苏云金芽胞杆菌XL6~-候选生物被膜调控基因00940序列分析及基因敲除突变体构建

细菌生物被膜(bacterial biofilm,BBF)可以提高细菌的紫外线抗逆性,调控细菌对环境胁迫的适应能力。本研究以课题组前期比较基因组工作中筛选出的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)XL6-(Gen Bank No.CP013000.1)的调控生物被膜形成的候选基因00940为基础,分析其基因功能,并构建基因敲除突变株。通过生物信息学分析发现00940基因可能编码谷氨酰胺合成酶,并受到转录因子Sig L、CcpA、Deg U和Lex A的调控。在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)中,Sig L是一种增强子,位于枯草芽孢杆菌的谷氨酸脱氢酶基因的下游,负责转录编码谷氨酸脱氢酶的roc G基因;CcpA转录因子参与代谢产物的分解;Deg U控制鞭毛形成和生物被膜形成的基因表达;Lex A蛋白在DNA损伤的情况下被诱导,是细菌SOS DNA修复系统的转录抑制因子,推测这些转录因子在Bt中也发挥相似的作用。通过PCR获得00940基因上、下游同源臂和卡那霉素(kan)抗性基因,利用重叠PCR获得完整的基因敲除片段。根据酶切位点将基因敲除片段和p MAD温敏载体进行重组反应,得到重组质粒。将重组质粒电击转化Bt XL6-,筛选获得了00940基因敲除突变株。以Bt Xl6-作为对照,对Bt Xl6-00940基因突变株进行表型分析,包括生长曲线测定、群游能力测定以及生物被膜形成能力测定。结果表明,00940基因的敲除对菌株的生长趋势没有影响,但是群游能力和生物被膜形成能力提高,初步确定00940基因的敲除提高Bt Xl6-菌株的生物被膜形成能力。基因敲除突变株的获得为进一步分析相关调控基因的功能提供科学依据和基础资料。     

苏云金杆菌8010cryIA基因的克隆和表达

苏云金杆菌８０１０ｃｒｙＩＡ基因的克隆和表达ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｒｙＩＡＧｅｎｅｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ８０１０苏云金杆菌是目前世界上产量最大的微生物杀虫剂。应用生物工程技术进行遗传操纵，可以提高野生型...     

苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选

采用正交试验对BtWB7菌株发酵培养基进行筛选,结果表明,不同原料对发酵液菌数影响相差较大,其中酵母粉和鱼粉影响最大.本试验获得的最佳摇瓶发酵配方为:玉米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉2.5%和蛋白胨0.1%(质量分数).     

苏云金杆菌摇瓶发酵培养基

采用正交试验法 ,对苏云金芽孢杆菌高毒力菌株 TS1 6进行了摇瓶发酵培养基筛选试验 .结果表明 ,不同原料对发酵液毒力的影响相差很大 ,在几种培养基组分中以鱼粉对发酵液的影响最大 .试验所得的最佳培养基组合为 :黄豆饼粉 3 2 g· L- 1 、玉米粉 1 4g· L- 1 、花生饼粉 3 2 g· L- 1 、鱼粉 1 4g· L- 1 、蛋白胨 4g· L- 1 、酵母 6g· L- 1 、Fe SO4 · 7H2 O 0 .0 4g· L- 1 、Zn-SO4 · 7H2 O 0 .0 8g· L- 1 .     

甜菜夜蛾防治指标的测定

通过室内测定甜菜夜蛾对空心菜、上海青、菠菜的取食量 ,进行田间模拟剪叶 ,确定虫量与产量损失率的关系 ,并根据当地生产水平、产品价格、防治成本及药剂防治效果等 ,分别制定了我省常规产量下空心菜、上海青及菠菜的防治指标 [分别为 12 60 0 0、65 5 0 0 0和 2 640 0 0头· hm-2 (3龄幼虫 ) ].此外 ,还提供了在不同产量、不同经济系数下的防治指标 ,以指导生产上防治     

柑桔—粉虱—座壳孢菌系统的生态位和熵变值分析

应用生态位及熵变值分析了柑桔园系统内某些物种之间的关系.当果园引入霍香蓟等绿肥植物后,境内树冠和地表温度下降0.4—0.7℃和0.3—0.5℃,相对湿度则分别提高2％—4％和2％—3％;土壤速效氮、磷、钾提高5.37％,33.69％和118.59％;熵变值为-924.85×10~6cal/kg;粉虱座壳孢菌寄生率增加184.4％.果园系统生产力大为提高,害虫也得到了自然抑制.     

