内生解淀粉芽胞杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglS)的克隆与表达及酶学特性分析

β-1,3-1,4-内切葡聚糖酶普遍存在于植物内生芽胞杆菌中,为了探讨其功能,以内生解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TB2菌株基因组为模板,克隆了β-1,3-1,4-内切葡聚糖酶基因(bglS).测序结果表明,该基因的ORF全长732 bp,编码一条243个氨基酸的蛋白,理论分子量约为27.33 kD,等电点约为6.89,其ORF序列已登录GenBank(Accession No.EU368224).Blast同源性分析结果表明,该基因的ORF序列与植物互作生防解淀粉芽胞杆菌(B.amyloliquefaciens FZB42,GenBank Accession No.CP000560)的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因核苷酸序列的一致性达97.3%,氨基酸序列的一致性达97.1%.将β-1,3-1,4-内切葡聚糖酶基因全长克隆至pUC18载体上,利用基因自身的启动子构建重组表达载体pUC-bglS,并导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中表达.SDS-PAGE分析表明,BL21::pUC-bglS菌株表达了27 kD左右的蛋白;该酶的最适反应温度为55℃,在50℃以下保温60 min后残余80%以上酶活;最适反应pH为6.2,在pH4.4～6.8 4℃保温30 min残余85%以上的酶活;Ca2+和Fe肛可提高β-1,3-1,4-葡聚糖酶的活性,而Cu2+、Zn2+、Mg2+和Mn2+对其活性具有显著的抑制作用.实验结果为进一步研究植物内生解淀粉芽胞杆菌TB2 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的功能和应用打下了基础.     

有机磷农药的微生物修复回顾与前景展望

综述了有机磷农药微生物修复的研究进展,总结了有机磷降解菌的来源、种类、降解途径、基因定位及其工程菌的构建,客观地分析了微生物修复的优缺点。此外,讨论了苏云金杆菌在农药污染的微生物修复领域的潜在的应用前景,并针对可能存在的问题提出了一些研究思路。     

从植物中分离苏云金芽孢杆菌的研究

苏云金芽孢杆菌是目前研究最深入、应用最广泛的杀虫微生物,广泛分布于世界各地。从热带雨林到北极冻土带,从昆虫尸体、野生动物、动物粪便、贮藏物或尘埃、植物表面、鲜水到土壤中都有Bt存在。以植物叶片作为Bt菌株分离资源的相关研究相对较少,而非维管束植物中分离Bt菌株的报道更是屈指可数。从植物中分离Bt不但能丰富Bt的生态学意义,还能极大地丰富Bt的菌种资源。本文就植物上分离微生物、维管植物分离Bt的研究进展及非维管植物分离Bt的研究前景做简单介绍。     

苏云金芽孢杆菌cry1Ea基因的克隆及 生物信息学分析

不同来源的苏云金芽孢杆菌能产生多种多样的晶体(Cry)蛋白。基于这个特性,人们可以通过基因工程的手段向工程菌中转入编码多种Cry毒素的基因来控制虫害。通过DNA重组技术,从Bt HZM2菌株中克隆出了cry1Ea基因,对其进行了生物信息学分析,同源比对结果表明,cry1Ea8基因的核苷酸序列与已知cry1Ea的同源性为99.77%~99.91%,对应的氨基酸序列同源性为99.49%~99.74%。对cry1Ea8基因的分析还揭示出了cry1Ea8及其编码蛋白的一些生物和理化性质。结构域预测表明,Cry1Ea8由3个结构域组成,其中N-末端螺旋状结构域与膜插入与孔隙形成有关,而第二和第三个结构域与受体的结合有关。该研究为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了新的基因来源。     

苏云金芽孢杆菌及其在动物疾病防治上的应用

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种自然界广泛分布的好气芽孢杆菌,由于对昆虫具有特异性毒杀作用,不污染环境和对人畜无害,成为目前应用最广、产量最大的生物杀虫剂菌种。近几年来,Bt在其它领域也发挥了巨大作用。本文将从Bt微生物学、Bt在动物疾病防治中的应用等方面作一综述。     

基因工程菌诱导表达苏云金芽胞杆菌Vip3Aa蛋白的条件优化

营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal protein,Vip)是在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)营养生长至对数中期到稳定期期间产生的一类蛋白。为获得苏云金芽胞杆菌Vip3Aa蛋白的高效表达条件,本研究利用正交试验综合考察了大肠杆菌(Escherichia coli)重组基因工程菌BL21-p Czn1-Vip诱导过程中诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度对Vip3Aa蛋白表达量的影响。结果表明,该工程菌目的蛋白的最优诱导表达条件:诱导温度21℃、诱导时间8 h、诱导剂(异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-dthiogalactoside,IPTG))浓度为200μg/m L;直观分析表明,影响目的蛋白表达量的最主要因素为诱导温度,其次为诱导时间,诱导剂浓度影响最小;方差分析结果表明,诱导温度的P值0.01、诱导时间的P值0.05、诱导剂浓度的P值0.05,与直观分析结果相一致;利用优化后诱导表达条件进行培养,测得目的蛋白最高表达量可占总蛋白的27.6%,相当于常规诱导方法的2.3倍。本研究为大量制备高纯度Vip3Aa蛋白及其深入的理论研究和实践应用提供了基础资料。     

苏云金芽孢杆菌ICP基因PCR鉴定的策略与进展

探讨了ＰＣＲ鉴定中模板来源、ＤＮＡ聚合酶、引物的选择等三方面的策略,并从特异复合ＰＣＲ鉴定、共同复合ＰＣＲ鉴定、两步复合ＰＣＲ鉴定、特异ＰＣＲ鉴定、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ鉴定等五个角度对其进展作了回顾与展望。     

叶面分离Bt及对茶树主要害虫高毒力菌株的筛选

通过分离培养基和分离方法的筛选,得到了从叶面分离Bt的有效方法。用此法从25种植物叶面分离出54株Bt,利用茶尺蠖、茶小绿叶蝉和茶橙瘿螨作为靶标昆虫,筛选对茶树主要害虫有毒力菌株,得到了对鳞翅目有效的菌株10株,对同翅目有效的菌株4株,但所有测试菌株均对茶橙瘿螨无效。     

中国蛙蠓科分类研究及两新种记述(双翅目:蛙蠓科)

记述了采自福建省的蛙蠓科蛙蠓属的2个新种:德化蛙蠓Corethrella(Corethrella)dehuai Wang et Yu sp.nov.和铜色蛙蠓Corethrella(Corethrella)aereus Wang et Yu sp.nov.,并对飞鹏蛙蠓Corethrella(Corethrella)feipengi Yu,Huang and Zhang,2013触角嗅觉器的分布做了更正.至此我国已发现蛙蠓3种.模式标本保存于北京微生物流行病研究所医学昆虫标本馆.     

苏云金杆菌新菌株——“8010”菌的研究

1980年从柑桔玉带凤蝶 Papilio polytes L.幼虫的尸体中,分离出一株能形成伴孢晶体的苏云金杆菌类的菌株,编号为“8010”菌;经鉴定为库尔斯塔克变种 Bacillus thuringiensis var.kurstaki 的新菌株;血清型为 H_(3a3b),酯酶型为Galleriae 型。本文报道了该菌株的形态、培养特性、致病力测定、工业生产和田间防治等方面的试验结果。研究表明,“3010”菌是一种对柑桔凤蝶、柑桔卷叶蛾、菜青虫、小菜蛾等害虫具有速效、广谱、高毒、无公害的新菌株。