不同揭膜培土技术对云烟87品质的影响

采用田间试验研究了不同揭膜堵土技术对云烟87的生长发育、经济性状、物理指标及化学成分的影响.结果表明:与不覆膜的烤烟相比,经过揭膜处理的烤烟在叶片面积、有效叶片数、株高、茎围方面有一定的优势;产量和产值均有不同程度的提高;初烤后叶片的叶长、叶宽及单叶重均有所增加;且在化学品质方面更为协调.总体而言,移栽后地膜覆盖至旺长期揭膜可以显著提高云烟87的品质.     

豆类丝核菌中生物碱的提取及苦马豆素含量测定

将豆类丝核菌菌株 7-1、7-3接种于改良 Czapek′s培养基 ,置 2 5～ 2 7℃培养箱培养 1 4d。收集菌丝体 ,自然干燥后乙醇索氏提取 ,回收乙醇至糖浆状 ,H2 O∶ CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H1 0后 ,再用 H2 O∶CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H7,浓缩后上 73 2型强酸性阳离子交换树脂 ,用 1 mol/LNH4 OH洗脱 ,收集氨洗液 ,调 p H7,浓缩后冻干 ,得到一种浅黄色粉末。取苦马豆素标准品 1 0 0 μg及浅黄色粉末提取物 1 0mg,分别用 1 ml吡啶溶解 ,取 0 .1 ml加 BSTFA0 .1 ml,5 0℃水浴 3 0 min。取反应液 1 μl,直接进样作 GC。结果表明 ,在相同的气相色谱条件下 ,在相同出峰时间 (1 .2～ 8min)内 ,标准品的峰形与总生物碱的峰形完全一致 ,可以判定生物碱中含有苦马豆素。根据计算得出菌株 7-1、7-3生物碱中苦马豆素含量为 5 .90 3 mg/g和 7.0 0 6mg/g。     

表达IBDV VP2蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建及免疫原性分析

通过PCR克隆出IBDV VP2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-VP2。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550（缺失Asd、Cya、Crp基因）,获得重组疫苗菌株X4550（pYA3341-VP2）。进行重组菌VP2蛋白表达的鉴定;测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性以及小鼠免疫试验。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE和Western blot证实重组菌表达的VP2蛋白能与鸡抗IBDV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;口服重组菌免疫小鼠,ELISA检测产生了抗IBDV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。本试验成功构建了能稳定表达IBDV VP2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550（pYA3341-VP2）,为研究IBD口服基因工程疫苗奠定了基础。     

猪细小病毒NS基因原核表达与多克隆抗体制备

旨在制备抗猪细小病毒(PPV)非结构蛋白共有氨基酸的NS多肽多克隆抗体。根据GenBank(MK993540)公布的PPV基因组序列,克隆其非结构蛋白NS1、NS2共有基因序列(NS基因),并进行生物信息学分析。进而将NS基因克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-NS,转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,利用镍柱亲和层析技术纯化表达的重组多肽,用重组多肽免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,PPV杨凌株NS基因长258bp,编码86个氨基酸的多肽,是具有亲水性的非跨膜NS多肽,具有大量的B细胞线性表位。NS多肽在37℃、0.8mol/L IPTG条件下,诱导6h有大量的可溶性表达。免疫印迹试验结果显示,该多肽具有较好的抗原性。用纯化NS多肽免疫小鼠后获得鼠抗NS多肽的血清抗体效价为1∶12800。用制备的NS多克隆抗体检测纯化的NS重组多肽及真核表达的NS1蛋白,均能检测出相应特异性条带,为进一步研究NS蛋白在PPV致病过程中的作用奠定了基础。     

一只野生大熊猫死亡的病理学诊断

对一只死亡的野生雌性大熊猫进行了系统的病理学检查。主要病变：右侧下颌有一洞创深达皮下结缔组织；咽部食道与颈椎间有一形态不规则的大脓肿，颈下结缔组织中散布多个小脓肿，脓液灰白糊状；颌下、肺门等处淋巴结肿大化脓；右后肢腓骨和右侧第９，１０肋骨呈未愈合陈旧性骨折；肝门区有两个已钙化脓肿，肝细胞及间质局灶性变性坏死，少量炎细胞浸润；化脓性支气管肺炎，颈下皮下蜂窝织炎；多种组织器官内可见球菌样物质和微血栓。病理学诊断为脓毒败血性休克。     

