粒。序列测定结果表明,6株病毒的基因组大小均为1 767 nt,与GenBank中已发表序列同源性为94.6%~100.0%。遗传进化分析表明,这6株江苏地区的病毒与浙江株(AY678532,AY691169,AY510375)、福建株(DQ180393)、江苏株(DQ104422)亲缘关系较近,与多数中国分离株亲缘关系较近并形成较大的一簇,而与美国株(AF264041)、加拿大株(AF086836)遗传关系较远。     

禽沙门氏菌毒力岛标志基因研究与mgtC基因序列分析

根据GenBank发表的沙门氏菌毒力岛(SPI)基因序列,设计扩增SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4、SPI-5核心蛋白的基因PCR引物,建立检测沙门氏菌毒力岛的PCR方法;以保存的30株禽源沙门氏菌标准菌株为参考,确定禽沙门氏菌毒力岛的主要类型为SPI-1(携带率83.3%)、SPI-2(携带率93.3%)、SPI-3(携带率100%)、SPI-4(携带率73.3%)、SPI-5(携带率86.7%),由此证明SPI-3可作为检测沙门氏菌的毒力标志.通过对3株沙门氏菌SPI-3的mgtC基因的序列分析,发现mgtC基因的高度保守性,进一步明确了mgtC基因可作为检测禽沙门氏菌的标志.     

大肠埃希氏菌F18菌毛FedF蛋白的表达与鉴定

根据已发表的F18菌毛F亚单位的基因序列(fedF)设计了1对引物．利用PCR技术分别扩增到F18ab和F18ac菌毛的fedF编码序列，并按预定的阅读框架分别插入表达载体pGEX-6p-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游，获得重组质粒pPFedF／ab与pPFedF／ac，然后转化大肠埃希氏菌BL21获得重组菌PPFedF／ab与PPFedF／ac。测序结果表明，fedF编码序列大小均为837bp，与GenBank中登录的EedF结构编码序列(Z26520)大小一致。通过对菌体裂解物进行SDSPAGE电泳分析以及Western-blotting鉴定，证明重组大肠埃希氏菌PPFedF／ab与PPFedF／ac均可以表达融合蛋白形式的FedF(分别命名为GST-FedF／ab与GST-FedF／ac)。     

鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定

[目的]用大肠杆菌表达出CIAV的衣壳蛋白(VP1)作为免疫抗原,以建立鸡传染性贫血病毒(CIAV)的血清学诊断方法.[方法]根据已发表的CIAV的衣壳蛋白(VP1)序列,结合Protean软件预测出抗原富集区域,设计并合成1对引物,利用PCR扩增该区域基因,将扩增成功的VP1基因片段经T4连接酶连接至PGEX-6P-1表达载体.连接成功的重组质粒转化不同的大肠杆菌表达菌株,通过IPTG诱导进行原核表达,筛选出表达量最高的菌株及最佳诱导时间和1PTG诱导浓度.以感染CIAV的鸡阳性血清为一抗,对重组蛋白GST-VP1进行Western-blot分析.[结果]成功获得了重组质粒PGEX-VP1,诱导表达后经SDS-PAGE和Western-blot分析,分子量约71kD的融合蛋白GST-VP1在大肠杆菌Rosseta中以包涵体形式大量表达,并能与鸡传染性贫血病毒阳性血清发生反应.[结论]该研究可为抗CIAV单克隆抗体的制备及血清学诊断方法的建立等研究奠定基础.     

规模化舍饲羊场消毒要点

<正>消毒的目的包括防止外来病原进入场内及场内病原扩散到场外,也包括杀灭场内传染源和环境中的病原微生物,从而切断病原传播途径的连续性,控制传染性疾病的发生与流行。规模化舍饲羊场应制定合理的消毒制度,并认真执行。一、入口消毒1.设立消毒池消毒池宽与羊场入口大门一致,长4～5米,深0.2～0.3米。     

羊球虫病的诊断与防控

<正>羊球虫病是由艾美科艾美耳属球虫寄生于羊肠道所引起的一种疾病,主要危害羔羊,表现为食欲下降、腹泻或粪便不成形、生长迟缓,严重时贫血甚至死亡。一、病原特征羊球虫为单宿主寄生性原虫,只需要经过一个宿主就能完成整个发育过程。病羊体内的球虫卵囊经粪便排到体外,形成孢子化卵囊,污染圈舍。孢子化卵囊被羊吞食后,在胃液、胆汁和胰蛋白酶作用下,子孢子逸出并侵入肠道上皮细胞,进行多世代裂殖生殖,     

羊布鲁氏菌病的诊断与防治

<正>羊布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种慢性传染病,主要侵害羊的生殖系统。羊感染后,以母羊发生流产、公羊发生睾丸炎为特征。养殖户要积极做好管理措施,提升养殖效益。一、病原布鲁氏菌是革兰氏阴性需氧球杆状菌,无芽孢,无荚膜,可细胞内寄生。布鲁氏菌在土壤、水中和皮毛上能存活数月,一般消毒药能很快将其杀死,如1%来苏尔液、2%福尔马林液或5%生石灰乳15分钟就可将其杀死。     

布鲁菌gntR4基因无痕缺失株构建及其生物学特性分析

布鲁菌是兼性胞内寄生菌,其入侵宿主细胞后的胞内存活能力决定着布鲁菌的毒力,布鲁菌毒力因子功能的研究对阐明其致病机制具有重要意义。在前期研究中利用转座子随机突变技术发现转录调控子GntR4与布鲁菌毒力相关,故进一步通过定向缺失方法构建布鲁菌gntR4基因无痕缺失株,并通过耐受性试验、免疫印迹试验、胞内存活试验、小鼠致病性试验等对gntR4缺失株的基本生物学特性进行评估。结果表明：gntR4缺失显著减弱布鲁菌抵抗阳性杀菌肽的能力,说明GntR4可能调控部分基因帮助布鲁菌抵抗宿主非特异性免疫杀伤。但GntR4与T4SS的表达无关,与布鲁菌在胞内的存活能力及对小鼠的致病力无关。综上,这一研究构建的基因无痕缺失方法为布鲁菌基因功能研究奠定基础,针对GntR4调控子的研究完善了GntR调控子家族的功能研究,为阐明布鲁菌抵抗宿主免疫杀伤与建立慢性感染机制间的关系提供依据。