鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因生物学特性及表达调控

旨在探究鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因（MTTPL）生物学特性及其表达调控机制,为进一步探讨其在鸡肝脂质代谢中的生物学功能奠定基础。本研究首先采用PCR和测序技术,克隆MTTPL cDNA序列;利用在线软件对MTTPL蛋白结构域、三维空间结构及系统进化树进行分析;构建pcDNA3.1-MTTPL-EGFP过表达载体,通过与内质网标签蛋白的表达载体DsRed-λ共转染鸡肝癌细胞系（LMH）细胞,对MTTPL进行亚细胞定位;分别采集不同周龄卢氏绿壳蛋鸡（1日龄、1周龄、10周龄、30周龄每个周龄各8只）组织样,采用荧光定量PCR分析MTTPL基因和鸡微粒体甘油三酯转运蛋白基因（MTTP）的时空表达谱;然后用0.5、1和2 mg·kg^-1体重浓度的17 β-雌二醇分别处理海兰褐鸡（每组20只）12和24 h后,分析雌激素对肝MTTPL和MTTP表达的影响;最后用1、50、和100 nmol·L^-1 17β-雌二醇及雌激素受体拮抗剂分别处理鸡胚肝原代细胞12 h （每组3个重复）,研究雌激素调控MTTPL基因表达的作用机制。结果表明,鸡MTTPL的CDS区全长为2 646 bp,可编码881个氨基酸,与人和鸡MTTP拥有共同的祖先;定位于细胞内质网;鸡MTTPL和MTTP具有与人MTTP相同的功能域,且三维结构相似度偏差较小,分别为0.090和0.064;MTTPL基因在鸡肝和肾组织中高表达,MTTP在鸡肝、肾和小肠中高表达;在肝中,MTTPL和ApoB的表达水平随周龄的增加均显著上升（P<0.05）,而MTTP的表达仅在10周前随周龄增加显著升高（P<0.05）,而在产蛋前（10周龄）和产蛋期（30周龄）无显著变化（P>0.05）;在17β-雌二醇处理鸡12和24 h时后,MTTPL及ApoB在肝中均显著上调表达（P<0.05）,而MTTP在高浓度处理时表达量显著下调（P<0.05）,在低浓度时无显著变化;与对照组相比,雌激素可显著上调鸡胚肝原代细胞中ApoB和MTTPL的表达（P<0.05）,而MTTP表达水平无显著变化;与雌激素处理组相比,雌激素及受体ERα拮抗剂MPP共处理组MTTPL基因表达水平显著降低（P<0.05）;与MPP和雌激素共处理组相比,ERα和ERβ受体拮抗剂ICI和TAM处理组MTTPL基因表达水平无显著变化。综上所述,鸡MTTPL位于内质网中,具有与人MTTP相似的功能结构域;MTTPL和MTTP均在肝中相对高表达,且MTTPL在产蛋期鸡肝的表达显著高于产蛋前期,而MTTP无显著变化。雌激素可通过与ERα受体结合调控鸡MTTPL的表达,而MTTP不受雌激素调控。表明MTTPL可能在鸡产蛋期肝脂质代谢中发挥重要作用。     

H2S暴露对保育猪氧化还原状态及硫化氢代谢的影响

本试验旨在研究硫化氢（H₂S）暴露对保育猪氧化还原状态及内源性H₂S代谢的影响。试验选取12头体况健康、体重相近（（11.61±1.51） kg）的35日龄大白猪,随机分为2组并分配到2个环控舱内,公母各半,每组6头猪。试验组环控舱内H₂S浓度控制为30 mg·m^-3,对照组环控舱内H₂S浓度控制为0 mg·m^-3,试验期28 d。试验结束后采集血清和肝组织样品,检测氧化还原和H₂S代谢相关指标。结果显示,与对照组相比：1）血清中ROS含量极显著增加（P<0.01）,MDA含量显著增加（P<0.05）;抗氧化酶T-SOD活性显著降低（P<0.05）,CAT和GPX活性极显著降低（P<0.01）;非酶抗氧化物GSH和GSSG含量无显著变化（P>0.05）。2）肝中T-SOD和GPX活性极显著升高（P<0.01）,·OH清除能力显著提高（P<0.05）;ROS、H₂O₂、PC、MDA、GSH、GSSG含量无显著差异（P>0.05）。3）肝中Keap1的mRNA表达量显著下调（P<0.05）,Nrf2的mRNA表达量显著上调（P<0.05）;抗氧化相关基因（SOD2、GPX1、GPX2、GPX4和GSR）的mRNA表达量显著上调（P<0.05）。4）血清和肝中H₂S含量显著降低（P<0.05）;肝内源H₂S合成酶CSE和CBS的mRNA表达量显著下调（P<0.05）,3-MST的mRNA表达量无显著变化（P>0.05）;肝H₂S分解代谢酶SQR和SUOX的mRNA表达量下调,但差异不显著（P>0.05）。结果表明,30 mg·m^-3 H₂S暴露导致保育猪血清抗氧化系统受损,而肝中Nrf2/Keap1信号通路的激活使肝免受氧化损伤;此外,H₂S暴露抑制了保育猪内源性H₂S的合成代谢。     

