地克珠利饮水剂生产工艺研究及临床药效试验

本试验通过溶剂和助溶剂的筛选，研制成功地克珠利饮水剂。生产工艺和产品符合《中国兽药典》（１９９０年版）要求。临床药效试验表明地克珠利饮水剂按０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ剂量使用，抗球虫指数值均超过１８０，均具有高效抗球虫效力。     

测定地克珠利混悬液中的聚山梨酯20含量和枸橼酸含量的方法

利用反相高效液相色谱法和蒸发光检测器快速便捷地测定地克珠利混悬液中聚山梨酯20和枸橼酸的成分及含量。吐温20方法：HPLC条件,Thermo U3000。流速：0.5 mL/min。流动相A:水,流动相B:乙腈。用梯度洗脱。ELSD 6000,漂移管温度：115℃。气体流速：2 L/min,稀释剂：乙腈。枸橼酸方法：橼酸的色谱条件：色谱柱：Tech Mate ST C18 250 mm×4.6 mm, 5μm,流动相：A;20 mmol磷酸氢二钠(用磷酸调节pH至3.0)B:色谱甲醇。流动相A∶B=95∶5。流速：1.0 mL/min,柱温：30℃紫外检测波长：UV 210 nm。该方法经过验证,有较好的精密度,线性及回收率等验证结果。该方法可以实现准确的定量分析,可作为一个可靠的检测方法。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡饲料中地克珠利的含量

本试验建立了鸡饲料中地克珠利(DIC)含量检测的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。采用乙腈提取饲料中的药物,经硅胶固相萃取小柱净化后,超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)分析。整个色谱总时间为3.5 min。结果表明,在5、50、500μg/kg(仅配合饲料)和2000μg/kg(仅预混合饲料)的浓度添加水平下,饲料中地克珠利的回收率范围为90.28%～97.16%;日内变异系数范围为9.24%～14.10%,日间变异系数范围为9.73%～14.87%。以3倍信噪比为检测限,10倍信噪比为定量限,得出该方法的检测限为2.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。该方法操作简单,灵敏度、准确度和精密度均符合饲料中药物添加剂分析的技术要求,能够满足饲料中地克珠利的含量测定需求。     

地克珠利对球虫感染雏鸡血清抗氧化功能的影响

选择120只14日龄雏鸡,随机分为对照组(Ⅰ)、感染组(Ⅱ)和地克珠利组(Ⅲ),每组40只.除Ⅰ组外,其余每只鸡口服感染8.0x104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染后第0、3、6、9、12天,每组随机取鸡5只,心脏采血,对血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量进行测定.结果表明,与Ⅰ组比较,Ⅱ组血清SOD活性在感染后3、6、9 d极显著降低(P《0.01),GSH-Px活性在感染后6 d下降显著(p《0.05),MDA含量和CAT活性均表现不同程度的升降,但差异不显著(p》0.05).在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清SOD、GSH-Px、CAT活性虽然与Ⅱ组的差异未达显著水平,但分别较其提高了7.33%、19.82%和52.08%,MDA含量降低了14.58%,且GSH-Px、CAT活性与MDA含量与Ⅰ组比较差异不显著.提示地克珠利在一定程度上能增强球虫感染鸡的抗氧化能力.     

贝氏隐孢子虫鸡胚和雏鸡增殖模型筛选抗隐孢子虫药物试验

为探讨复方磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、地克珠利和阿奇霉素4种药物对鸡胚和雏鸡人工感染模型中鸡源贝氏隐孢子虫的作用,筛选有效防治隐孢子虫药物,采用鸡胚培养和人工感染雏鸡模型,分别以各组鸡胚发育状况、鸡胚中卵囊量、雏鸡精神状态、排卵囊规律、体质量变化、发病率、死亡率等为观察指标,考察这4种药物对隐孢子虫的作用。结果显示,使用复方磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、地克珠利、阿奇霉素组鸡胚中虫体数分别为阳性对照组的15.05%、88.71%、77.42%、68.82%。复方磺胺对甲氧嘧啶可缓解人工感染雏鸡隐孢子虫病临床症状,感染雏鸡发病率降低20%,死亡率降低13.13%,且可使排卵囊强度降低。结果表明,复方磺胺对甲氧嘧啶以一定剂量连续使用一定时间对雏鸡贝氏隐孢子虫病有潜在治疗作用。     

