类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体B亚单位基因的表达与鉴定

将由 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增并克隆在ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中的ｓｌｔⅡｅ Ｂ基因切出,并按预定的阅读框架插入表达性质粒载体 ｐ Ｇ Ｅ Ｘ６ｐ１ 中的谷胱苷肽转移酶（ Ｇ Ｓ Ｔ）基因的下游。重组质粒 ｐｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ在大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１ 中以融合蛋白的形式表达 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（命名为 Ｇ Ｓ Ｔ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ）,即 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（７５６８ｋ Ｄ）与谷胱苷肽转移酶（２７３３５ｋ Ｄ）相连组成分子量为 ３４８８５ｋ Ｄ 的融合蛋白。通过对重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ的菌体裂解物的 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳分析,以及根据抗原抗体结合反应的免疫学特性,通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 鉴定,重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ（含有重组质粒 ｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ的大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１）可以大量表达融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ。根据 Ｇ Ｓ Ｔ 可与其底物谷胱苷肽结合的特性,用谷胱苷肽结合的 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ制备的亲和凝胶纯化表达产物,纯化的表达产物经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ,可以鉴定到分子量约为 ３５ｋ Ｄ 的蛋白条带,这与融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ分子量（３４８８５ｋ Ｄ）相当。     

新鱼腥草素钠增强NDV LaSota疫苗免疫作用研究

用新城疫病毒(NDV) LaSota株弱毒活疫苗接种1日龄非免疫健康肉雏鸡的同时,以新鱼腥草素钠为免疫佐剂按不同剂量颈部皮下注射,以生理盐水为对照;二次免疫后第7、14、21、28天分别测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体和外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值.结果表明: 新鱼腥草素钠对提高鸡体抗NDV血凝抑制抗体效价和外周血CD4 /CD8 淋巴细胞比值都有一定作用,与对照组差异显著(P<0.05),且这种作用与给药剂量有关.另外,新鱼腥草素钠对细胞免疫的影响早于对体液免疫.     

猪圆环病毒2型的PCR快速检测及其临床应用

根据GenBank中发表的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)基因组序列,设计了2段特异性核苷酸引物.通过对已知PCV2和对照病毒(PCV1、伪狂犬病毒、猪细小病毒)的PCR扩增,证明所设计的引物可用于PCV2的特异性PCR检测.采集来自江苏扬州和泰州地区的157头份临床门诊病料(每头份均为脾脏和腹股沟淋巴结双份病料)进行PCR检测,发现仅从腹股沟淋巴结检出PCV2的占21.65%,仅从脾脏检出PCV2的占7.64%,从脾脏和淋巴结均可检出PCV2的占41.40%,其中扬州市地区感染率为73.47%,泰州地区感染率为66.10%.通过对扬州某屠宰场的32份腹股沟淋巴结的检测,结果表明临床健康猪的PCV2隐性感染率也高达71.88%.     

羊食管阻塞诊治要点

<正>羊食管阻塞是由于食团、食块或异物突然阻塞食管导致。根据阻塞程度,临床上分为不完全阻塞和完全阻塞两种类型。该病通常是由于羊采食过多块根类饲料,吞咽过急或突然受到惊吓,导致食管被食物阻塞。病羊主要出现吞咽障碍,嗳气、流涎、摇头症状。一、病因分析1.原发性食管阻塞羊在采食块根类饲料时,如萝卜、马铃薯、甘蓝、甘薯、苹果或西瓜皮等,由于采食速度过快而出现阻塞;     

苏北地区肉羊寄生虫感染的检测与流行病学分析

为了解肉羊的寄生虫感染情况,本研究从江苏省肉羊产业技术体系的3个基地(高邮基地、睢宁基地、泗阳基地)的示范点羊场共采集了104份山羊粪便样品和40份绵羊粪便样品,通过虫种鉴定,分析2020年度的流行情况,为苏北地区制定肉羊寄生虫病的防治对策提供理论依据.结果发现96.15％的山羊感染寄生虫,其中96.15％感染球虫,5...     