甜菜碱对瘦素缺陷小鼠肌肉组织中脂质沉积的影响初探

为探究甜菜碱对瘦素缺陷（ob/ob）小鼠肌肉组织中脂质沉积的影响和潜在机制，本研究将12只同批次6周龄雄性、健康、体重差异不超过1 g的ob/ob小鼠随机均分为两组，分别作为试验组和对照组。其中对照组小鼠饮用纯净水，试验组小鼠饮用的纯净水中含1%甜菜碱。1个月后脱颈处死，采集肌肉样本，利用油红O染色、甘油三酯含量测定检测ob/ob小鼠肌肉组织中脂质沉积情况；利用气象色谱-质谱联用系统分析肌肉组织中脂肪酸组成及含量；利用qRT-PCR方法检测肌肉组织中基因表达的变化。结果显示：与对照组相比，1）补饲甜菜碱后ob/ob小鼠的体重增加量、肌肉组织中脂质沉积、禁饲血糖水平显著降低（P<0.05）；2）补饲甜菜碱后，ob/ob小鼠肌肉中脂肪甘油三酯脂肪酶（adipose triacylglyceride lipase，ATGL）、激素敏感性甘油三酯脂肪酶（hormone-sensitive lipase，HSL）以及葡萄糖转运蛋白4（glucose transpoter 4，GLUT4）基因的表达量极显著升高（P<0.01）；3）补饲甜菜碱后，ob/ob小鼠肌肉中饱和脂肪酸（saturated fatty acids，SFA）和多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids，PUFA）含量显著升高（P<0.05）；4）补饲甜菜碱后，ob/ob小鼠肌肉中脂肪酸合成基因：脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase，FAS）表达量显著降低（P<0.05），乙酰辅酶A合成酶（acetyl-CoA synthetase，ACS）表达量无显著性变化（P>0.05）；脂肪酸氧化基因：过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator activated receptor alpha，PPARα）、酰基辅酶A氧化酶（acyl-CoA oxidase2，ACOX2）、长链酰基辅酶A脱氢酶（long chain acyl-CoA dehydrogenase，ACADL）、脂肪酸转位酶（fatty acid transposase， CD36）表达量极显著升高（P<0.01）。结果表明，ob/ob小鼠补饲甜菜碱后，肌肉组织脂肪酸合成基因表达降低、脂肪酸氧化基因表达升高，同时肌肉组织脂肪酸含量发生改变，最终导致肌肉组织脂质减少。     

DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用

旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1（DDR1）基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响。本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（早凋、晚凋）的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况。结果,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94%和30%,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖（P<0.01）,细胞早凋与晚凋比例极显著上升（P<0.01）;干扰组G1期细胞比例极显著上升（P<0.01）,S期细胞比例极显著下降（P<0.01）,G2期细胞比例显著下降（P<0.05）,提示细胞阻滞在G0/G1期。相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖（P<0.05）,显著抑制细胞晚期凋亡（P<0.05）,G1期细胞比例极显著下降（P<0.01）,S期细胞比例极显著上升（P<0.01）,促进细胞由G1期向S期的转换。qRT-PCR检测结果显示,干扰DDR1后显著上调BAX、Caspase9基因的表达（P<0.05）,极显著上调P53、FAS基因的表达（P<0.01）,且显著下调PCNA、CyclinB1基因的表达（P<0.05）;过表达DDR1后,分别显著和极显著下调Cytc与BAX基因的表达（P<0.05,P<0.01）,并极显著上调CyclinB1基因的表达（P<0.01）。综上可见,DDR1能够调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和周期,可为阐明DDR1参与奶牛乳腺上皮细胞生长发育的分子机制提供参考。     

