环磷酰胺预处理制备兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清

以正常鸡胚尿囊液和环磷酰胺预处理试验兔, 再以Ⅰ型鸭肝炎病毒（Ｄｕｃｋ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ Ⅰ, ＤＨＶ Ⅰ） 标准强毒（ＡＴＣＣ, Ｃ９／Ｄ２） 接种后致死鸡胚的尿囊液, 经灭活、乳化制成油佐剂抗原多次免疫试验兔, 获得了鸡胚中和效价（ＥＰＤ５０） 达１∶３２ 以上的兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清（ＤＨＶ ⅠＳ） 。     

牛分枝杆菌Mb1230基因的表达纯化及其活性评价

为了探究牛分枝杆菌Mb1230蛋白在牛结核病诊断中的应用价值,本试验利用PCR方法扩增出Mb1230基因,构建重组质粒pET-22b-Mb1230,经IPTG诱导表达后用亲和层析纯化重组蛋白,通过结核菌素皮内变态反应试验(TST试验)、IFN-γ释放试验(IGRA试验)和间接ELISA对重组蛋白的活性进行评价。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,重组蛋白大小与理论值相符,且能与鼠抗His的抗体反应有特异性条带;在TST试验、IGRA试验和间接ELISA中也表现出抗原活性。结果表明,重组Mb1230蛋白具有良好的B细胞活性和T细胞活性,在牛结核病诊断中具有应用潜力。     

细粒棘球蚴Eg95s基因的串联表达及表达系统优化

为研制新型棘球蚴病基因工程疫苗,根据GenBank公布的细粒棘球蚴Eg95基因序列,针对其中一段348 bp高度亲水的优势表位序列设计引物,扩增Eg95s基因,利用同尾酶法基因同向串联方案,获得3拷贝Eg95s串联体。分别用两种表达载体pGEX-6p-1和pET-32a构建重组质粒,转化入3种大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)、Rosseta(DE3)和Origami (DE3),对其进行IPTG诱导表达,经免疫印迹分析结果表明,均能正确表达具有免疫原性的Eg95s蛋白。通过重组蛋白的表达量、可溶性、纯化方法等方面的比较,对Eg95s重组表达系统的载体及宿主菌进行了优化,结果表明,3拷贝的串联Eg95s在以pET-32a为表达载体,Rosseta(DE3)为宿主菌的系统中表达最佳。最终获得了表达量高、可溶性好、纯化方便的Eg95s重组蛋白表达系统,为大规模生产棘球蚴病基因工程疫苗提供了科学依据。     

我国鸡群中禽白血病流行现状和对策

鸡白血病及鸡白血病病毒(ALV)感染对鸡群的危害巨大.通过近年来对血清中鸡白血病病毒抗体检测发现,鸡白血病病毒感染在我国非常普遍,尤其是地方品系,且绝大部分为ALV-J,少数为ALV-A.对白血病的防制,目前尚无商品化疫苗,只能依靠对种鸡群的净化.     

马立克氏病毒1.8-kb mRNA对其上游双向启动子活性的影响

构建了针对1.8-kb mRNA基因簇潜在阅读框的RNA干扰质粒pP(1.8-kb-RNAi).将该质粒与包含其上游双向启动子的质粒pP(pp38)-CAT和pP(1.8-kb)-CAT共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)和MDV rMd5感染的CEF(rMd5-CEF),48 h后,通过测定转染细胞裂解液中氟霉素乙酰转移酶(CAT)的活性确定1.8-kb mRNA被干扰后对双向启动子活性的影响.结果显示,利用pP(1.8-kb-RNAi)质粒干扰1.8-kb mRNA,可以使其上游双向启动子两个方向的活性均显著下降(P<0.01),其中1.8-kb mRNA方向下跌29.5%,pp38方向下跌25.0%.本研究结果证明了1.8-kb mRNA对其上游双向启动子活性有增强作用.     

优质高产早熟糯玉米杂交种选育方法研究

针对生产上糯玉米品种普遍存在的问题,结合苏科花糯2008的成功育成过程,明确糯玉米的育种目标为优质(食用品质、外观品质和加工品质)、高产稳产、早熟,探讨选育思路、种质创新和各性状选择方法,并提出今后糯玉米种质创新的发展方向。     

彩色的陷阱-多位农民加盟彩色豆腐项目后血本无归

"投资4万元能博百万元!"这曾是"彩色豆腐"吸引他人加盟的一句广告词,类似广告词越来越多地用在各种特许经营企业的宣传语中,不知蛊惑了多少人,有些家庭甚至因此而倾家荡产.5月6日,北京市海淀区法院宣判了一起"彩色豆腐"合同纠纷案,缺席判决五味斋饮食文化传播有限公司赔偿甘肃农民张崇杨损失近4万元.     

SPF种鸡接种REV弱毒疫苗后安全性及母源抗体对SPF雏鸡的保护作用

18周龄SPF种鸡在用网状内皮增生病病毒（REV）弱毒疫苗免疫接种后,均在11d内产生REV特异性抗体。种鸡在免疫后1～15d内均未检出病毒血症。在开产后在5个月的产蛋期内,来自免疫种鸡的雏鸡100％REV母源抗体阳性。对3日龄雏鸡的攻毒试验表明,相对于无母源抗体的SPF鸡,REV母源抗体能有效地预防或减弱经接种REV低代毒造成的生长迟缓、中枢免疫器官萎缩及其对NDV和AIV灭活疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。     

发酵床连续养殖对白羽肉鸡病毒感染状态影响的分析

发酵床连续养殖是环保,节能的养殖技术,但它是否对疫病控制有不良影响,则是需关注的另一方向。采集同一地区不同养殖方式的白羽肉鸡样品,采用斑点杂交技术和抗体检测技术检测,试验结果表明,两种养殖方式在马立克氏病病毒(MDV)、网状内皮细胞增生病病毒(REV)检测结果上没有差别;在禽贫血病病毒(CAV)检测上抗体差异明显:发酵床养殖阳性率为28%,普通网上养殖阳性率为86%;NDV HI抗体滴度差异极显著(P<0.01)。综合评价发酵床连续养殖可有效控制疫病的感染。     

ALV-J相关的鸡急性纤维肉瘤发病模型的建立

【目的】证明纤维肉瘤病料中含有的ALV-J相关病毒能够诱发急性纤维肉瘤。【方法】将含ALV-J相关病毒的病料过滤液经不同部位接种1日龄817肉杂鸡;将该过滤液不同倍数稀释后接种1日龄SPF鸡和817肉杂鸡;将该过滤液接种细胞培养后的上清液接种1日龄817肉杂鸡,连续动态观测30 d。【结果】颈部皮下、胸肌、腹腔3个部位攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（20/20）、95.2%（20/21）、100%（20/20）。病料过滤液未经稀释接种817肉杂鸡和SPF鸡的肿瘤发生率均为100%（10/10）,10倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为80%（8/10）和100%（10/10）,100倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（10/10）和80%（8/10）,1 000倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为40%（4/10）和50%（5/10）,更高倍数稀释后攻毒鸡没有肿瘤发生。接种病料的细胞培养上清也能使33.3%（2/6）的鸡只发生肉瘤。病理组织学检测显示：诱发的急性肿瘤系典型的纤维肉瘤。【结论】817肉杂鸡肉瘤病料中含有ALV-J相关的急性致肿瘤病毒,不论是病料过滤液本身还是其接种DF-1细胞培养后的上清液都能在不同品种鸡复制出急性纤维肉瘤,最快在接种后7 d出现,且肿瘤发生的时间、动态和肿瘤发生率与接种量密切相关。