煤矿中苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株的分离及其鉴定

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是一种已被广泛用于农业害虫生物防治的昆虫病原细菌。本研究从永春天湖山矿区采集的159份样品中分离出1株Bt,光学显微镜检测发现菱形伴孢晶体。以cry1/7/9、cry2、cry3、cry4/10、cry5、cry6、cry8、cry11和cry1I的通用引物对该Bt分离菌进行Cry毒素基因分析,利用SDS-PAGE和双向电泳-质谱法(2-dimensional electrophoresis/mass spectrometry,2-DE/MS)对Bt分离菌进行蛋白鉴定。结果表明,分离菌含有cry1基因型,经克隆、测序后可知,菌株中的cry1亚基因型与cry1Ac有极高的同源性。分离株表达的晶体蛋白约为130 k D,通过蛋白质谱分析表明,杀虫蛋白为Cry1Ac,与PCR-RFLP所得出的结果一致;通过质谱分析还鉴定出分子伴侣Gro EL、F0F1型ATP-β亚基合成酶、延伸因子Tu和丙酮酸脱氢酶。生物信息学分析结果表明,这些蛋白主要参与帮助新生肽的正确折叠、能源生产和转换,以及提高细胞的应激能力以抵御外界不良刺激。本研究从煤矿中分离鉴定出Bt菌,为发现新资源、新型杀虫蛋白基因以及利用微生物治理重金属污染提供基础资料。     

响应面分析法对苏云金芽孢杆菌LLP29-M19漂浮剂的优化

利用细胞固定化制备苏云金芽胞杆菌LLP29-M19漂浮剂,为提高其漂浮效果,应用数学统计方法对该菌株漂浮剂配方进行优化．通过单因素试验确定海藻酸钠质量分数为1．0％,CaCl2质量分数为2．0％,空心玻璃微珠质量分数为3．5％;采用Plackett-Burman设计对影响该漂浮剂漂浮效果的8个因素进行筛选,确定漂浮剂配方中的3个重要影响因子为CaCl2、固定化时间和黑色素;通过最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用响应面分析获得这3个重要因子的最佳条件,确定LLP29-M19漂浮剂最佳配方：海藻酸钠0．80％、CaCl2 4．90％、空心玻璃微珠3．2％、菌粉3．0％、黑色素0．012％、苯甲酸钠0．3％、小白鼠饲料0．5％,固定化时间4．74h．优化后的漂浮剂漂浮效果为1698．25,与响应面数学模型预测值的误差仅1．8％,比初始漂浮剂配方漂浮效果（64．5）提高了25．32倍．     

甜菜夜蛾颗粒体病毒毒力的生物测定

以甜菜夜蛾２—３龄幼虫为供试虫，对国内外首次发现的甜菜夜蛾颗粒体病毒（Ｌａｐｈｙｇｍａｅｘｉｇｕｅｇｒａｎｙｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＬｅＧＶ）进行了生物测定．在２３—２５℃相对湿度７０％—８０％下其样品死亡机率值与浓度对数值的回归方程是ｙ＝０．４５ｘ＋３．７６（ｒ＝０．９９），ＬＣ５０＝５７２．４颗粒体·ｍＬ－１，ＬＣ５０的９５％置信区为１５８—２０８４颗粒体·ｍＬ－１．甜菜夜蛾不同龄期幼虫对ＬｅＧＶ的敏感性不同，初孵幼虫敏感性最强，２、３龄次之，４龄幼虫极不敏感．此外，贮藏期温度对ＬｅＧＶ感染力的影响也进行了初步研究．     

杀虫剂对烟蚜及龟纹瓢虫的选择毒杀作用

８种杀虫剂对烟蚜和龟纺瓢虫的毒力测定和田间试验表明：吡虫啉对龟纹瓢虫和烟蚜的选择性最高,对瓢虫安全,且防治效果好,其次是抗蚜威和唑蚜威的选择性较高;另外,硫丹对龟纹瓢虫也具有一定的选择性;而灭多威、敌敌畏、杀灭菊酯、氧化乐果对龟纹瓢虫不具选择保护作用,在防治烟蚜的同时也会大量伤害瓢虫。