虫草粉联合酵母硒对蛋鸡产蛋高峰中期产蛋性能、蛋品质、抗氧化性和免疫功能的影响

为了研究虫草粉（古尼虫草地顶孢霉培养物）联合酵母硒对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、抗氧化功能和免疫功能的影响,试验选用450羽24周龄海兰褐壳蛋鸡,随机分为5组,每组6个重复,每个重复15羽。对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ~Ⅳ组饲喂添加0.1 mg/kg酵母硒联合不同剂量虫草粉（0、0.2%、0.3%和0.4%）的基础饲粮,试验期27周;选取产蛋高峰中期（第40周龄）蛋鸡进行产蛋性能、鸡蛋品质、免疫功能和抗氧化功能分析。结果显示,与对照组相比,产蛋高峰中期试验Ⅲ组蛋鸡的产蛋率、平均蛋重均显著提高,料蛋比显著降低（P<0.05）;鸡蛋哈夫单位、蛋壳颜色、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋清粗蛋白质含量、蛋黄粗蛋白质和粗脂肪含量均显著升高（P<0.05）,蛋清中必需氨基酸Leu、Lys、Met、Trp、Phe、Thr、Val和His及非必需氨基酸Ala、Asp、Glu、Pro和Tyr水平也显著增加（P<0.05）;试验Ⅳ组蛋鸡的蛋壳颜色、蛋壳强度、哈夫单位和蛋清粗蛋白质含量均显著提高（P<0.05）,蛋清中必需氨基酸Ile、Gly、Arg和非必需氨基酸Cys、Ser水平均显著增加（P<0.05）;试验Ⅰ~Ⅳ组蛋鸡蛋黄、蛋清中硒含量均显著增加（P<0.05）。同时,与对照组相比,产蛋高峰中期试验Ⅲ组蛋鸡血清MDA含量显著下降（P<0.05）,WBC数量、血清IFN-γ和IL-2水平及T-AOC和T-SOD活性均显著升高（P<0.05）。结果表明,饲粮中联合添加酵母硒和适量的虫草粉能明显提高产蛋高峰中期蛋鸡的产蛋性能和鸡蛋品质,增强机体免疫力和抗氧化能力,以0.1 mg/kg酵母硒联合添加0.3%虫草粉的效果最佳。     

泌乳早期奶牛瘤胃微生物与牛奶脂肪酸组成的变化

旨在研究泌乳早期奶牛瘤胃微生物与牛奶脂肪酸组成的变化。本试验选取江苏省某奶牛场胎次、泌乳天数及产奶量相近的50头荷斯坦奶牛,收集泌乳7和30 d的奶样和瘤胃液样品,测定采食量、产奶量、乳成分及乳脂肪酸含量,同时采用16S rRNA测序技术分析瘤胃微生物的组成。结果表明,泌乳7 d的干物质采食量（15.79 kg·d^-1）和产奶量（26.81 kg）均极显著低于泌乳30 d的干物质采食量（18.87 kg·d^-1）和产奶量（37.47 kg）（P<0.01）,而泌乳7 d的乳脂率、乳蛋白率和体细胞评分均极显著高于泌乳30 d （P<0.01）;泌乳7 d乳中的C6：0、C8：0、C10：0、C12：0、C14：0、C14：1trans9、C14：1cis9、C15：1trans10、中链脂肪酸（MCFA）和饱和脂肪酸（SFA）的含量显著低于泌乳30 d （P<0.05）,相反地,C17：0、C17：1cis10、C18：1trans6、C18：1trans11、C18：1cis9、C18：1cis11、C19：1trans10、C22：5cis4,7,10,13,16、长链脂肪酸（LCFA）、单不饱和脂肪酸（MUFA）和反式脂肪酸（TRANS）的比例显著高于泌乳30 d （P<0.05）。16S rRNA测序结果表明,泌乳7和30 d奶牛瘤胃细菌的丰富度与多样性未发生显著变化（P>0.05）。在属水平上,泌乳7 d奶牛瘤胃内的瘤胃梭菌属（Ruminiclostridium_1）、瘤胃球菌属（Ruminococcaceae_UCG_014和Ruminococcaceae_UCG_005）、梭菌属（Clostridium_sensu_stricto_1）、小杆菌属（Dialister）丰度显著低于泌乳30 d （P<0.05）,而球藻菌属（Sphaerochaeta）、弯曲菌属（Campylobacter）和真细菌（Eubacterium_saphenum_group）属的丰度显著高于泌乳30 d （P<0.05）。此外,牛奶脂肪酸与瘤胃微生物组数据关联分析显示,瘤胃微生物对乳中MCFA含量影响较小,纤维素降解细菌（Ruminiclostridium_1、Ruminococcaceae_UCG_005）与乳中C17：0、C18：1trans6、C18：1trans11和C19：1trans10的含量显著负相关（P<0.05）。综上所述,奶牛泌乳早期在生理和采食量上发生了变化,导致瘤胃微生物组成发生改变,进而引起微生物代谢产物和代谢路径发生变化,最终引起产奶量和乳成分的变化,本研究为解析瘤胃微生物调控乳脂代谢机制提供了科学依据,也为产后奶牛营养调控和提高原料乳品质提供了理论基础。     

