大豆“南农94-16”突变体库的构建及部分性状分析

本研究对"南农94-16"大豆种子用NaN3-60Coγ射线复合诱变以及EMS诱变来构建大豆突变体库。两种方式诱变大豆分别获得54份和66份叶、茎、花、种子、子叶等性状变异的突变体。用644对SSR标记分别对其中的14株耐涝突变体和1株叶色浅绿突变体进行了鉴定。结果表明,14株耐涝突变体,有2株与对照有超过100个标记的差异,其余植株分别有1到7个标记的差异;叶色浅绿突变体与对照有39个标记的差异,遗传分析表明该性状由细胞核单基因隐性遗传控制。这些突变体可以作为新的种质资源,构建的突变体库也有助于大豆功能基因组研究的开展。     

大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A和其保持系的不同器官蛋白质组比较

质核互作雄性不育在杂种优势利用中起着重要作用,探讨质核互作雄性不育发生的机理具有重要的理论和实践意义.本研究开展大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的不同器官蛋白质组比较分析.以大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A和其保持系NJCMS1B的种子、叶片和花药为材料,采用双向凝胶电泳技术对其蛋白质进行分离,考马斯亮蓝染色,获得重复性好的蛋白质双向电泳图谱,利用PDQuest软件处理分析,寻找差异表达蛋白.结果发现不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的种子2-DE图谱间存在7个差异表达蛋白点,其中3个在NJCMS1A中表达而在NJCMS1B中缺失,3个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达,1个在NJCMS1A中表达量明显增强;苗期叶片2-DE图谱间基本一致,没有差异表达蛋白点;单核小孢子期花药2-DE图谱间有9个差异表达蛋白点,其中3个在NJCMS1A中表达而在NJCMS1B中缺失,6个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达;二胞花粉期花药2-DE图谱间有24个差异表达蛋白点,其中10个在NJCMS1A中表达而在NJCMS1B中缺失,12个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达,2个在NJCMS1B中表达量明显增强.两系花药间存在较多差异表达蛋白点,种子间仅有少量差异表达蛋白点,而苗期叶片间基本没有差异表达蛋白点,说明不育基因表达具有时空性和器官特异性,与育性有关的蛋白主要在花药中表达.     

油菜籽中转基因抗草甘膦油菜籽的定量检测

根据转基因抗草甘膦油菜(Brassica napus)中的外源基因GOX和内源基因PEP设计引物和TaqMan荧光探针，使用ABIPRISM 7700定量PCR仪对进口油菜籽中转基因抗草甘膦油菜籽的含量进行了定量检测，建立了转基因抗草甘膦油菜籽参照样品GOX和PEP之间的Ct值之差△Ct与样品中转基因抗草甘膦油菜籽含量百分比之间的标准曲线和线性回归方程，并对3个未知油菜籽样品和3个油菜籽粕样品进行了检测，转基因抗草甘膦油菜成分含量分别为：12．62％、4．96％、6．78％、4．13％、12．81％和11．74％。     

大豆抗食叶性害虫相关QTL与基因网络研究进展

大豆是重要的粮油作物,但其产量和品质受到食叶性害虫的严重影响。总结归纳了近10年来大豆抗虫分子遗传研究的成果,包括抗虫QTL定位、优异等位基因及载体材料发掘、优异杂交组合预测、抗虫相关基因鉴定及大豆与食叶性害虫交互调控基因网络分析等,并讨论了大豆抗虫研究面临的挑战和发展。     

大豆花叶病毒的组织印迹与RT-PCR检测

用改进的组织印迹方法批量检测黄淮地区69份SMV样品,结果显示42个标样呈现非常清晰的蓝紫色阳性反应,26个标样显色较弱而无法确证,1个标样呈阴性反应.进一步对图片进行600 dpi扫描并放大200倍进行分析,发现26个显色弱的标样中有25个呈阳性反应,1个标样显色很弱仍无法确证,使得检出率提高了37%.利用RT-PCR程序对随机选取的8个样品进行验证,发现纯化与未纯化的RNA模板均能得到较为清晰的扩增条带,而只有纯化后的PCR产物二次扩增才有预期的条带,且双酶切可产生245 bp、255 bp和307 bp 3个预期的片段.表明改进的组织印迹方法能够用于批量、高效地检测SMV,而RT-PCR可用于更为精确的检验.     

