检测细胞因子对监测鸡免疫抑制病的临床价值

细胞因子是指一些由机体免疫或非免疫细胞产生的具有生物活性,与造血、炎症和免疫应答反应密切相关的小分子多肽类糖蛋白。因此,在动物免疫抑制病中对细胞因子的检测有着非常重要的临床价值。文章介绍了细胞因子的检测方法、与免疫抑制相关的细胞因子及细胞因子检测在研究动物免疫抑制病中的价值。     

BOX-PCR技术在细菌遗传多样性研究中的应用

以BOX片段(细菌基因组重复序列)为基础的原核生物DNA指纹图谱技术,具有操作简单快捷,可重复性强,容易获得较为丰富的扩增条带等特点。作者综述了BOX-PCR指纹图谱分析技术的特点和一般步骤,并对该技术在细菌菌株遗传多样性研究领域的应用现状和前景进行了阐述。     

核酸适体及其在疫病诊断上的应用

核酸适体是指采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。鉴于适体特有的亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等特点,其被广泛应用于分析化学、基因调控、蛋白质组学和新药研发等领域。在疫病的检测方面,核酸适体逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已初步应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种检测技术平台,并具有良好的敏感性和特异性,显示出了良好的应用前景。本文就适体技术及其在疫病诊断中的应用进展作一综述。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量

为建立一种能够快速定量检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。对GenBank登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守的5′端非编码区设计1对针对猪瘟兔化弱毒疫苗的特异性引物,扩增片段为245 bp,且不与牛病毒性腹泻病毒以及其他猪源病毒发生非特异性反应。应用实时荧光定量RT-PCR法对16份猪瘟脾淋苗和细胞苗进行定量检测,结果表明,102拷贝/μL的总RNA即能得到特异性扩增,在107~102拷贝/μL线性范围内有良好的扩增曲线,并与兔体定型热反应有良好的相关性。该法具有敏感性、特异性、重复性好等优点,可望取代传统的兔热法用于猪瘟疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供一种新的有效工具。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立及应用

根据GenBank登录的猪流行性腹泻病毒株FJ473395的M基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出182 bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,产物Tm在85～85.5℃之间,灵敏度为5.875拷贝/μL,特异性和重复性较好。本试验建立了检测PEDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断,并定量分析PEDV感染程度奠定了基础。     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

为建立一种快速检测流行性乙型脑炎病毒抗体的方法,本研究参照已发表的JEV基因组序列,应用RT-PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体中,经诱导后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测流行性乙型脑炎病毒抗体的E-ELISA诊断方法。该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

猪繁殖与呼吸道综合征病毒RT-PCR检测方法研究

为建立一种能够快速、确切诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的方法,根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核苷酸序列设计并合成了一对能特异性扩增PRRSV基因片段的引物,经过条件优化后,建立了检测PRRSV的RT-PCR方法,扩增病毒核酸片段长432bp.试验证明,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,简便、快速、高效,为PRRSV的快速准确诊断及进一步的PRRSV的流行病学研究提供了重要的技术手段.     

猪瘟病毒RT-PCR检测方法的研究

为建立一种能够快速、确切诊断猪瘟（CSF）的方法,根据GenBank上已发表的猪瘟病毒（CSFV）核酸序列设计并合成了一对能特异性扩增CSFV基因片段的引物,经过条件优化后,建立了检测CSFV的RT-PCR方法,扩增病毒核酸片段长508bp。试验证明,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,简便、快速、高效,为CSFV的快速准确诊断及进一步的CSF流行病学研究提供了重要的技术手段。     

海盐县农技推广体系现状分析及对策建议

海盐县地处浙江沿海发达地区,介绍了海盐县农技推广体系和农技队伍的现状和发挥的作用,分析了存在的问题．并有针对性地提出了发展方向和建设性对策建议。