杀球灵(Diclazuril)和麦杜拉霉素(Maduramycin)等四种聚醚类抗菌素对鸡巨形艾美尔球虫(E.maxima)药效的笼饲试验

对杀球灵和其它4种聚醚类抗菌素麦杜拉霉素,那拉菌素(Narasin),拉萨洛菌素(Lasalocid),莫能菌素(Monensin)的抗巨形艾美尔球虫效力进行了笼饲试验.重度感染情况下,和感染不给药对照组相比,5ppm麦杜拉霉素,80ppm那拉菌素,100ppm拉萨洛菌素和100ppm莫能菌素可防止鸡只死亡,改善增重,减轻肠道病变和减少卵囊数量.1ppm杀球灵组出现10%死亡,但是从增重和病变来看,鸡只仍然受到保护,粪便里也很少见到卵囊.对肠粘涂片的观察显示杀球灵明显抑制了巨形艾美尔球虫的有性生殖阶段,即配子生殖阶段的发育.从抗球虫指数来看,上述5种药对巨形艾美尔球虫的效力依次是拉萨洛菌素,麦杜拉霉素,杀球灵,那拉菌素和莫能菌素.     

5%地克珠利纳米乳对鸡球虫病的疗效研究

【目的】研究5%地克珠利纳米乳对鸡球虫病的疗效。【方法】选择300只18日龄的雏鸡,随机均分为5%地克珠利纳米乳高、中、低剂量组,0.5%地克珠利溶液组,阴性对照组和阳性对照组6组,试验组和阳性对照组每只鸡经口接种柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)卵囊悬液0.5mL(含球虫卵囊1.0×105个),阴性对照组接种等量生理盐水,感染48h后饮水给药,按地克珠利计,5%地克珠利纳米乳高、中、低剂量组给药质量浓度分别为2.0,1.0,0.5mg/L,0.5%地克珠利溶液组给药质量浓度为1.0mg/L,给药5d,阴性对照组和阳性对照组正常饮水。人工感染后第8天测定相对增重率、存活率、盲肠病变值、卵囊值和抗球虫指数。【结果】5%地克珠利纳米乳中剂量组疗效最好,抗球虫指数达195.81,相对增重率达95.81%,存活率为100%,病变值为0,卵囊值为0。【结论】5%地克珠利纳米乳是一种高效抗球虫药,临床推荐用量1.0mg/L(按地克珠利计),饮水给药。     

液相色谱-串联质谱法研究地克珠利在家兔组织中残留及消除规律

[目的]建立一种检测家兔组织中地克珠利含量的液相色谱-串联质谱法（LC—MS／MS）,研究地克珠利在家兔组织中的残留及消除规律。[方法]选择48只家兔（雌雄各半）,在饲料中加入10g／1000kg地克珠利混饲,连续饲喂30d。分别于休药后的第0、1、2、3、4、5、6天,每个时间点随机处死6只家兔（雌雄各半）,取肌肉、肝脏、肾脏组织,DMF,乙腈沉淀法提取并用LC—MS,MS法检测地克珠利残留量。[结果]地克珠利在肾脏中的残留量最高（休药0d为912．6μg／kg）,肝脏次之（休药0d为156．μg／kg）,肌肉最低（休药0d为43．1μg／kg）,在肾脏中的消除速度最快。[结论]该方法适于检测家免组织中的地克珠利含量。休药0d即可满足欧盟要求     

斯氏艾美耳球虫内生发育超微结构及杀球灵超微结构效应研究

本实验应用电子和光学显微技术,对斯氏艾美耳球虫(Eimeria stedae)内生发育阶段的虫体超微结构进行了详细观察。并在此基础上应用苯乙晴类抗球虫药杀球灵(Diclazuril,R64433)作用于虫体,对其超微结构的变化进行比较。结果表明:正常发育时,子孢子含有二个折光体,棒状体的数目达十多根;第一代裂殖子内具有折光体;第四代 B 型裂殖子具有一体多核现象;小配子体在发育过程中可能分裂成几块;高尔基附体可能参与卵囊壁的形成。杀球灵作用之后,裂殖子的细胞核膜模糊,核质及细胞质内出现空泡,线粒体肿胀;大配子体的壁形成体产生受到抑制,高尔基体严重增生。     

杀球灵对家兔黄艾美耳球虫人工感染的预防效果研究

以１×１０＾－６的杀球灵拌料饲喂，预防家兔黄艾美耳虫３×１０＾４个孢子化卵囊的人工感染。结果表明增重显优于感染对照组，显抑制卵囊增殖，药物预防保护率达９６．１％。攻虫后的肠道粘膜经扫描电镜观察发现，感染对照组肠粘膜有严重的形态病变；药物预防组肠粘膜仅有轻的病理形态学变化，但结肠粘膜纵行皱折严重萎缩。作认为杀球灵邓有好，但初步建议连续用药时间不宜过长。