1株鸭源棒状杆菌的分离及鉴定

从四川某鸭场发病种鸭的肝脏组织中分离到1株革兰阳性杆菌,通过形态特征、培养特性、生化特性进行鉴定,并进行药敏试验,应用通用引物对其16S r RNA基因进行克隆与序列分析。结果显示,分离细菌在血琼脂平板生长良好,能发酵部分糖类。系统进化分析显示,分离菌株与棒状杆菌属细菌遗传进化关系较密切,其16S r RNA基因序列与棒状杆菌代表菌株的同源性在87.1%~98.9%之间,分离菌鉴定为棒状杆菌。     

一株猪源棒状杆菌的分离及其16S rRNA基因分析鉴定

四川某商品猪场仔猪出现以体温升高,背、腹和腿部皮肤发绀,淋巴结出血肿大,肺、脾脏出血、化脓为主要特征的疾病。通过对分离细菌的纯化培养、形态学观察、生化试验、致病性试验和药物敏感性试验,鉴定出一株致病菌。应用通用引物对其16S rRNA基因进行克隆和序列分析,序列在NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的棒状杆菌属中25株不同种的菌株16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。分离纯化的细菌在鲜血琼脂平板厌氧条件下生长良好,为革兰氏染色阳性杆状菌,能发酵部分糖类,能致死小白鼠,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与棒状杆菌属细菌的同源性最高,在78.2%~98.0%之间,遗传进化树分析结果表明,该菌株与棒状杆菌属细菌属于同一分类群,分离菌鉴定为棒状杆菌。     

一株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其遗传进化分析

为确认导致甘肃省平凉市一农场猪群死亡的原因,采集病死猪不同组织样品进行检测,从病死猪的脏器组织中分离到1株革兰阴性杆菌,并对其进行生化鉴定、16S rRNA鉴定及遗传进化分析,同时进行分离菌的致病性试验、耐药性分析、V因子需要试验、"卫星现象"观察。结果表明:分离菌生化特性均符合副猪嗜血杆菌;其16S rRNA基因序列与Genbank中副猪嗜血杆菌株的同源性均高达99%。因此,将该分离菌鉴定为副猪嗜血杆菌,将其命名为PL2016。动物试验及耐药性试验表明,该分离菌具有较强的致病性和多重耐药性。16S rRNA遗传进化分析表明,该分离菌与副猪嗜血杆菌其他菌株具有很高的同源性,其核酸序列相似性高达99%以上。遗传进化分析表明,该分离菌的ompP2、sodA基因与副猪嗜血杆菌其他菌株具有很高的同源性,其核酸序列相似性高达95%以上。     

猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

为查明贵阳市花溪区麦坪镇某猪场仔猪发生呼吸道疾病的病因,对送检的2头病猪采集病料进行细菌分离培养、染色镜检、生化试验、PCR扩增及测序、药敏试验。结果:从病料样本中分离得到1株细菌,根据形态学和生化试验初步鉴定为副猪嗜血杆菌;应用细菌16S rRNA序列分析技术从分子水平对分离细菌进行分型鉴定,运用DNAStar软件与不同血清型副猪嗜血杆菌基因序列进行比对,发现分离菌与不同血清型副猪嗜血杆菌菌株16S rRNA序列同源且相似性为97.4%～100%,其中与血清5型相似性最高;系统进化分析显示,分离菌株与血清5型副猪嗜血杆菌进化关系最近;分离菌株对利福平、头孢氨苄、阿米卡星、环丙沙星、万古霉素敏感。结论:综合分离细菌传统鉴定方法和分子生物学鉴定方法的实验结果,确定分离菌株属于血清5型副猪嗜血杆菌。     

一株多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与耐药性研究

从扬州大学动物医院收集送检病鸡的病料,无菌采集病死鸡的肝脏、肺脏等组织接种于麦康凯平板和血琼脂平板上进行细菌分离与培养,并对分离菌进行生化试验、16 S r RNA基因序列分析和荚膜分型PCR鉴定,同时用12种抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。细菌分离结果显示,分离菌在麦康凯平板上未见菌落生长,在血琼脂平板上呈光滑、湿润的露滴样小菌落;革兰氏染色镜检结果为革兰氏阴性小杆菌,瑞氏染色镜检可见大量两极浓染的短杆菌;生化试验结果表明分离菌株能够发酵葡萄糖、果糖、蔗糖等糖类,不能发酵乳糖和麦芽糖;同时,16 S r RNA基因序列和荚膜分型PCR测定结果显示分离菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。药敏试验结果表明,分离菌株对痢特灵、左氟沙星、强力霉素的敏感性较高,而对氯霉素、美洛西林、卡那霉素等高度耐药。     

