苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选

采用正交试验对BtWB7菌株发酵培养基进行筛选,结果表明,不同原料对发酵液菌数影响相差较大,其中酵母粉和鱼粉影响最大.本试验获得的最佳摇瓶发酵配方为:玉米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉2.5%和蛋白胨0.1%(质量分数).     

苏云金芽孢杆菌新型杀虫蛋白vip3A基因的鉴定

VIPs(Vegetative insecticidal proteins)是已发现的一种新型的Bt杀虫蛋白,能在一定程度上克服许多害虫对Bt内毒素低敏感或不敏感的弊端.     

植物诱导抗虫基因研究进展

植物的诱导抗虫基因可分为3类，即防御基因、防御物质合成基因和信号途径基因，综述了这3类基因的种类及其功能。植物诱导抗虫基因除了受昆虫和损伤诱导外，还受植物激素茉莉酮酸酯、水杨酸、阿司匹林、脱落酸和乙烯，以及其它信号物质的调控，这些信号物质的调控途径组成了复杂的植物防御的信号传输网络。植物诱导抗虫基因的研究将为害虫防治提供新的途径。     

甜菜夜蛾颗粒体病毒毒力的生物测定

以甜菜夜蛾２—３龄幼虫为供试虫，对国内外首次发现的甜菜夜蛾颗粒体病毒（Ｌａｐｈｙｇｍａｅｘｉｇｕｅｇｒａｎｙｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＬｅＧＶ）进行了生物测定．在２３—２５℃相对湿度７０％—８０％下其样品死亡机率值与浓度对数值的回归方程是ｙ＝０．４５ｘ＋３．７６（ｒ＝０．９９），ＬＣ５０＝５７２．４颗粒体·ｍＬ－１，ＬＣ５０的９５％置信区为１５８—２０８４颗粒体·ｍＬ－１．甜菜夜蛾不同龄期幼虫对ＬｅＧＶ的敏感性不同，初孵幼虫敏感性最强，２、３龄次之，４龄幼虫极不敏感．此外，贮藏期温度对ＬｅＧＶ感染力的影响也进行了初步研究．     

煤矿中苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株的分离及其鉴定

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是一种已被广泛用于农业害虫生物防治的昆虫病原细菌。本研究从永春天湖山矿区采集的159份样品中分离出1株Bt,光学显微镜检测发现菱形伴孢晶体。以cry1/7/9、cry2、cry3、cry4/10、cry5、cry6、cry8、cry11和cry1I的通用引物对该Bt分离菌进行Cry毒素基因分析,利用SDS-PAGE和双向电泳-质谱法(2-dimensional electrophoresis/mass spectrometry,2-DE/MS)对Bt分离菌进行蛋白鉴定。结果表明,分离菌含有cry1基因型,经克隆、测序后可知,菌株中的cry1亚基因型与cry1Ac有极高的同源性。分离株表达的晶体蛋白约为130 k D,通过蛋白质谱分析表明,杀虫蛋白为Cry1Ac,与PCR-RFLP所得出的结果一致;通过质谱分析还鉴定出分子伴侣Gro EL、F0F1型ATP-β亚基合成酶、延伸因子Tu和丙酮酸脱氢酶。生物信息学分析结果表明,这些蛋白主要参与帮助新生肽的正确折叠、能源生产和转换,以及提高细胞的应激能力以抵御外界不良刺激。本研究从煤矿中分离鉴定出Bt菌,为发现新资源、新型杀虫蛋白基因以及利用微生物治理重金属污染提供基础资料。     

苏云金芽孢杆菌WB9菌株cry2Ac4基因的克隆及表达

WB9是我国分离自武夷山的对多种重要农业害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)菌株,经PCR-RFLP鉴定含有cry2Ac基因。根据cry2基因序列设计引物,以WB9质粒为模板扩增cry2Ac全长基因,与大肠杆菌(Escherichia coli)克隆载体pMD18-T连接获得含有cry2Ac全长基因的重组质粒pMD2Ac并测序。该基因在GenBank上登录号为DQ361267,被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ac4。通过亚克隆方法将cry2Ac4基因插入穿梭表达载体pHT315获得重组表达质粒pHT2Ac,将其转化大肠杆菌SCS110和Bt无晶体突变株HD73 Cry-,得到的工程菌能正常表达70 kD蛋白,形成方形晶体。生物测定结果表明,cry2Ac4基因表达产物对桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel)幼虫具有显著的毒杀作用,但对小菜蛾(Plutella xylostella)和致倦库蚊(Culex fatlgans)幼虫基本没有效果。     

