传染性法氏囊病病毒JS株VP2基因真核表达载体的构建及其应用

应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo( ),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。     

徐州地区鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定及药敏试验

从徐州地区临床疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中分离到细菌21株，通过细菌形态、培养特怔、生化试验和动物试验，鉴定为鸭疫里默氏杆菌菌株，对不同地区分离到的21株菌进行了24种常用抗菌药物的药敏试验，结果该24个菌株对头孢类药物、红霉素、链霉素、妥布霉素、新霉素、氯霉素、泰乐菌素、痢特灵等几种药物敏感性较高，对喹诺酮类、强力霉素、丁安卡那霉素、林肯霉素、庆大霉素、氟苯尼考、利福平、复方新诺明等均不同程度地产生了耐药性。不同地区分离到的鸭疫里默氏杆菌对不同抗菌药的敏感程度存在较大差异性，研究结果为该地区鸭传染性浆膜炎的药物防治提供了很好的理论依据.     

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立

利用抗J亚群禽白血病病毒（ALV—J）囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9，建立了检测ALV—J env抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清．结果均为阴性，无交叉反应；抗ALV—J阳性血清与ALV—J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断；ALV—J阳性血清经酸处理后，ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV—J阳性血清样本进行电镜观察，可见ALV—J样病毒粒子及ALV—J样免疫复合物。经与间接免疫荧光（IFA）检测ALV—J env抗体结果比较表明，建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率，群体符合率为8／9。这些结果表明，本研究建立的ELISA方法在ALV—J的诊断中具有很好的应用前景。     

牛γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达

应用RT-PCR技术从经植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛-γ干扰素基因(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)cDNA,并克隆到pGEM-T easy载体中,经过限制性酶切分析和测序证实,所克隆到的基因编码区序列与已报道的序列完全一致.将含信号肽的BoIFN-γ基因整个编码区cDNA亚克隆到杆状病毒转座载体pFastBac Ⅰ中,构建了转移载体pFastBac 1-BoIFN-γ,转座到宿主菌DH10 Bac中,在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的KGTIX LB平板上筛选白色菌落,提取DNA获得重组穿梭载体Bacmid-BoIFN-γ质粒,与脂质体共转染Sf9细胞,产生有感染力的重组杆状病毒reBac-BoIFN-γ.重组病毒经过传代扩增感染Sf9细胞,通过IFA试验、Western-blot和抗病毒活性测定证实,BoIFN-γ基因在感染的昆虫细胞和上清中得到了表达,上清中活性可达2.651×105U/mL.表达条件优化结果表明,不同MOI对rBoIFN-γ的表达产量影响不大,上清中干扰素活性在感染后5 d达到高峰.     

椰心叶甲在国内的危害与防治研究概况

本文介绍了椰心叶甲在国内的发生、危害、生物学及发生规律,并对椰心叶甲的防治技术作了简要综述。     

RNAi导致基因沉默的机制和应用进展

RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21~23 nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现的；RNAi需要多种蛋白质因子以及ATP参与,而且具有生物催化反应特征；RNAi具有高效性和高度特异性,作为一种关闭特定基因的新技术,为基因功能研究提供了一个快速、简便的方法,在后基因组时代应用前景广阔。     

枣龟蜡蚧的发生与防治

近年来枣龟蜡蚧的危害日趋严重,在枝干上,树叶上弄成一个个小白点,吸食枣树汁液,造成枣树树势衰弱;同时排泄物布满全树,7—8月雨季引起大量煤污菌寄生,使枝叶面、果     

绿僵菌无纺布菌条制作工艺

在接种优良液体种子的基础上，以单位面积的产孢量为指标，筛选了制作多种蛀干害虫的病原——绿僵菌无纺布菌条的最佳营养组合及培养条件。结果表明，最佳营养条件为（g／L）：白砂糖20g、黄豆粉40g、蛋白胨6g；琼脂含量对产孢量无显著影响；最佳培养条件为：25℃下，相对湿度（RH）95％，产孢量可达3．6×10^8～3．7×10^8孢子／cm^2。     

精浆和精子对母兔子宫免疫及孕向发育的影响

在结扎子宫颈的情况下,分别在兔同一子宫的两侧子宫角剖腹注入生理盐水(对照)、精浆或精子以研究精浆和精子对子宫免疫和孕向发育的影响。试验共用母兔18只,每组6只。在注入后72 h时处死试验用兔,取子宫进行一般测量,并切片染色,用图象采集分析系统进行研究。结果表明:1)注入子宫的精浆和精子,都能明显降低黏膜中的肥大细胞数量和增加子宫角中冲洗液内的细胞数(P0.01)。精浆与精子相比,精浆降低黏膜中肥大细胞数量的作用更大(P0.05);而精子提高子宫角冲洗液内细胞数的作用更强(P0.01)。2)无论精浆还是精子,都能显著(P0.05)或极显著(P0.01)促进子宫(子宫角指数、子宫角长度和子宫角直径)、子宫壁(子宫壁厚度、黏膜层厚度、黏膜上皮层厚度和肌层厚度)、黏膜腺体(腺体数和腺上皮的厚度)以及黏膜血管的孕向发育。精浆与精子相比,就子宫、子宫壁及黏膜血管的孕向发育来说,精浆的作用更明显(P0.05或P0.01);而对子宫黏膜腺体孕向发育的作用,精浆和精子间没有明显差异(P0.05)。     

汉中市中药材生产机械化初探

<正>目前,我国主要粮食作物生产机械化水平已接近基本实现机械化的目标。全面机械化的条件已经成熟,亟待理清新一轮农机化发展思路,打造升级版的农机化,为农业现代化和扶贫攻坚战做出应有贡献。汉中素有"生物基因库"和"天然药库"之称,是全国中药材的传统主产地之一和汉江流域历史上中药材的重要集散地。本文以陕西省汉中市为例,分析中药材生产机械化现状、存在问题,提出发展对策,以期促进该领域农机化发展。