高效液相色谱法测定饲料中总抗坏血酸含量

研究并建立了饲料中总抗坏血酸含量的高效液相色谱测定方法。样品加少量甲醇浸润后超声,再加入0.5 mM磷酸二氢钾溶液超声提取,过滤后,取滤液加入等体积的二硫苏糖醇溶液反应2 h,用紫外检测器在262 nm波长下检测。色谱柱:C18柱(4.6 mm×250mm,5μm);流动相:0.1%乙酸溶液+甲醇=95+5。L-抗坏血酸浓度在0.5～20 IU/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,加标回收率为92.3%～102.3%,精密度试验结果相对标准偏差分别为0.77%、1.24%,检出限和定量限分别为4 mg/kg、10 mg/kg。结果表明:该法准确度高、重现性好、结果可靠。该方法适用于L-抗坏血酸原料、配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料中的总抗坏血酸含量的定量检测。     

三丁基膦(TBP)和二硫苏糖醇(DTT)在秦川牛肌肉组织双向电泳中使用效果的差异及原因分析

合适的还原剂对蛋白的完全溶解以及较好双向电泳结果的获得至关重要。三丁基膦(tributyl phosphine,TBP)通常被认为是比二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)更为有效的还原剂。本实验首次从图谱质量和蛋白分布两个方面,详细对比了TBP和DTT在秦川牛(Bos taurus)肌肉组织全蛋白和肌质蛋白双向电泳中的使用效果。结果表明,和TBP相比无论是全蛋白还是肌质蛋白,使用DTT作为还原剂的图谱背景均更为清晰,分辨率更高,对高分子量蛋白以及低丰度蛋白的提取也更为有效。因此,DTT比TBP更适用于秦川牛肌肉组织双向电泳。本研究的结果和传统的观点并不一致,初步分析了该原因,可能是TBP较短的半衰期导致了其在双向电泳中较差的使用效果。该实验为双向电泳的样品制备以及牛肌肉组织蛋白质组学研究提供了技术资料。     

隐孢子虫PCR检测中模板DNA提取方法比较

用4种不同方法抽提隐孢子虫卵囊DNA作模板，以1对人工合成的寡聚核苷酸为物进行聚合酶链反应，均能扩增出540bp特异性DNA片段，比较这4种方法的操作过程和卵囊最氏检测量对它们进行综合评价，其中20g/L二硫苏糖醇冻融法最佳，具有敏感，简便，快速等优点。     

二硫苏糖醇对海水胁迫下菠菜活性氧代谢及叶绿素荧光特性的影响

 以耐海水菠菜品种‘荷兰3号’为材料,采用水培方法,研究了二硫苏糖醇（DTT）对海水胁迫及甲基紫精（MV）诱导下菠菜活性氧代谢及叶绿素荧光特性的影响。结果表明,海水胁迫与MV处理一样,诱导菠菜叶片产生氧化胁迫,使超氧阴离子（）产生速率、过氧化氢（H₂O₂）含量和丙二醛（MDA）含量显著上升,叶绿素a（Chl.a）、叶绿素b（Chl.b）、总叶绿素[Chl.(a + b)]和类胡萝卜素（Car.）含量显著下降,最大光量子产量（F_v/F_m）、实际光量子产量（Yield）、电子传递速率（ETR）和光化学猝灭系数（q_P）显著降低,而非光化学猝灭系数（NPQ/4）显著上升;海水胁迫与MV处理下,由叶柄导入叶黄素循环活性抑制剂DTT,菠菜叶片活性氧（ROS）大量积累,导致光合色素降解加剧,F_v/F_m、Yield、ETR、NPQ、q_P进一步下降。上述结果表明,海水胁迫抑制了菠菜叶片叶黄素循环活性,降低了叶片非辐射能量耗散能力,加重了叶片ROS积累,从而导致光合色素含量降低,PSⅡ活性下降,电子传递速率降低,用于光化学反应的能量部分减少,光合作用受到严重影响,说明海水胁迫下叶黄素循环在保持菠菜叶片光合色素稳定和光合作用正常运转中发挥重要作用。     