山楂叶黄酮对产蛋后期种鸡蛋壳品质的影响

山楂叶黄酮（HF）是山楂叶提取物,具有抗氧化、抗炎和降血脂的作用。本试验旨在研究日粮HF对产蛋后期种母鸡蛋壳品质的影响。选取体重相近的60周龄健康种母鸡（栖岭草鸡）270只,随机分为3组,每组6个重复,每个重复15只鸡。对照组（CON）饲喂玉米-豆粕型基础日粮（BD）,低剂量组（LHF）饲喂BD+30 mg·kg^-1 HF日粮,高剂量组（HHF）饲喂BD+60 mg·kg^-1 HF日粮。试验预饲2周,正式饲喂8周,最后,采集种蛋测定蛋壳品质,采集血样测定钙和磷含量,采集壳腺组织观察组织形态学、细胞凋亡和抗氧化蛋白的变化。结果显示：1）与CON组相比,HF处理显著提高了蛋壳厚度和蛋壳强度（P<0.05）,对蛋黄颜色、蛋白高度、哈氏单位和壳腺的器官指数没有显著影响（P>0.05）。2）与CON组相比,HF处理显著提高了血清钙的含量（P<0.05）,显著上调了壳腺部CaBP-D28K、OPN和OC-116基因mRNA的表达水平（P<0.05）,HHF组壳腺部Ca²⁺ATP酶的活性显著提高（P<0.05）。3）组织学切片分析表明,HF处理显著降低了壳腺细胞的凋亡率（P<0.05）,并显著提高了壳腺部绒毛的长度和腺体的密度（P<0.05）。4）与CON组相比,HF处理组壳腺部MDA的含量显著降低（P<0.05）,HHF处理显著提高了GSH-Px酶的活性（P<0.05）。5）HHF组壳腺部KEAP1、p-NFκB/NFκB和Bax/Bcl2蛋白表达水平较CON组显著降低（P<0.05）;Nrf2、HO-1和PCNA蛋白的表达量则显著提高（P<0.05）。综上,日粮中添加60 mg·kg^-1的HF通过激活Nrf2/HO-1信号通路增强壳腺的抗氧化能力,改善细胞凋亡进程和钙离子转运能力,从而提高产蛋后期种鸡的蛋壳品质。     

干扰HSD17B4基因对水牛乳腺上皮细胞乳脂和酪蛋白的影响

通过将小干扰-17β-羟基固醇脱氢酶Ⅳ（si-HSD17B4）基因转染水牛乳腺上皮细胞,检测酪蛋白、甘油三酯含量及脂肪酸相关基因的表达变化,从而揭示干扰HSD17B4基因对水牛乳腺上皮细胞中乳脂和酪蛋白的影响。采用实时荧光定量PCR检测HSD17B4 mRNA在水牛各个组织中的相对表达量。合成3条水牛HSD17B4小干扰RNA （siRNA）和1条对照si-HSD17B4-nc （si-nc）,并筛选干扰效果最佳的片段和时间。si-HSD17B4转染水牛乳腺上皮细胞后,通过酪蛋白试剂盒检测酪蛋白的表达情况,通过甘油三酯测定和油红O染色检测甘油三酯含量,通过实时荧光定量PCR检测干扰HSD17B4基因对甘油三酯、脂肪酸合成以及氧化相关基因表达的影响。结果表明,HSD17B4基因在水牛心脏和卵巢中相对高表达,且显著高于其他组织（P<0.05）。3条HSD17B4 siRNA片段均能有效地抑制HSD17B4基因的表达,其中si-HSD17B4-1干扰效果最佳,HSD17B4 mRNA表达量极显著低于对照组（P<0.01）;最佳干扰时间为24 h。酪蛋白检测结果显示,干扰HSD17B4基因对水牛乳腺上皮细胞中酪蛋白合成无影响。甘油三酯测定结果显示,干扰HSD17B4基因后细胞中甘油三酯含量上升,差异显著（P<0.05）。油红O染色结果显示,干扰HSD17B4基因后细胞中的脂滴明显增多。实时荧光定量PCR检测结果显示,干扰HSD17B4基因会使FABP3、ACSL1、DGAT1、DGAT2、PLIN2、BTN1A1基因表达量上调,分别上调9.28（P<0.01）、1.36（P<0.05）、1.17（P<0.05）、1.83（P<0.01）、1.60（P<0.01）和2.17（P<0.01）倍;同时使PPARA、SREBP1C、SCD、ACSS2、ACACA、AGPAT6、LPIN1、XDH、ABCD1、ACOX2、EHHADH、SCP2基因表达量下降,分别下调至50.55%（P>0.05）、61.15%（P<0.01）、84.91%（P<0.01）、89.34%（P<0.01）、21.88%（P<0.01）、86.48%（P<0.01）、25.35%（P<0.01）、27.24%（P<0.01）、41.74%（P<0.01）、22.17%（P<0.01）、62.70%（P<0.01）和70.33%（P<0.01）。结果表明,HSD17B4基因在水牛组织中广泛表达;si-HSD17B4高效抑制HSD17B4基因在水牛乳腺上皮细胞中的表达,未检测到干扰HSD17B4基因对乳腺上皮细胞酪蛋白的影响,干扰HSD17B4基因上调了FABP3、ACSL1、DGAT1、DGAT2基因的表达,从而促进甘油三酯的合成,同时降低ABCD1、ACOX2、EHHADH、SCP2基因的表达,减少脂肪酸β-氧化。     

