鸡Rab7b在细胞晚期内吞体定位和结合恒定链的分子特征

Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族。恒定链（invariant chain，Ii）具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能。前期研究发现，鸡（Gallus gallus）Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合，但不清楚是否还有其他转运蛋白有该特性。基于Rab7b分子定位于晚期内吞体，并与胞内分子转运相关，本研究探索了鸡Rab7b与Ii结合的分子结构特征。首先，用自行设计的引物扩增了鸡和小鼠（Mus musculus）Rab7b基因，并进行了氨基酸同源性比对分析；构建了含鸡Rab7b及其67位氨基酸突变体Rab7bQ67L的原核和真核重组质粒。其次，将含红色荧光蛋白和目的基因的重组质粒转染鼠巨噬细胞系Raw264.7，培养后用绿色荧光素（FITC）标记的鼠抗晚期内吞体蛋白1（LAMP1）抗体染色，观察目的蛋白在内吞体的定位。进一步将鸡Rab7b和Rab7bQ67L分别与Ii共转染293T细胞，观察它们与Ii的共定位。最后用拉下法和免疫印迹检测鸡Rab7b及Rab7bQ67L与Ii的结合。结果表明，所克隆获得的鸡Rab7b基因与预期大小一致，其开放阅读框为624 bp，编码208个氨基酸。鸡和鼠的Rab7b蛋白质结构相似性为74%。尽管鸡Rab7b和突变体Rab7bQ67L均能结合Ii，但只有Rab7b可以定位于晚期内吞体，而突变体却改变了该定位特性。综上所述，鸡Rab7b与Ii不仅在晚期内吞体共定位，而且还能互相结合；鸡Rab7b的第67位氨基酸影响其在细胞内定位而不影响与Ii结合。综上表明，Rab分子参与了Ii在细胞内细胞器的转运，为进一步研究Ii在细胞内的转运机制提供了新的途径。     

Rab5与Rab7调控N2a细胞内狂犬病病毒的早期感染

狂犬病病毒(rabies virus,RABV)作为一种高度嗜神经性的病毒,通过网格蛋白介导和pH依赖的内吞途径侵入神经细胞,然后经胞内体途径进行传输。已有研究表明,Rab5和Rab7是介导胞内体分选、成熟及定向运输的关键蛋白,而RABV胞内运输是否也受到这两者的调控尚不清楚。本试验通过免疫荧光、Western blot及TCID50等技术,检测了N2a中RABV核蛋白(N)和Rab5与Rab7的胞内共定位及RNAi下调Rab5与Rab7表达时,N蛋白表达水平、病毒滴度等的变化。结果发现,Rab5和Rab7与RABV N蛋白存在共定位;当Rab5和Rab7表达下调,RABV感染初期N蛋白表达显著下降,且病毒TCID50也随之降低。结果表明,RABV感染受Rab5和Rab7调节。为进一步解析狂犬病病毒逆轴浆传输机制提供了新的数据。     

鸡恒定链协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体

为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2],分别将它们插入原核表达载体pET-32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293T),并应用拉下法(pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能相应地原核或真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii(Cyt/Tra)和Ii(Cyt/Tra)/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。     

小G蛋白对mTOR信号通路的调控

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种重要的信号调控分子,通过磷酸化作用调控细胞内mRNA的翻译,参与膜蛋白转运、蛋白质降解、蛋白激酶c信号转导和核糖体合成等。不同家族的小G蛋白,如Rheb、Rag、RalA、Rac1和Rab5,在调控mTOR信号通路中发挥着重要作用。Rheb结合并直接激活mTOR,Rag和Rac1介导mTOR的定位,RalA通过磷脂酸的产生间接激活mTOR,Rab5调控mTORC1的活化和定位。本文将围绕近年来发现的多种小G蛋白家族成员参与调控mTOR信号通路的研究进展进行综述。     

绵羊NYD-SP27基因的原核表达及生物信息学分析

本研究旨在对绵羊NYD-SP27基因进行克隆和原核表达，并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。根据GenBank中绵羊NYD-SP27基因序列（登录号：KX905090）设计1对特异性引物，通过PCR方法扩增目的基因片段，构建pET-22b（+）-NYDSP27重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞，提质粒进行双酶切鉴定，将鉴定正确的pET-22b（+）-NYDSP27重组质粒转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定，并利用生物信息学方法对NYD-SP27基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示，试验成功扩增出大小为1 617 bp的NYD-SP27基因片段，并经NdeⅠ和Xho Ⅰ双酶切获得大小为5 400和1 617 bp的两条片段，表明成功构建了pET-22b（+）-NYDSP27重组质粒，诱导表达重组蛋白大小约60 ku，主要以包涵体的形式存在。NYD-SP27蛋白分子式为C₂₇₉₈H₄₃₁₉N₇₃₇O₈₁₉S₁₉，原子总数为6 892，理论等电点（pI）为6.16，为酸性蛋白，不稳定系数为46.96，属于不稳定蛋白，总平均亲水性为-0.403。该蛋白无跨膜结构，无信号肽，含有45个潜在的磷酸化位点和24个抗原表位；NYD-SP27蛋白二级结构中的α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲分别占26.21%、3.90%、18.03%和51.86%。本试验结果可为深入研究绵羊NYD-SP27蛋白的作用机理提供理论依据。     