油松专用包膜肥养分释放及育苗效果研究

利用水浸法和培养基淋溶法对包膜肥的养分释放特征做了初步的研究,表明包膜肥比普通肥料能够延缓肥料的释放时间.通过油松育苗试验,发现2种肥料对苗木在最初1月内的生长影响不显著,普通肥料在初期的养分释放速度比包膜肥释放快,在后2个月的生长期内,施用包膜肥的苗木,其生长情况与施用普通肥料的苗木的生长情况出现显著性差异,而且施用包膜肥的培养基中各营养元素的浓度明显高于施用普通肥料的培养基.     

开放环境下烟叶等级RGB图像智能识别及判别模型的构建

为烟叶生产及分级人员提供高效、精确、方便和低成本的烤烟等级智能判别方法,采用开放环境下烟叶RGB图像识别方法,通过百分位区间估计,确定B2F和C3F等级烟叶外观质量的红色(Red)、绿色(Green)、蓝色(Blue)3个色彩通道及灰度图像叶色均值区间及叶型特征区间,并基于贝叶斯分类器,构建智能判别模型,通过系统固化后对烟叶样品进行等级识别判定。结果表明:红色(Red)、绿色(Green)、蓝色(Blue)通道及灰度图像的色阶均值25%分位点及75%分位点可作为B2F和C3F等级烟叶叶色判别区间的上限和下限;烟叶叶片长宽比及叶片有效面积占比不满足判别区间的条件,不选择叶型参数作为判别区间;构建的模型对B2F和C3F等级烟叶判别的准确率分别为92.86%和95.56%,总体准确率为94.21%,且不受干扰叶片的影响,判别精度较高。     

甘肃棘豆化学成分研究Ⅱ.石油醚萃取部位成分分析

甘肃棘豆粉乙醇热回流,回收溶剂后,用1 mol/l HCl酸化,抽滤,滤渣用石油醚萃取,回收石油醚,得到石油醚萃取部位.取该部位硅胶层析柱,先用石油醚,石油醚:氯仿(v/v)50:1、30:1、20:1、15:1、10:1、8:1、5:1、2:1、1:4,氯仿洗脱,每20 m1收集一份.再用氯仿:乙酸乙酯(v/v)10:1、1:1,乙酸乙酯洗脱,每40 ml收集一份,共收集585份,TLC检测,合并相同部分.石油醚萃取部位作GC-MS,显示有93种化合物,确认了18种化合物的结构,其中酯13种,烷烃3种,羧酸2种.     

美丽马醉木叶毒素对家兔的毒性研究

对家兔进行了美丽马醉木叶毒素毒性试验。临床化验表明，红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量、血清谷丙转氨酸酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、胆碱酯酶活性均有不同程度升高。 病理学检查发现，全身各组织器官出血、淤血、心脏扩张，肺严重淤血性水肿，心、肺、肝、肾实质细胞变性甚至坏死。     

猪细小病毒VP2的原核表达与多克隆抗体制备

克隆猪细小病毒(PPV)VP2基因全长1 740bp,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达与纯化,接种家兔制备多克隆抗体。用PCR方法扩增PPV VP2全长基因,扩增产物克隆至表达载体pET-32a并转化至E.coli BL21(DE3)感受态中。分别用不同诱导时间、IPTG浓度、温度诱导表达VP2重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。对家兔进行3次免疫后,采集血清制备抗体。PCR扩增得到1 740bp的VP2基因片段;构建原核表达载体pET-32a-VP2,经37℃,IPTG浓度1.0mmol/L诱导表达4h可得分子质量大小约为82ku目的蛋白;间接ELISA检测抗体效价可达1∶12 800;Western blot证明所制备的抗体能够有效的应用于PPV VP2抗原的检测。本研究成功构建了表达PPV VP2基因的原核载体,获得了VP2蛋白,制备了兔抗多克隆抗体,为建立检测PPV VP2蛋白ELISA方法奠定了基础。