云南鸡源副禽嗜血杆菌的分离鉴定与耐药性分析

无菌棉签深入病死鸡鼻窦腔深部无菌采集病料进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、生理生化试验、革兰氏染色、血凝活性测定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果在富含V因子血琼脂平板上分离到一株灰白色、圆形、边缘整齐的光滑型小菌落,菌落在血琼脂平板、麦康凯等培养基上无明显菌落生长;镜检观察为革兰氏阴性菌,具有血凝活性,符合副禽嗜血杆菌生化培养特性;细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为副禽嗜血杆菌。分离菌株对妥布霉素、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星具有敏感性。     

一株鸭源鸡杆菌的分离鉴定及药敏试验

为确诊贵州省六盘水市某蛋鸡养殖场乌蒙凤鸡发病的原因,无菌采集病鸡的心脏、肝脏、脾脏组织进行细菌分离培养,对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化试验、16S rRNA基因鉴定及序列分析,并进行药敏试验。结果:分离菌在鲜血琼脂培养基上生长出表面光滑、呈β溶血的灰白色小菌落;菌体形态为两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌;能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇,过氧化氢酶、磷酸酶、氧化酶试验呈阳性; 16S rRNA基因与鸭源鸡杆菌参考菌株的核苷酸同源性高达98.2%～99.6%,且与参考菌株GQ423347.1聚为1支;分离菌株对羧苄西林、氧氟沙星高度敏感,对环丙沙星、多粘菌素B中度敏感。结论:分离菌株鉴定为鸭源鸡杆菌,确诊鸡发病原因为鸭源鸡杆菌感染。     

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及oppA基因遗传进化分析

【目的】了解福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）的流行及oppA基因遗传进化情况。【方法】本研究采用细菌分离培养、生化试验、16S rRNA PCR扩增测序、PCR荚膜分型、oppA基因克隆及相似性分析、动物回归试验等方法对分离菌株进行鉴定和分析。【结果】本研究共分离到10株菌,分离菌在血平板上形成淡灰白色、湿润光滑、奶油露珠状菌落;分离菌株能酵解蔗糖、果糖、麦芽糖和甘露醇,不能分解葡萄糖、枸橼酸盐、乳糖、硫化氢等,与多杀性巴氏杆菌生化特性基本一致;分离菌株16S rRNA序列与GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌相似性达99.9%以上,10株分离菌均为多杀性巴氏杆菌;PCR荚膜分型显示,6株分离菌为荚膜A型,4株为荚膜D型;基于oppA基因的遗传进化树显示,10株分离菌均位于同一分支内;动物回归试验结果显示,在24 h内攻毒小鼠死亡率较高（21/30）,分离菌有较强的致病力。【结论】福建省猪场猪多杀性巴氏杆菌流行菌株的荚膜血清型主要是A和D型,且大部分菌株都来源于共同的祖先,本研究结果丰富了猪多杀性巴氏杆菌的流行病学资料,并为该病的防控奠定基础。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%~99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。     

育肥猪真杆菌的分离与鉴定

本试验系对自安徽某猪场发病育肥猪脓肿脾脏中分离的一株细菌,通过形态特征、培养特性、生化反应检查,致病性和药物敏感性试验,以及16SrR NA基因的扩增和序列分析进行鉴定。结果显示,分离菌为革兰氏阳性短杆状菌,在兔血琼脂平板和牛血清胰蛋白胨大豆琼脂平板有氧条件下生长良好,可致小鼠死亡,对头孢类抗生素和喹诺酮类抗菌药敏感,16SrRNA基因序列与猪真杆菌属细菌的同源性最高,在91.2%~99.4%之间,遗传进化关系密切,与猪真杆菌属细菌属于同一分类群。结果表明,分离菌为猪真杆菌。     

一株肉牛源干燥棒状杆菌的分离鉴定

为了确定河北省昌黎县某肉牛场肉牛发病原因,本研究从呼吸道症状明显的病牛鼻粘液中分离纯化到1株优势菌,采用细菌培养、革兰氏染色、细菌生化鉴定、rpoB基因检测、16S rRNA序列分析方法鉴定,经K-B试纸法检测该分离菌对泰乐菌素、头孢拉定等18种抗生素的药物敏感性。结果显示,分离菌革兰氏染色呈阳性短杆状球菌,在血琼脂培养基上可生长为干燥且粗糙的淡黄色菌落,在LB液体培养基中呈沉淀生长,菌液上层轻微浑浊,下层有颗粒状、片状沉淀;rpoB基因PCR扩增检测结果为阳性;该分离菌具有脂酶、赖氨酸脱羧酶、β-葡萄糖苷酶、α-葡萄糖苷酶活性,能够发酵海藻糖、麦芽糖、蔗糖,结果符合干燥棒状杆菌生化特性;16S rRNA序列比对分析表明,该分离菌与干燥棒状杆菌同源性为99%,一致性为91.6%;对泰乐菌素、头孢拉定等7种药物耐药,对环丙沙星、恩诺沙星等9种药物敏感。试验结果表明该分离菌为干燥棒状杆菌。     

