高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱和 防己诺林碱含量

【目的】建立同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的高效液相色谱方法(HPLC),为防己药材质量检测提供有效方法。【方法】用2%盐酸甲醇常温超声30 min提取粉防己碱和防己诺林碱,采用HPLC对江西、安徽、浙江、湖南、福建和广东等不同产地防己药材进行测定。色谱条件:色谱柱Agilent ZORBAX Extend-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.08%三乙胺(75∶25),等度洗脱,进样量8μL,流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长282 nm,运行时间20 min。【结果】粉防己碱和防己诺林碱的线性范围分别为0～6000μg/mL(R2=1.0000)和0～3000μg/mL(R2=0.9999),平均回收率分别为104.99%和90.13%,相对标准偏差(RSD)分别为1.75%和2.70%;粉防己碱和防己诺林碱的稳定性RSD分别为1.06%和0.62%、精密度RSD分别为1.57%和0.06%、重复性RSD分别为1.04%和1.45%。不同产地防己药材中粉防己碱的含量变化范围为0.836%～5.999%,最高的是江西金桥乡株系3,最低的是浙江苏庄株系4;防己诺林碱的含量变化范围为0.507%～2.993%,最高的是广东天子地株系4,最低的是湖南贯塘株系1,RSD均小于5%。【结论】建立的HPLC测定方法简单、稳定性好、精密度高且运行时间短,可同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量,可考虑作为防己药材质量检测的方法。     

粉防己组织培养体系的建立和细胞悬浮培养初探

为促进粉防己的资源保护和利用,以茎段和愈伤组织为材料建立植物组织培养体系,并利用愈伤组织细胞进行悬浮培养。结果表明,以茎段为外植体直接分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L,60 d不定芽诱导率为100%,单个外植体分化不定芽数16个,90 d时分化数可达28个,该配方同时适用于诱导愈伤组织分化不定芽;不定芽生根以培养基MS+IAA 0.2 mg/L为佳,30 d的生根率达92.5%,平均主根长7.78 cm,炼苗移栽15 d的成活率达88.00%;利用愈伤组织细胞进行悬浮培养,可在较短的培养周期获得可观的生物积累量,干培养物提取液生物碱定性检测为阳性。     

防己散质量控制方法研究

对《中国兽药典》2005年版防己散的质量标准进行修订,采用薄层色谱法对制剂中防己药材进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对粉防己碱和防己诺林碱进行了含量测定。建立了同时测定防己散中2种成分含量的方法,粉防己碱和防己诺林碱的线性范围分别为52．55～525．5μg／ml（r=0．9995）和27．30～273．0μg／ml（r=0．9996）;平均回收率（n=9）分别为98．1％（RSD=1．9％）和97．9％（RSD=2．2％）。该方法简便、准确、重复性好,为防己散的质量控制提供了定量方法。     

粉防己提取液对大肠埃希菌AcrAB-TolC外排泵调控基因的影响研究

目的:为考察粉防己提取液致耐药大肠埃希菌外排泵表达量的下降是否由其外排泵调控基因acrR和marR基因突变引起.方法:选取临床对喹诺酮类药物耐药性较强的大肠埃希菌菌株25-1,4-5,72-1,79和质控菌ATCC25922作为受试菌,用粉防己提取液进行处理,并分析其多重耐药抑制基因marR和acrAB外排泵抑制基因acrR的突变情况.结果:耐药大肠埃希菌在粉防己提取液处理后,乳酸环丙沙星对其MIC(Minimal Inhibitory Concentration)值明显降低,且其acrR和marR基因序列较处理前有多处明显突变.结论:中药粉防己提取液可能具有逆转大肠埃希菌喹诺酮类药物耐药性的作用.     

粉防己碱对雄黄所致小鼠免疫功能低下的影响

目的：探讨雄黄中毒所致小鼠免疫功能低下后粉防己碱（Tet）的调节作用。方法：取小鼠随机分为正常对照组，模型对照组，粉防己碱（tetrandrine，Tet）高、中、低剂量组，二巯基丙磺酸钠（DMPS）组。正常对照组给予生理盐水，模型组灌胃给予70mg／kg雄黄混液，Tet高、中、低剂量组分别腹腔注射给予Tet98．0、49．0、24．5mg／kg，连续42d。采用重量法称量小鼠脾脏和胸腺质量，以其质量与体质量之比作为胸腺和脾脏指数。Giemsa染色计数腹腔巨噬细胞（PM圣）并计算吞噬百分率和吞噬指数。用比色法测定红细胞（RBC）裂解释放的空斑形成细胞（PFC）置。观察Giemsa染色后淋巴细胞个数并计算母细胞转化率。结果：Tet能增加小鼠脾脏和胸腺的重量，增强小鼠PMO的吞噬能力（P〈0．01），提高小鼠溶血值，增加PFC数（P〈0．01），能提高小鼠淋巴细胞转化率（P〈0．01），且有一定剂量差异。结论：对于雄黄所致的小鼠免疫功能低下，Tet的免疫增强作用可能是能使胸腺和脾脏重量增加，PM中的吞噬能力增强，淋巴细胞的转化率升高及抗体能力加强等作用有关。     

