奶牛肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

2006年2月至4月，黑龙江省大庆市和内蒙古自治区某些奶牛场相继发生十余起产后奶牛急性死亡病例，经剖检发现这些病死奶牛病理变化非常相似，主要以败血症为主。经流行病学调查、病理学观察实验室病原分离鉴定以及动物实验，确诊发病原因为肺炎克雷伯氏杆菌感染。通过药物敏感性试验确定，该细菌对环丙沙星和菌必治高度敏感，对青霉素和复方新诺明不敏感。     

种鹅矛形剑带绦虫与背孔吸虫混合感染的诊治

2005年9月份,大庆市红岗区个体养鹅专业户送检6只病死的5月龄左右隆昌鹅和长白鹅,经过实验室诊断确诊为矛形剑带绦虫与背孔吸虫混合感染。矛形剑带绦虫属膜壳科     

牛冠状病毒S基因的序列分析及原核表达

为了解牛冠状病毒（bovine coronavirus,BCoV）的S基因变异情况并建立ELISA检测方法,本研究对采自不同牛场的新生犊牛腹泻（CD）和成年牛冬痢（WD）腹泻样本提取总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR扩增S全基因和S1基因。将S1基因目的片段连接表达载体pET-32a （+）,并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达。结果显示,CD与WD分离株S基因核苷酸为98.4%,CD和WD分离株与参考毒株BCoV-ENT株核苷酸同源性最高,分别为98.4%和98.5%,CD分离株与参考毒株SUN5株的同源性最低,为97.5%,WD分离株与FRA/EPI/Caen/2003/13同源性最低,为97.3%。通过比对可知,分离株与已知毒株之间存在较大差异,为疫苗候选毒株筛选提供依据。本试验同时构建了pET-32a-S1表达载体,在0.2 mmol/L IPTG诱导5 h时,重组菌能在大肠杆菌BL21感受态细胞中产生大量的S1融合蛋白,获得约58 ku表达产物。本试验成功表达了S1蛋白,并对BCoV进行了核苷酸进化分析,为疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础。     

犊牛群发冠状病毒性腹泻的诊断与治疗

1发病情况安达市某奶牛场存栏母牛400头,以舍饲为主。2012年3—5月份期间,新生犊牛发生腹泻,发病率100%,死亡率70%。母牛精神状态、食欲等均出现异常,发病仅限于1周龄以内犊牛,一般出生后2-3 d便出现腹泻。应用常见的抗生素和中药治疗,对症治疗采取补液、停喂母乳等措施均未见效果,死亡率极高。     

牛源空肠弯曲杆菌及其HSP43重组蛋白免疫原性研究

为评价牛源空肠弯曲杆菌(C.jejuni)及其HSP43重组蛋白(rHSP43)的免疫原性,本研究采用常规方法分别制备白油、铝胶佐剂和不加佐剂的全菌体免疫原和rHSP43免疫原,分别以不同剂量经皮下接种途径免疫6周龄小鼠,应用间接ELISA方法检测两种免疫原免疫小鼠后抗体消长情况,并通过攻毒实验评价其保护效果。结果显示,其产生的抗体水平白油佐剂组要高于铝胶佐剂组,两者明显高于未加佐剂组(p0.05)。在全菌体免疫原组中,5×109cfu/mL组免疫保护率高于5×107cfu/mL组,前者与5×105cfu/mL组相比较差异极显著(p0.01)。在小鼠免疫后21d以1×1010剂量的C.jejuni攻菌,全菌体免疫原能够提供完全保护,而以白油佐剂乳化的rHSP43仅能提供75%的保护。本研究结果为C.jejuni的疫苗研制提供了实验依据。     

母猪群发性晚产死胎病因分析

黑龙江省肇东市某猪场存栏生产母猪50头,于2009年10月,同期生产的15头母猪均出现产期滞后2~3 d,产死胎.母猪未见任何异常症状,而且死亡的胎儿也未见木乃伊化以及畸形等病理变化,但是剖检时发现流产胎儿心脏、脾脏、肾脏和膀胱黏膜等器官有散在的出血点.     

奶牛曼氏杆菌与大肠杆菌混合感染病原分离鉴定

大肠埃希菌(E.coli)是一切温血动物肠道后段常在菌,部分菌株具有致病性或者条件致病性,引起肠道疾病或者肠道外感染。溶血性曼氏杆菌     

检测牛边缘无浆体抗体的竞争抑制ELISA方法的建立

为建立检测牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)抗体的方法,本研究以牛A.marginale膜表面重组MSP5蛋白作为包被抗原,抗MSP5单克隆抗体(MAb)作为竞争抗体,建立一种用于检测牛A marginale抗体的重组MSP5蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法.经优化确定CI-ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为2μg/孔,封闭液为2%脱脂乳,MAb的稀释度为1:400,酶标二抗的稀释度为1:1000,阴性和阳性血清临界值分别为33%和40%;该方法具有良好的特异性和重复性;2 348份临床血清样品的检测结果表明,217份为阳性,阳性率为9.2%,与IDEXXA marginale抗体检测试剂盒的阳性符合率为95.3%,阴性符合率为100%.本实验建立的ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可用于流行病学调查研究.