流产奶牛胎儿肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

从流产奶牛胎儿组织中分离到1株革兰氏阴性短杆菌,采用细菌分离纯化、生化试验、16S rRNA和16S～23S rRNA测序、药敏试验和小鼠致死性试验对其进行了鉴定。结果显示,该分离菌与GenBank中肺炎克雷伯氏菌16S rRNA和16S～23S rRNA基因序列一致性分别高达99%和96%,16S～23S rRNA基因被扩增出3条不同长度条带;该菌生化特性均符合肺炎克雷伯氏菌的生化反应特性;对头孢曲松、阿米卡星、多粘菌素等敏感,对多西环素、四环素、卡拉霉素等中度敏感,对青霉素、红霉素、米诺环素等耐药;对小鼠有很强的致病性。以上结果表明,该分离细菌为肺炎克雷伯氏菌。     

鹅源金黄色葡萄球菌分离鉴定及其诊治分析

为确诊昆明市东川区某养鹅场疑似葡萄球菌感染鹅群的致病原因,采集发病鹅的脑组织、肿胀关节脓液及肝脏等病料进行细菌分离鉴定。结果显示,从病料中分离到1株细菌,分离菌在普通营养琼脂平板上形成光滑、湿润、无色、表面凸起的圆形菌落,在血琼脂平板上能产生β溶血,镜检呈革兰氏阳性葡萄串状;生化鉴定结果符合金黄色葡萄球菌反应特征;分离菌16S rRNA扩增序列分析表明,其匹配度最高的均是金黄色葡萄球菌各株系的16S rRNA序列,综合研判分离菌株为鹅源金黄色葡萄球菌。药敏试验显示,该菌株对头孢噻肟、阿米卡星等敏感,对强力霉素、庆大霉素等中度敏感,对氨苄西林、大观霉素等具有耐药性;该分离菌株接种试验小鼠具有较强的致病性。结果表明,金黄色葡萄球菌是引起该场鹅群感染的致病因素之一,该分离菌对多种抗菌药具有耐药性,应引起重视。研究结果为该地区鹅病的临床诊治提供参考。     

龟源松鼠葡萄球菌的分离鉴定及药敏特性分析

为明确一起致乌龟发病死亡的病原,本研究通过细菌的分离培养从患病龟体内分离出一株优势菌,并通过革兰氏染色观察、生化鉴定、16S rRNA序列比对分析、动物回归试验进行鉴定。结果显示,分离菌在血琼脂平板上形成表面粘稠、大而凸起、白色的菌落;革兰氏染色结果显示分离菌为革兰氏阳性,球型,成葡萄串状排列;生化试验结果显示分离菌对葡萄糖、触酶、氧化酶等呈阳性反应,而密二糖、鸟氨酸脱羧酶、V-P反应等阴性;16S rRNA基因序列进化树分析显示该分离菌株与GenBank登录的松鼠葡萄球菌聚为一簇,且同源性达99%以上;动物回归试验显示该菌对乌龟有较强的致病性;药敏特性分析显示,该菌对多数抗生素较为敏感,但对大环内酯类及部分头孢类抗菌药物耐药。研究结果为乌龟松鼠葡萄球菌感染的防治提供参考依据。     

番鸭巴氏杆菌的分离鉴定及体外抑菌实验

为了对番鸭巴氏杆菌病的防治提供科学方法,对疑似番鸭巴氏杆菌病例进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验。从病变部位划线接种血平板进行细菌分离培养;用微量生化法结合分子生物法对分离菌进行种属鉴定;用纸片扩散法和牛津杯扩散法检测分离菌抑菌活性;用腹腔注射分离菌来复制病例。结果:获得菌株Y-X-1、Y-X-2、Y-G-1、Y-G-2,在血平板上半透明、不溶血;对蔗糖产酸不产气,对乳糖不产酸也不产气;于1800bp处出现分离菌PCR电泳条带,分离菌16S rRNA基因序列与多杀性巴氏杆菌高度吻合,Y-G-1与MG597107.1菌株,Y-X-1与KX579748.1菌株的亲缘关系最近,进化树上处于同一分支;头孢曲松高度抑制分离菌生长,青霉素不影响分离菌生长;鸡唾液乳酸杆菌、猪小肠乳酸杆菌对分离菌均表现较强的抑菌性能;复制病例的试验动物,均死于攻菌后的12h之内,死亡动物呈现典型症状。结论:Y-X-1、Y-X-2、YG-1、Y-G-2为多杀性巴氏杆菌,该病例确诊为番鸭巴氏杆菌病。该病防治首选抗生素为头孢曲松,头孢曲松结合乳酸杆菌治疗效果更好。     