载锌蒙脱石对肉鸡生产性能、免疫功能及肠道组织形态的影响

本试验旨在研究载锌蒙脱石（zinc-montmorillonite,Zn-MMT）对肉鸡生长性能、屠宰性能、免疫功能及肠道形态的影响。选择1日龄健康科宝公雏288只,按体重随机分成6个处理组,每处理6个重复,每个重复8只仔鸡。对照组（CK）饲喂玉米-豆粕型基础日粮,正对照组饲喂基础日粮添加40 mg·kg^-1 ZnSO₄,试验组分别在基础日粮中添加20、40、60和80 mg·kg^-1 Zn-MMT（均以Zn含量计算）,自由采食饮水,试验42 d,采集肠道和脾组织,并测定脾IL-2、TNF-α、IgG、IgA基因表达及肠道绒毛高度与隐窝深度。结果表明：1）与CK和ZnSO₄组相比,Zn-MMT对肉鸡平均日采食量（average daily feed intake,ADFI）无显著影响（P>0.05）,但80 mg·kg^-1 Zn-MMT显著降低了1~21、22~42及1~42日龄的仔鸡平均日增重（average daily gain,ADG）（P<0.05）,且40 mg·kg^-1的Zn-MMT显著降低1~42日龄的料重比（feed to gain ratio,F/G）（P<0.05）。2）相比CK组,添加ZnSO₄和60 mg·kg^-1的Zn-MMT显著提高21日龄法氏囊指数（P<0.05）,且60 mg·kg^-1的Zn-MMT提高42日龄法氏囊指数（P<0.05）。同时,ZnSO₄、20和40 mg·kg^-1的Zn-MMT显著提高42日龄脾IgG的表达（P<0.05）。同时,ZnSO₄组显著提高脾IgA的表达（P<0.05）。相比CK和ZnSO₄组,20 mg·kg^-1的Zn-MMT显著提高脾TNF-α表达,添加40、60和80 mg·kg^-1的Zn-MMT显著提高脾IL-2的表达（P<0.05）。3）与CK相比,Zn-MMT对肉鸡屠宰性能无显著影响（P>0.05）。4）相比CK与ZnSO₄组,添加40 mg·kg^-1的Zn-MMT可以显著提高十二指肠、空肠的绒毛高度（villus height,VH）和绒毛高/隐窝深（villi height to crypt depth ratio,V/C）（P<0.05）,且显著降低十二指肠的隐窝深度（crypt depth,CD）（P<0.05）,但对回肠的CD无显著影响（P>0.05）。同时,相比CK组,40 mg·kg^-1的Zn-MMT显著提高回肠的VH和V/C（P<0.05）,但与ZnSO₄组无显著差异（P>0.05）。添加ZnSO₄对肉仔鸡十二指肠和空肠的VH、CD、V/C及回肠的VH、CD均无显著影响（P>0.05）,但能显著提高回肠的V/C（P<0.05）。结果显示,日粮添加Zn-MMT显著提高饲料转化率、增强机体免疫力,促进肠道绒毛的发育。     

外源胰岛素和能量限饲对鸡PPP1R3C表达的效应

旨在检测PPP1R3C在爱拔益加肉鸡不同组织中的表达情况，探究外源胰岛素和能量限饲对鸡体胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响。试验一，取不同发育阶段的雌性肉鸡（E14、E19、D7和D21，n=10）组织样，通过qRT-PCR技术检测PPP1R3C在不同时期胸肌中的表达；试验二，腹腔注射胰岛素（INS）或PBS，取两组注射后不同时间点（0、15、120和240 min，n=5）的D24雄性肉鸡组织样，检测PPP1R3C在肉鸡不同组织中的表达，探究外源胰岛素处理对肉鸡胰岛素敏感组织中PPP1R3C表达的影响；试验三，取D18雌性肉鸡，一组饲喂常规日粮（n=20），另一组饲喂限制30%能量的日粮（n=20），饲喂至48天屠宰取样，探究30%能量限饲对肉鸡PPP1R3C表达的影响；试验四，D7雌性肉鸡随机分为3组，对照组、15%能量限饲组和15%蛋白限饲组（n=10），分别饲养至D21屠宰取样，探究能量限饲是否具有剂量依赖性。结果表明：1）PPP1R3C在胸肌组织中高表达，其次是心和腿肌组织（P<0.05）。2）PPP1R3C表达量呈现了明显随鸡发育而升高的趋势。3） INS注射显著下调了胸肌中PPP1R3C的表达，在注射后120 min时PPP1R3C的表达显著低于0和15 min （P<0.05）；PBS注射后胸肌中PPP1R3C的表达没有显著差异，在注射后120和240 min时，INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组（P<0.05）。INS注射也降低了肝中PPP1R3C的表达，在INS处理15 min时PPP1R3C的表达已显著低于0 min （P<0.05）；PBS注射后肝中PPP1R3C表达处于动态平衡，在注射后120 min时，INS组PPP1R3C表达显著低于PBS组（P<0.05）。胰岛素注射后在腹脂中出现了与胸肌和肝相反的结果，在胰岛素注射后15 min时PPP1R3C的表达显著高于0、120、和240 min （P<0.05），而0、120、和240 min之间没有显著差异；PBS注射后腹脂中PPP1R3C表达没有显著变化，在注射后15 min时，INS组PPP1R3C表达量显著高于PBS组（P<0.05）。4）30%能量限饲导致PPP1R3C在胸肌和肝中的表达均显著下调（P<0.05）。5）15%能量限饲和15%蛋白限饲不能显著影响胸肌中PPP1R3C的表达。以上研究表明，PPP1R3C在胸肌中表达最高，并随着个体发育表达上升，且外源胰岛素对PPP1R3C的表达效应具有明显的组织特异性。30%能量限饲可产生类似于外源胰岛素的效应，且能量限饲存在一定的剂量依赖性，本研究结果为进一步揭示鸡PPP1R3C功能奠定了基础。     