二硫苏糖醇对刺参卵母细胞体外成熟的影响

用海星鞘神经提取液和二硫苏糖醇对刺参卵母细胞进行了体外人工促熟研究。结果显示,二硫苏糖醇对刺参卵母细胞具有明显的促熟作用。刺参卵母细胞包被在滤泡中发育,卵母细胞通过动物极的卵突起连接到单层细胞构成滤泡膜上,充分发育的卵母细胞处于生发泡期,染色质凝集在核仁周围,处于生发泡期的卵母细胞在海水中不会自发成熟。用二硫苏糖醇处理充分发育的卵母细胞20min,卵母细胞的生发泡开始移动,并锚定在卵母细胞的动物极,继而出现生发泡破裂。此后,减数分裂重新启动,第一、二极体分别排出。但海星鞘神经提取液对刺参卵母细胞没有促熟作用。实验表明,二硫苏糖醇浓度在10-5～10-1mol/L范围内,均可促使刺参卵母细胞发生生发泡破裂,10-2mol/L时诱导卵母细胞成熟率可达90%以上。     

辣椒叶片DNA提取方法的优化

对提取植物DNA的CTAB法进行了改进.使用Retsch研磨仪极大地提高了效率,并在CTAB提取液中添加0.2%的二硫苏糖醇可以有效防止酚类物质的氧化及与DNA的不可逆结合.紫外吸收检测DNA A260/A280=1.7～1.8;经琼脂糖凝胶电泳检测得到一条带型较宽且清晰的DNA谱带,辣椒叶片DNA平均产量为29.8μg/100 mg,证明所提取DNA的质量和得率均较高;酶切结果表明DNA质量较高,能够酶切完全;PCR扩增到的特异性条带明亮、整齐,基本无拖尾,达到各种分子标记等研究技术的要求.     

不同浓度DTT或GSH预处理猪精子对ICSI效果的影响

试验采用不同浓度的DTT或GSH预处理猪精子,统计ICSI后精核解聚率、雄原核形成率及胚胎发育情况.结果表明,①精核解聚率随DTT浓度的增加而提高,6 mmol/L DTT处理组的2PN 2Pb形成率(P＜0.01)和卵裂率(P＜0.05)均高于其余各组.随着DTT浓度的增加,囊胚总细胞数呈现下降趋势.表明6 mmol/LDTT预处理精子的ICSI效果较好,但DTT在促进精核解聚的同时所产生的副作用在一定程度上影响了ICSI胚胎的后期发育;②随着GSH浓度的升高,注射卵母细胞的2PN 2Pb形成率、MPN形成率和精核解聚率均呈上升趋势.0.5 mmol/L GSH处理组的卵裂率高于其余处理组(P＜0.05)和对照组(P＜0.01),囊胚发育率显著高于对照组(P＜0.05).说明0.50 mmol/L GSH处理组的ICSI效果较好;③0.5 mmol/L GSH处理组的2PN 2Pb形成率、卵裂率和囊胚总细胞数极显著高于6 mmol/LDTT处理组(P＜0.01),两者MPN形成率差异显著(P＜0.05).表明0.5 mmol/L GSH预处理精子的ICSI效果要好于6 mmol/L DTT.     

农杆菌介导的花生遗传转化条件优化

为建立花生快速高效的遗传转化体系,以浸泡吸水后的花生半粒种子为转化受体,利用根癌农杆菌介导法,以除草剂Basta抗性筛选及基因组DNA的Bar基因PCR检测为指标,优化花生遗传转化体系。研究结果表明,在侵染悬浮液中加入1mmol/L二硫苏糖醇（DTT）提高了农杆菌介导的转化效率（最高提升36.5 %）;与YEB培养液相比,AB重悬液的使用显著提高了农杆菌的转化效率（最高提升19.3 %）;农杆菌菌液OD600为0.7时转化效率最高;基因型显著影响转化效率,EXP27-1516的转化效率为69.03%,显著高于14AU01（56.67 %）;以花生半粒种子为转化受体,从种子培养到形成茁壮根系仅需8周,明显短于子叶节转化所需的13周。优化后的农杆菌介导的花生遗传转化体系为花生转基因研究提供了重要的研究工具。     

铜、钼、硫对肝细胞浆内咪噻宁代谢的影响

以8头公犊为材料,通过体内和体外试验证明硫、钼及其化合物三硫钼酸盐被吸收或直接注入血液进入肝脏后,对肝内铜代谢的干扰作用主要是促使铜与咪噻宁蛋白质分离。分离后的铜成为小分子化合物离开肝细胞,而在体外试验中,还有部分铜转移到分子量较大的蛋白质上。一旦硫钼酸盐从肝内排泄后,体内铜很快与咪噻宁重新结合。缓冲液中二硫苏糖醇可使铜与咪噻宁结合保持恒定,样品在冰冻情况下保存5周,对咪噻宁与铜结合作用无明显影响。