基于表面等离子体共振(SPR)技术实时分析RGD基序与整联蛋白的相互作用

旨在研究口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）结构蛋白VP1上的RGD（Arg-Gly-Asp）基序与宿主细胞表面受体整联蛋白的结合特异性,作者应用基于表面等离子共振技术（SPR）的Biacore 3000系统实时研究RGD基序分别与猪源整联蛋白α_vβ₆胞外区结构域、α_v亚基胞外区结构域和β₆亚基胞外区结构域的亲和力。首先通过结合试验筛选与RGD基序有结合的整联蛋白结构域,再对有结合的整联蛋白与RGD基序开展动力学分析。结果显示,合成的RGD基序与猪源整联蛋白α_vβ₆胞外区结构域有结合,结合动力学常数K_a、K_d、K_D分别为42.3 M^-1s^-1、3.1×10^-4s^-1和7.33×10^-6M;与整联蛋白α_v亚基胞外区结构域之间亦有结合,结合动力学常数K_a、K_d、K_D分别为21.8 M^-1s^-1、2.13×10^-4s^-1和9.79×10^-5M;与β₆亚基胞外区结构域几乎没有结合。综上表明,RGD与整联蛋白α_vβ₆胞外区结构域的结合比与整联蛋白α_v亚基胞外区结构域之间的结合快且亲和力强。本研究将为进一步探讨FMDV与宿主细胞表面受体的相互作用提供参考。     

猪圆环病毒2型ORF2与T细胞表位基因重组腺病毒表达载体的构建及鉴定

利用腺病毒表达系统表达猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）的ORF2基因与T细胞表位（T cell epitope,TCE）基因,表达的融合蛋白具有反应原性,为研制PCV2新型疫苗奠定基础。以pMD18-T-ORF2、pMD18-T-TCE为模板,采用PCR方法扩增目的基因ORF2和TCE,以多肽接头（Gly₄Ser）₃为连接子,运用重叠延伸PCR技术将2段基因通过连接子（Gly₄Ser）₃进行融合连接。将融合基因定向克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV构建重组质粒pShuttle-CMV-ORF2-TCE,将该重组质粒用PmeⅠ酶线性化后电转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞（内含pAdEasy-1骨架质粒）进行同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-ORF2-TCE。PacⅠ酶线性化pAd-ORF2-TCE质粒后转染AD293细胞包装病毒,重组腺病毒经3轮噬斑纯化后获得重组腺病毒rAd-ORF2-TCE,病毒滴度为10^12.3 TCID₅₀/mL。Western blotting及间接免疫荧光试验（indirect immunofluorecent assay,IFA）结果表明融合蛋白得到正确表达。     

猪传染性胃肠炎病毒特异性受体APN 功能区的初步鉴定

试验为了构建猪氨肽酶N（pAPN）不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化,经Western—blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区。试验构建重组了质粒pET30a—pAPN1（106～669nt）、pET30a—pAPN2（670-1044 nt）、pET30a—pAPN3（1045-1773nt）、pET30a—pAPN4（1774～2328 nt）、pET30a—pAPN5（2329—2889 nt）、pET30a—pAPN6（106—1044nt）、pET30a—pAPN7（1774—2889 nt）;转化宿主菌BL21（DE3）细胞,IPTG诱导表达蛋白,包涵体经SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳回收纯化;用Western—blot、ELISA方法经抗pAPN多克隆抗体初步筛选出pAPN受体功能区。结果表明：pET30a—pAPN2、pET30a—pAPN3、pET30a—pAPN6、pET30a—pAPN7蛋白均以包涵体形式表达并纯化。pET30a—pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能与抗pAPN多抗产生特异性反应。经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在36—153aa、349—591aa、592～963aa内。     

基于截短绵羊鹦鹉热衣原体r MOMP183-390蛋白的间接ELISA检测方法建立与应用

为建立绵羊鹦鹉热衣原体(Cp)间接ELISA抗体检测方法，本实验将编码Cp主要外膜蛋白MOMP的omp A基因序列按大肠杆菌密码子偏好性优化后，合成质粒p ET-28b (+)-omp A，另外设计特异性引物，分别将omp A截短克隆至p ET-28b(+)载体中构建重组表达质粒p ET-28b(+)-omp A_1-182和p ET-28b(+)-omp A_183-390，测序鉴定正确后分别转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导并纯化后，经western blot鉴定3个重组蛋白，结果显示，重组MOMP_183-390蛋白(r MOMP_183-390)表达效果最好。以r MOMP_183-390作为包被抗原，采用方阵滴定法优化各反应条件，初步建立了检测Cp抗体的间接ELISA方法。采用建立的该方法检测羊痘病毒、布鲁氏菌、羊口疮病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒等羊临床常见病的阳性羊血清，结果显示，除Cp外，该方法与其他阳性羊血清均无交叉反应，特异性强；将C...     