四个种源粉防己夏季光合特性比较

以2年生粉防己为试材,对江西永丰、遂川、高安和乐平4个种源粉防己的光合生理特性及其与环境因子的相关性进行了研究。结果表明:4个种源粉防己的净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)日变化均呈双峰曲线;胞间CO2浓度(Ci)日变化呈不规则的"W"型;4个种源之间光合特性存在差异;Pn日均值依次为:永丰种源遂川种源乐平种源高安种源;除了Ci午后平均值比午前平均值略有增加之外,其它光合参数午后平均值均有较大幅度下降;影响粉防己Pn的主要指标有Tr、Gs、Ci;影响Tr的主要指标有Gs、Ci、光合有效辐射(PAR)。     

HPLC法测定复方防己口服液中粉防己碱和防己诺林碱的含量

为了用HPLC法同时测定复方防己口服液中粉防己碱和防己诺林碱的含量.采用Diamonsil C 18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),以乙腈-0.2％磷酸水溶液-三乙胺(63∶37∶0.05)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长282 nm的液相检测方法.结果表明,在此色谱条件下,粉防己碱和防己诺林碱的分离良好,分别在20.52 ～ 205.2μg/mL和17.84 ～ 178.4 μg/mL浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系.按外标法以峰面积计算进行测定,粉防已碱和防己诺林碱的平均回收率分别为98.15％和97.35％,RSD分别为1.39％和1.90％.表明该方法简便,快速,准确,适用于防已散中粉防己碱和防己诺林碱的含量测定.     

粉防己碱对雄黄中毒动物砷排泄的影响

目的：观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对雄黄中毒大鼠的排砷作用。方法：取大鼠60只,随机分为正常对照组、雄黄中毒模型组（模型组）、雄黄＋二巯基丙醇磺酸钠（DMPS）组、雄黄＋Tet高、中、低剂量（Tet高、中、低剂量）组,每组10只。每组每日灌胃给予雄黄,各给药组分别给予不同剂量的药物腹腔注射,连续6周。给药期间收集大鼠24h尿液,以热消化一二乙氨基二硫代甲酸银（D13C—Ag）比色法的改良法测定尿砷含量,每周一次。停药后心脏取血以同样方法测定血砷含量。结果：各给药组大鼠24h尿砷含量与模型组比较,Tet高、中剂量组以及低剂量组前4周的尿砷差异有统计学意义（P〈0．013,低剂量组的第5、6周尿砷量差异也有统计学意义（P〈0．05）;与DMPS组比较,仅低剂量组显示差异（P〈0．05）。各给药组大鼠血砷含量与模型组比较,具有统计学意义（P〈0．01）;与DMPS组比较,仅低剂量组有统计学差异（P〈0．05）。结论：Tet对雄黄中毒大鼠具有明显的促进砷排泄作用,其作用与剂量呈正比例关系。     

防己散质量控制方法研究

对<中国兽药典>2005年版防己散的质量标准进行修订,采用薄层色谱法对制剂中防己药材进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对粉防己碱和防己诺林碱进行了含量测定.建立了同时测定防己散中2种成分含量的方法,粉防己碱和防己诺林碱的线性范围分别为52.55～525.5μg/ml(r=0.999 5)和27.30～273.0 μg/ml(r=0.999 6):平均回收率(n=9)分别为98.1%(RSD=1.9%)和97.9%(RSD=2.2%).该方法简便、准确、重复性好,为防己散的质量控制提供了定量方法.     

UFLC法同时测定防己中粉防己碱和防己诺林碱的含量

为了建立超快速液相色谱法(UFLC)同时测定防己中粉防己碱和防己诺林碱的含量,为防己药材的质量控制提供参考。方法:采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);以乙腈-0.2%磷酸水(三乙胺调p H值至8.0)(65∶35,v/v)为流动相;流速为0.8 m L/min;检测波长为282 nm;柱温为30℃。结果:粉防己碱和防己诺林碱分别在10-500μg/m L(R=0.999 9)和10-500μg/m L(R=0.999 9)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.0%和99.1%。表明该方法结果准确、操作简便、具有良好的重现性和稳定性,可用于防己药材的质量控制,同时为新兽药开发利用提供参考。