根际箱种植富含硫氨基酸转基因大豆对土壤硫转化酶活性及微生物功能多样性的影响

为研究转基因作物的土壤生态安全性,于根际箱中种植2组大豆(A组:转基因品系OE-8、OE-7、RNAi-3和受体南农88-1;B组:转基因品系Gaga1 17-4、Gaga1 21-8、Gaga1 57和受体N2899),采集大豆花期根际土壤,分析硫元素含量和芳基硫酸酯酶活性,并采用Biolog微平板法,研究相比于受体,转基因品系对土壤微生物群落功能多样性的影响。结果表明:OE-8和RNAi-3与其受体相比,根际土壤硫元素含量显著降低;2组组内对比结果显示,根际土样芳基硫酸酯酶活性差异均不显著。Biolog GN/GP/FF/ECO系统及多样性指数分析显示:A组中RNAi-3根际土壤微生物群落活性显著低于受体,微生物群落的丰富度、多样性和均度显著降低,OE-7根际土壤微生物群落的丰富度和均度显著降低;B组中Gaga1 57和Gaga1 17-4根际土壤微生物群落的丰富度、多样性和均度显著下降。     

大豆光合性状QTL的初步定位

光合速率的提高对大豆产量改良具有重要作用.本研究利用波高和南农94-156杂交所构建的RIL群体对4个光合性状QTL进行了初步定位.结果表明,大豆籽粒与光合速率间存在微弱的正相关,而4个光合性状间除光合速率与胞间CO2浓度外均为极显著的正相关.分别检测到1、2、1和2个QTL位点与光合速率(O连锁群)、气孔导度(A1和D1b W连锁群)、胞间COz浓度(G连锁群)和蒸腾速率(H和M连锁群)有关,相互间均不共位,前3个QTL解释的表型变异略低于10%,而后3个QTL可解释表型变异的10%以上.     

拟南芥(Arabidopsis thaliana)VSP cDNA的克隆、鉴定及基因表达

报道了从模式植物拟南芥花ｃＤＮＡ文库中分离鉴定的一个克隆。该ｃＤＮＡ的长度为８８７ｂｐ，其编译的蛋白质推断为２６８ａａ（氨基酸），与大豆营养贮藏蛋白（ＶＳＰ）的同源率达５０％。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，该基因在拟南芥叶片中仅有微量表达，但在花蕾，幼荚及茎中表达量丰富。采用发育后期的花为材料进行原位杂交，发现该基因的表达仅限制于子房壁。     

大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A及其保持系的花药差异蛋白质组学研究

 【目的】对大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A及其同型保持系NJCMS1B的二胞花粉期花药进行差异蛋白质组学研究，探讨大豆质核互作雄性不育的分子机制。【方法】采用双向凝胶电泳技术对其蛋白质进行分离，凝胶用考马斯亮蓝染色，使用PDQuest软件分析蛋白质图谱，利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术对差异表达蛋白进行质谱分析，获得肽质量指纹图谱，用Profound和Mascot软件搜索NCBInr数据库，初步鉴定差异表达蛋白并分析其功能。【结果】 在分子量18.4～116.0 kD、等电点4～7线性范围内，检测到约212个蛋白点，差异表达蛋白点24个。其中10个在NJCMS1A 中出现而在NJCMS1B中缺失，12个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中出现，2个表达量在NJCMS1B中比在NJCMS1A中明显增强。鉴定出11个差异表达蛋白，其中7个在NJCMS1A中出现而在NJCMS1B中缺失，4个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中出现。【结论】对主要差异表达蛋白如ACC氧化酶、半胱氨酸蛋白酶、V型H+-ATP酶A亚基、MADS盒蛋白、淀粉分枝酶和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶等进行功能分析，推测不育系NJCMS1A雄性不育性可能与能量代谢紊乱、细胞程序化死亡（PCD）、乙烯过度合成、淀粉合成受抑制和花器官发育调节基因作用失控等有关。     

黄淮地区大豆花叶病毒株系的鉴定与分布

2001-2002年采集了黄淮地区四省28个县市的大豆病样591份，经初步繁殖鉴定、生物纯化及组织印迹检测，得到了50个SMV毒株, 采用王修强等筛选的10个鉴别寄主进行接种鉴定，检测到SC-3～SC-9等7个株系群，发现1个新的株系群SC-10。综合本单位1998－2002年的结果，黄淮地区(河南、山东、安徽北、江苏北) 在SC-1~SC-10中，除SC-2未发现外，9个株系群中，以SC-3和SC-7为主，分别占29.21% 和23.60%，SC-4和SC-8其次（10.11%、8.99%）。在各省分布上，河南省有7个株系群，SC-3、SC-4为主，SC-5、SC-7其次；山东省4个株系群，以SC-3为主，SC-8也占相当比重；皖北7个株系群，以SC-7和SC-9为主，其次SC-10；苏北8个株系群，以SC-3和SC-7为主，其次SC-8。按株系群看，SC-3、SC-4各省均有；SC-5、SC-6 、SC-7 在河南、皖北、苏北3地；SC-1、SC-8在河南、山东、苏北3地；SC-9只在皖北发现；SC-10在皖北、苏北2地发现；SC-2在黄淮未发现。