不同月龄阉割对延边黄牛高档部位肌肉脂肪酸含量的影响

试验旨在研究不同月龄阉割对延边黄牛眼肌、西冷和上脑3个高档部位肌肉中脂肪酸含量的影响。试验选用50头健康且体重相近(150 kg±7.5 kg)的6月龄延边黄牛,随机分成5组,每组10头,试验组分别在6、8、10和12月龄阉割(记为YG6、YG8、YG10和YG12组),对照组不阉割(记为WYG),试验期为24个月,统一饲养,自由采食。30月龄屠宰,取眼肌、西冷、上脑3个部位肌肉样,测定其脂肪酸含量。结果显示:①与WYG组相比,眼肌脂肪酸中YG8和YG12组豆蔻油酸含量均极显著增加(P<0.01),YG6和YG10组均显著增加(P<0.05);YG6组油酸含量显著增加(P<0.05);YG6和YG10组棕榈酸含量均显著降低(P<0.05);试验组总饱和脂肪酸含量均下降(P>0.05),YG6、YG10组总不饱和脂肪酸含量和总单不饱和脂肪酸含量均显著增加(P<0.05);YG10组总多不饱和脂肪酸含量极显著增加(P<0.01),YG6、YG8和YG12组均显著增加(P<0.05)。②与WYG组相比,西冷脂肪酸中试验组豆蔻油酸、棕榈油酸和硬脂酸含量均显著增加(P<0.05),棕榈酸含量显著降低(P<0.05);YG6组油酸含量显著增加(P<0.05),总饱和脂肪酸含量显著降低(P<0.05);YG6和YG10组总不饱和脂肪酸含量和总单不饱和脂肪酸含量均显著增加(P<0.05)。③与WYG组相比,上脑脂肪酸中YG8组豆蔻酸含量显著增加(P<0.05);YG6和YG10组棕榈酸含量均极显著降低(P<0.01),总不饱和脂肪酸含量和总单不饱和脂肪酸含量均显著增加(P<0.05);YG6组总饱和脂肪酸含量显著降低(P<0.05)。综上,阉割可增加延边黄牛高档部位不饱和脂肪酸含量,降低饱和脂肪酸含量,其中6月龄阉割组不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸最高。     

营养限饲与补偿对蒙古羔羊体重、血清生化指标及胸脂脂肪因子基因表达的影响

试验旨在研究早期营养限饲与后期快速补偿对蒙古羔羊体重、血清生化指标及胸脂脂肪因子基因表达的影响。选用30只4月龄健康蒙古公羔羊,随机分为对照组(20.26 kg±3.63 kg)与限制组(21.29 kg±3.00 kg)。对照组羔羊自由采食,限制组羔羊维持水平饲养,限制期60 d,限制饲养结束后立刻进入60 d补偿期,补偿期两组饲喂相同日粮。于试验第30、60、90和120天从各组试验羊颈静脉采血,用试剂盒检测血清中甘油三酯(TG)、非酯化脂肪酸(NEFA)、总胆固醇(TC)浓度;并在限制和补偿末期屠宰羔羊,采集胸部脂肪组织,实时荧光定量PCR检测脂联素(Adiponectin)、内脂素(Visfatin)、过氧化物酶增殖物激活受体γ (PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)基因表达量。结果表明:①限制期,限制组羔羊体重保持维持水平而对照组羔羊体重呈升高趋势;补偿期,限制组羔羊平均日增重显著高于对照组(P< 0.05)。②限制期,限制组羔羊血清中TG浓度在第30和60天时显著低于对照组(P< 0.05),而NEFA在第30天时显著高于对照组(P< 0.05);补偿期,限制组TC浓度在第90天时显著低于对照组(P< 0.05),而TG与NEFA两组间均无显著差异(P >0.05)。③限制期,限制组羔羊胸脂PPAR-γ和ACC基因表达量显著低于对照组(P< 0.05),补偿期两组间无显著差异(P >0.05)。限制期和补偿期两组羔羊胸脂Adiponectin和Visfatin基因表达均无显著变化(P >0.05)。由此可知,营养限制时胸脂脂肪合成与脂肪细胞分化能力减弱,脂肪组织水解动员参与机体能量代谢,补偿时总胆固醇参与机体恢复生长。补偿期限制组羔羊快速增重,但ACC与PPAR-γ基因显著低于对照组。早期的生长限制与后期的补偿生长对羔羊胸脂Adiponectin与Visfatin无显著影响。     