死亡黄牛脾肺组织中病原菌的分离与敏感药物筛选

为明确海南省海口市某养牛场一头黄牛的死亡原因,本研究采集死亡黄牛的脾肺样品进行细菌分离纯化、生理生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、药敏试验和小鼠感染试验。结果显示,死亡黄牛脾肺样品在BHI琼脂培养基上形成无色的露珠状优势菌落,镜检为革兰氏阴性杆菌,进一步结合生理生化与细菌16S rRNA基因测序结果确定其为阴沟肠杆菌。该菌对小鼠的半数致死量(LD50)为9.60×10~7cfu/mL,且对死亡小鼠采集病变部位进行细菌分离,得到与原分离菌相同的菌株。药敏结果显示,分离菌对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星有较高的敏感性。本研究首次在黄牛中分离得到阴沟肠杆菌,具有重要的意义。为本地区的黄牛养殖业提供疾病防控参考。     

猪链球菌的分离、16S rRNA鉴定及药敏试验

从湖南某猪场病猪组织中分离出6株细菌,通过培养形态、菌落特征、细菌染色特性、镜检、16S rRNA基因扩增及序列BLAST分析等系统鉴定,确定为猪链球菌,6株分离菌的16S rRNA基因序列与收录菌株同源性为99%以上。药物敏感性试验结果表明,分离细菌对头孢喹肟、先锋霉素、青霉素药物高度敏感。     

牛源马巴氏杆菌的分离鉴定

为了解引起牛肺炎的主要病原,试验从患有肺炎的牛支气管中分离获得一株巴氏杆菌,并对其进行生化鉴定、16S rRNA测序、特异性PCR鉴定及药敏试验。结果表明:分离菌株与马巴氏杆菌(Pasteurella caballi)的生化特性一致;16S rRNA序列与Pasteurella caballi参考菌株ATCC49197的同源性为100%;特异性PCR鉴定为Pasteurella caballi;分离菌株对诺氟沙星、头孢噻吩、四环素等多种抗生素敏感。说明分离菌株为Pasteurella caballi,该细菌同样可以感染牛。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

黑龙江省近几年频繁发生以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎以及急性死亡为特征的传染病,为猪场造成严重经济损失,为了确诊是否有副猪嗜血杆菌感染,采集病死猪肝脏、脾脏和肺脏等病料,进行副猪嗜血杆菌的分离;对其理化特性进行鉴定,应用PCR方法对其16S rRNA基因扩增后进行克隆测序,将测序结果在GenBank上进行BLAST分析,把相近的基因序列应用DNAStar软件进行同源性和进化关系分析;用分离菌株进行药物敏感性试验,筛选敏感药物。结果分离出一种具有多形性的NAD依赖性菌株,经鉴定为副猪嗜血杆菌;16S rRNA基因进化分析结果表明,分离菌株与以往报道的副猪嗜血杆菌中国、日本和美国分离株属于同一亚群,而西班牙分离株属于单独的亚群;分离菌株对壮观霉素和头孢拉定高度敏感。     

鸡源棒状杆菌的分离鉴定及同源性分析

笔者对发生传染性眼炎的病鸡送检病料进行了病原分离鉴定,为该病的实验室诊断提供参考资料。用接种环蘸取病鸡的眼结膜,在兔血琼脂平板和含5%小牛血清TSA琼脂平板上进行病原的分离培养、形态观察、生化试验、16Sr RNA PCR扩增、序列测定、同源性分析。结果从病鸡的眼结膜上分离到一株革兰氏阳性杆菌。该菌对营养要求高,在营养琼脂平板和LB琼脂平板上呈贫瘠的露滴状菌落,在兔血琼脂平板和含5%小牛血清的TSA琼脂平板上生长良好,呈不溶血圆形隆起、白色半透明、光滑湿润的露滴状菌落。该菌与棒状杆菌HM215052.1同源性达99.3%。说明该群鸡是由棒状杆菌所引起的传染性眼炎。