水禽源致病性大肠杆菌流行病学调查及耐药性分析

为了解江苏省水禽源大肠杆菌毒力基因分布情况,并分析其耐药性,采集了江苏部分地区64个养殖场疑似大肠杆菌性腹泻鸭的泄殖腔拭子510份,制备DNA模板,运用PCR技术进行检测,利用药敏纸片琼脂扩散法对100株分离株进行药敏试验。结果表明:江苏部分地区水禽养殖场致病性大肠杆菌阳性率65%左右;分离株对磷霉素、多黏菌素B比较敏感,敏感比例分别为90%和78%;耐药最强的是多西环素,耐药比例可达90%,其次是新霉素和四环素,耐药比例均为70%。结果显示,利用PCR技术可快速确诊,并通过药敏试验实现对敏感药物的筛选。     

非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

为了建立一种快速、准确检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的胶体金免疫层析方法,试验以原核表达的ASFV PET-30A-P72蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备血清,以ASFV单克隆抗体杂交瘤细胞株2D3接种至Balb/c小鼠腹腔内制备腹水,采用间接ELISA法分别测定其效价。经protein G抗体纯化柱纯化后获得ASFV的单克隆抗体和多克隆抗体,并分别测定其浓度。选择出最适p H值及最适蛋白用量后,制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体。以硝酸纤维素(NC)膜上分别包被的ASFV多克隆抗体和SPA作为检测线和质控线,制备用于检测ASFV的胶体金免疫试纸条。以两种原核表达的ASFV P72蛋白作为抗原对该检测试纸条的特异性、敏感性及稳定性进行验证。结果表明:制备的ASFV多克隆抗体和单克隆抗体的效价较高,分别为1∶51 200和1∶160 000,经纯化后其浓度分别为1.2 mg/m L和1.0 mg/m L;制备胶体金标记的ASFV单克隆抗体所需的最适p H值为8.5,最适标记蛋白用量是48μL;该试纸条可在5~10 min内准确检测出两种抗原,对两种抗原的最低识别量分别为15 ng和21 ng,经测试该试纸条的特异性、敏感性、稳定性表现良好。     

舒泰与陆眠宁配伍对小鼠麻醉的精准控制研究

通过比较舒泰与陆眠宁9个不同浓度组合C57BL/6小鼠麻醉的诱导时间、麻醉时间和恢复时间,初步评价舒泰和陆眠宁的麻醉效果,探索舒泰与陆眠宁配伍对C57BL/6小鼠麻醉的精准控制方案。结果表明:随着2种药物浓度的增加,诱导时间逐步缩短,麻醉时间和恢复时间逐渐增加,但剂量和时间并不呈线性相关关系,增加舒泰剂量产生的效果优于陆眠宁。在不产生可逆性眼球发白及死亡的情况下,舒泰30 mg·kg~(-1)配比陆眠宁40 mg·kg~(-1)的组合能最快诱导麻醉,麻醉时间也最长。     

某猪场大肠杆菌与猪圆环病毒混合感染的快速诊断

江苏省徐州市某猪场部分仔猪发生腹泻,并出现体表皮炎。采集发病猪十二指肠,刮取黏膜并接种LB肉汤,于37℃增菌培养后进行PCR快速检测,结果表明存在产肠毒素型大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染;通过细菌学分离获得了2株大肠杆菌,经凝集试验和PCR检测确定了其O抗原型以及毒素与菌毛类型。采集发病猪的脾脏、腹股沟淋巴结以及肺脏,混合研磨后,提取样品中的病毒DNA并进行PCR检测,结果表明腹泻仔猪存在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染。     

抗重组猪三十九肽胆囊收缩素卵黄抗体的制备

制备重组猪三十九肽胆囊收缩素(GST-CCK39),以其为抗原免疫28周龄的蛋鸡,用水稀释脱脂处理,聚乙二醇(PEG)一步法制备高效价卵黄抗体,并用免疫琼脂扩散试验、ELISA、Dot-ELISA检测其效价及特异性。结果表明,免疫琼脂扩散测得特异性抗体效价达1∶16以上,ELISA效价达1∶12 800以上;Dot-ELISA显示所获得卵黄抗体具有较强的特异性;高效价,特异性的卵黄抗体可维持50 d以上。表明用重组蛋白GST-CCK39免疫蛋鸡后能获得效价高、特异性强的卵黄抗体。