Kruppel样因子15对和盈黑鸡前体脂肪细胞增殖分化的影响

旨在明确和盈黑鸡Kruppel样因子15(KLF15)的组织、细胞表达模式,阐明干扰KLF15对和盈黑鸡前体脂肪细胞增殖分化的影响。本研究采用RT-qPCR技术检测KLF15在各组织中表达分布、在腹脂组织的发育性表达规律以及在成脂诱导分化不同时期细胞中的表达水平;干扰KLF15后,采用CCK-8和EdU法检测细胞增殖,利用油红O染色、甘油三酯含量分析以及脂肪细胞分化标志基因(PPARγ、C/EBPa和FAS)的检测,分别从细胞形态学和分子生物学等角度明确干扰KLF15对和盈黑鸡前体脂肪细胞成脂分化的影响。研究结果表明,KLF15在和盈黑鸡各组织中存在广泛表达,在肝、腿肌和腹脂组织中表达量较高;KLF15在公、母鸡腹脂中分别呈“L”和“U”型表达趋势,表达高峰均出现在1日龄;KLF15 mRNA在细胞分化前期缓慢升高,表达高峰出现在细胞分化后期;细胞增殖检测发现,CCK-8和EdU结果趋势一致,干扰KLF15极显著抑制了前体脂肪细胞的增殖(P＜0.01);明显减少了前体脂肪细胞的脂滴积聚,极显著降低了甘油三酯含量(P＜0.01),且脂肪细胞分化标志基因PPARγ和C/EBPa mRNA水平极显著下调(P＜0.01),FAS mRNA水平显著下调(P＜0.05)。本研究揭示了和盈黑鸡KLF15的表达模式,验证了干扰KLF15能够抑制前体脂肪细胞的增殖分化,推测KLF15是前体脂肪细胞的负调控因子,可能是通过调控PPARγ、C/EBPa和FAS等分化关键基因的表达来实现的。     

Effects of Interference and Overexpression of DDR1 on Proliferation and Apoptosis of Mammary Epithelial Cells in Dairy Cows

The aim of this study was to investigate the effect of discoidin domain receptor 1 (DDR1) gene on the proliferation, apoptosis and cell cycle of dairy cow mammary epithelial cells through interfering and overexpressing DDR1. The small RNA interference fragment of DDR1 gene and overexpression vector pcDNA3.1-DDR1 were transfected into dairy cow mammary epithelial cells, qRT-PCR and Western blot were used to detect the interference and overexpression efficiency of DDR1; CCK-8 was employed to detect cell proliferation; Flow cytometry was performed to detect the changes of cell cycle and apoptosis (early apoptosis and late apoptosis). qRT-PCR was used to detect the expression of genes related to proliferation and apoptosis. After interfering DDR1 gene in dairy cow mammary epithelial cells, mRNA and protein expression levels of DDR1 were down-regulated by 94% and 30%, respectively; While after overexpressing DDR1 gene, its mRNA and protein expression were up-regulated 68.24 and 1.38 times, respectively. Interfering DDR1 extremely significantly inhibited the proliferation of cells (P<0.01), the ratio of early and late apoptotic cells was extremely significantly increased (P<0.01); the ratio of G1 phase cells in the interference group was extremely significantly increased (P<0.01), and the proportions of S and G2 phase cells were significantly decreased (P<0.01 and P<0.05), which suggested that the cells were blocked in G0/G1 phase. Conversely, overexpression of DDR1 could significantly promote cell proliferation (P<0.05), significantly inhibit the late apoptosis of cells (P<0.05), the proportion of G1 phase cells was extremely significantly decreased (P<0.01), and the proportion of S phase cells was extremely significantly increased (P<0.01), suggesting the enhancement of transition from G1 to S phase. The results of qRT-PCR detection showed that after interfering DDR1, the expressions of BAX and Caspase9 genes were significantly up-regulated (P<0.05), and the expressions of P53 and FAS genes were extremely significantly up-regulated (P<0.01), while the expressions of PCNA and CyclinB1 genes were significantly down-regulated (P<0.05). After overexpression of DDR1, the expressions of Cytc and BAX genes were significantly (P<0.05) and extremely significantly down-regulated(P<0.01), respectively, and the expression of CyclinB1 gene was extremely significantly up-regulated (P<0.01). In summary, DDR1 can regulate the proliferation, apoptosis and cycle of dairy cow mammary epithelial cells, this result will provide a reference for elucidating the molecular mechanism of DDR1 involved in the growth and development of dairy cow mammary epithelial cells.     