细菌生物被膜在生物防治中的作用

细菌生物被膜（bacterial biofilm,BBF）是在固—液和气—液表面上生长并封闭在胞外多糖基质中的细胞群,能调控细菌对环境胁迫的适应能力,提高细菌对紫外线（UV）胁迫等环境的抗逆性,是细菌的一种保护性生长方式。生防菌剂（biological control agents,BCAs）因其能以环境友好的方式长期控制病害虫等优点,一直是生物农药领域研究的热点。本文简介了细菌生物被膜及其应用,以苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）和枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis,Bs）为核心综述了BBF对生防活性的影响、生防细菌生物被膜形成、解离的表达、调控机制以及生物被膜调控基因的鉴定方法,并指出未来BBF在生防应用方面主要的研究方向,旨在为解决BCAs田间持效期较短等问题提供新的思路。     

苏云金芽胞杆菌XL6~-候选生物被膜调控基因00940序列分析及基因敲除突变体构建

细菌生物被膜(bacterial biofilm,BBF)可以提高细菌的紫外线抗逆性,调控细菌对环境胁迫的适应能力。本研究以课题组前期比较基因组工作中筛选出的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)XL6-(Gen Bank No.CP013000.1)的调控生物被膜形成的候选基因00940为基础,分析其基因功能,并构建基因敲除突变株。通过生物信息学分析发现00940基因可能编码谷氨酰胺合成酶,并受到转录因子Sig L、CcpA、Deg U和Lex A的调控。在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)中,Sig L是一种增强子,位于枯草芽孢杆菌的谷氨酸脱氢酶基因的下游,负责转录编码谷氨酸脱氢酶的roc G基因;CcpA转录因子参与代谢产物的分解;Deg U控制鞭毛形成和生物被膜形成的基因表达;Lex A蛋白在DNA损伤的情况下被诱导,是细菌SOS DNA修复系统的转录抑制因子,推测这些转录因子在Bt中也发挥相似的作用。通过PCR获得00940基因上、下游同源臂和卡那霉素(kan)抗性基因,利用重叠PCR获得完整的基因敲除片段。根据酶切位点将基因敲除片段和p MAD温敏载体进行重组反应,得到重组质粒。将重组质粒电击转化Bt XL6-,筛选获得了00940基因敲除突变株。以Bt Xl6-作为对照,对Bt Xl6-00940基因突变株进行表型分析,包括生长曲线测定、群游能力测定以及生物被膜形成能力测定。结果表明,00940基因的敲除对菌株的生长趋势没有影响,但是群游能力和生物被膜形成能力提高,初步确定00940基因的敲除提高Bt Xl6-菌株的生物被膜形成能力。基因敲除突变株的获得为进一步分析相关调控基因的功能提供科学依据和基础资料。     

杀虫剂对烟蚜及龟纹瓢虫的选择毒杀作用

８种杀虫剂对烟蚜和龟纺瓢虫的毒力测定和田间试验表明：吡虫啉对龟纹瓢虫和烟蚜的选择性最高,对瓢虫安全,且防治效果好,其次是抗蚜威和唑蚜威的选择性较高;另外,硫丹对龟纹瓢虫也具有一定的选择性;而灭多威、敌敌畏、杀灭菊酯、氧化乐果对龟纹瓢虫不具选择保护作用,在防治烟蚜的同时也会大量伤害瓢虫。     

甜菜夜蛾生物学特性及药效测定

甜菜夜蛾在福建１ａ发生８代,世代重叠,以蛹在菜地的松土中越冬．雌雄性比为１１．３,每雌平均产卵量为５２４～６０８粒．通过实验,测定了不同温度下,甜菜夜蛾各虫态的发育历期、发育起点温度和有效积温．通过１６种杀虫剂对甜菜夜蛾的室内药效测定表明,抑太保和拉维因对甜菜夜蛾防治效果分别为９６．６％和９３．１％,其它杀虫剂防治效果不明显．