静脉滴注心房利钠肽对阿勒泰羊血液脂代谢激素的影响及尾脂转录组分析

旨在研究静脉滴注心房利钠肽（ANP）对绵羊血液中脂代谢激素及尾脂转录组的影响，为阐明ANP在调节绵羊脂代谢中的作用机理提供参考。本试验选取体重为（45.6±6.5） kg、健康状况良好、1.5岁阿勒泰母羊8只，试验采用自身对照设计，对照期颈静脉滴注100 mL生理盐水45 min；试验期以1.125 μg·kg^-1 BW颈静脉滴注100 mL ANP生理盐水溶液45 min，连续静脉滴注ANP 4 d，各期均在试验结束当天（即第4天）滴注开始后0、15、30、45、60、90和120 min采集血液，分离血浆，测定ANP、脂联素、胰岛素、瘦素和环鸟苷酸水平；每期采集尾脂，进行转录组测序及生物学信息分析，并采用实时荧光定量PCR技术检测候选基因相对表达量的变化。结果显示：1）静脉滴注ANP后，较对照期，试验期血浆ANP含量在30、90 min时显著增加（P<0.05）；血浆脂联素含量在30 min时显著增加（P<0.05），在90 min时极显著增加（P<0.01）；cGMP含量在30、90 min时极显著增加（P<0.01），在45、60 min时显著增加（P<0.05）；胰岛素含量在0、30、120 min时极显著增加（P<0.01），在15、45、60、90 min时显著增加（P<0.05）；瘦素含量在0、15 min时显著增加（P<0.05），在30 min时极显著增加（P<0.01）。2）转录组分析表明，共3 686个差异表达基因，其中1 482个基因上调表达、2 204个基因下调表达；GO功能富集分析显示，差异基因显著富集到118个生物学功能，主要与线粒体呼吸链和氧化磷酸化有关；KEGG通路分析表明，差异基因显著富集到46条通路中，主要参与核糖体、产热、氧化磷酸化和调节脂肪细胞中的脂肪分解等信号通路；qRT-PCR分析结果表明，AQP7、FABP4、PLIN5、ADIPOR2、MGLL、IDE和ACSL1表达趋势与RNA-seq结果一致。由此可见，外源ANP通过改变脂代谢相关激素水平及增加绵羊脂肪组织氧化磷酸化和产热促进脂肪分解。     

体外法研究硝酸钠调控水牛瘤胃甲烷生成对脂肪酸生物氢化途径的影响

本试验旨在研究硝酸钠调控水牛瘤胃甲烷生成对脂肪酸生物氢化途径的影响。选取3头体重约为（650±50）kg、安装永久性瘤胃瘘管的水牛作为瘤胃液供体动物，通过体外批次培养，设计发酵底物的精粗比为40：60，试验设4个组，每组5个重复，每组各添加0.25 mg/mL的α-亚麻酸，硝酸钠添加水平分别为0（对照）、1、2、3 mg/mL。分别培养3、6、9、12、24 h时测定产气量和甲烷产量，在培养24 h结束后测定体外发酵参数和脂肪酸含量。结果表明：①添加硝酸钠显著降低了瘤胃培养液24 h的总产气量、甲烷（CH₄）含量和甲烷/总产气量的比例（P<0.05），添加1、2和3 mg/mL硝酸钠后瘤胃液甲烷含量分别降低了89.62%、91.20%、91.75%。②添加硝酸钠组瘤胃培养液的pH和氨态氮（NH₃-N）含量显著高于对照组（P<0.05），添加1 mg/mL硝酸钠组微生物蛋白（MCP）含量也显著高于对照组（P<0.05），其他组别差异不显著（P>0.05）；添加硝酸钠组瘤胃液乙酸浓度差异不显著（P>0.05），但丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸浓度显著低于对照组（P<0.05），乙酸/丙酸显著高于对照组（P<0.05），添加3 mg/mL硝酸钠组瘤胃液总挥发性脂肪酸（TVFA）含量显著低于对照组（P<0.05）。③添加1 mg/mL硝酸钠组瘤胃液C18：2 cis-9，trans-11、C18：2 trans-10，cis-12、C20：1、不饱和脂肪酸（UFA）含量及UFA/SFA显著高于其他组（P<0.05）；添加硝酸钠组瘤胃液C18：2n6c、C18：1n9t、C20：5n3（EPA）和C22：6n3（DHA）的含量均高于对照组，且1 mg/mL硝酸钠组含量最高，但差异不显著（P>0.05）；添加1 mg/mL硝酸钠组瘤胃液C18：3n3、C18：2n6c和C18：1n9c含量均高于对照组，差异不显著（P>0.05）。由此可见，体外添加硝酸钠显著降低了瘤胃液总产气量和甲烷含量，pH和NH₃-N含量显著升高，TVFA含量降低，通过显著减少丙酸含量而升高乙酸/丙酸；添加1 mg/mL硝酸钠可显著提高瘤胃液共轭亚油酸（CLA）和UFA含量，且在抑制甲烷产生的同时能够降低不饱和脂肪酸的生物氢化程度。