草地早熟禾NRT1/PTR FAMILY 8.3基因的克隆及表达分析

植物硝酸盐转运蛋白（Nitrate transporter，NRT）可有效转运NO₃^-，提升氮素利用效率。为了解析草地早熟禾（Poa pratensis）适应不同浓度及不同形态氮素、干旱胁迫机理，本研究以草地早熟禾为试材，对NRT1/PTR FAMILY 8.3基因进行克隆、生物信息学分析，并分析了不同浓度及不同形态氮素以及干旱下该基因表达情况。研究结果：草地早熟禾NRT1/PTR FAMILY 8.3基因包含典型的主要协同转运蛋白超家族（Major facilitator superfamily，MFS）结构域，与二穗短柄草（Brachypodium distachyon）高度同源；荧光定量PCR分析表明，该基因根部、叶部的表达量显著高于茎部；氮浓度为7.5 mM时，不同形态氮素诱导下，NaNO₃处理组有利于该基因表达；无氮、高氮组（0，15 mM NaNO₃）基因的表达量显著高于适氮组（7.5 mM NaNO₃）；干旱胁迫可促进其表达。研究结果为探究NRT1/PTR FAMILY 8.3在不同氮素环境中的调节机制，培育氮素利用率高的优质草种提供理论基础。     

Molecular Characteristics of Chicken Rab7b in Localization and Binding Invariant Chain in Late Cell Endocytosis

Rab is a family of molecules that mediate the transport of active proteins in cells. The invariant chain (Ii) has the immunological functions of assisting antigen peptide transport, B cell maturation, and acting as the receptor of cytokines. Previous studies showed that Rab5a of chicken (Gallus gallus) is bound to Ii in the early endocytosis, but it is not clear whether there are other Rab molecules with this property. Based on the localization of Rab7b in late endocytosis and its relationship with intracellular molecular transport, this study explored the molecular structure of Rab7b binding to Ii. First, Rab7b genes of chicken and mouse (Mus musculus) were amplified with self-designed primers, and the amino acid homology was analyzed; the prokaryotic and eukaryotic recombinant plasmids containing Rab7b and its 67 amino acid mutant Rab7bQ67L were constructed. Secondly, the recombinant plasmid containing red fluorescent protein and target gene was transfected into mouse macrophage line Raw264.7. After culture, the recombinant plasmid was stained with FITC labeled mouse anti late endosomal protein 1 (LAMP1) antibody to observe the localization of the target protein. Furthermore, chicken Rab7b and Rab7bQ67L were co-transfected with Ii to observe their co-localization with Ii. Finally, the binding of Rab7b and its mutants to Ii were detected by pull-down technique and Western blotting. The results showed that the Rab7b gene was the same size as expected, and its open reading frame was 624 bp, encoding 208 amino acids. The homology of Rab7b protein structure between chicken and mouse was 74%. Although both Rab7b and Rab7bQ67L could bind to Ii, it was Rab7b rather than Rab7bQ67L could locate in the late endocytosis. In conclusion, Rab7b and Ii were not only co-located in the late endocytosis, but also combined with each other; the 67th amino acid of Rab7b affected its location in cells but not with Ii. These results suggest that Rab molecules are involved in the transport of Ii in intracellular organelles, which provides a new way to further study the mechanism of Ii transport in cells.     

猪恒定链的原核表达及其分子结构与功能分析

为研究猪恒定链(Ii)分子结构与功能,通过PCR扩增编码完整Ii及其异构体的基因片段,克隆至T pMD18-T载体,在对目的基因进行测序及分析其基因与编码蛋白分子结构,确定功能域及其分子遗传变异的基础上,构建pET-32a-Ii重组载体,转化BL21进行诱导表达,并分析表达产物的免疫活性。结果显示,PCR扩增了645bp和837bp的Ii及其异构体编码基因,DNA序列分析其编码氨基酸分别为215个和279个,异构体Ii多出了64个氨基酸构成的Tg区;分子结构分析显示,猪Ii分子由胞内区、跨膜区和胞外区3部分组成,包含有内体定位基元、Ii-key、CLIP、TRIM等功能域,其中内体定位基元含有特征性L7I和PML17双亮氨酸基序,Ii-key、CLIP、TRIM氨基酸序列与人和小鼠Ii具有高度一致性。遗传变异分析表明,猪Ii分子与人、小鼠等哺乳动物的Ii同源性为62.7%~95.6%,与鸡、鸭、鸽、鹅等禽类Ii的同源性为48.7%~49.5%;空间结构分析显示,猪Ii有3个相似的α-helix构成,其间间隔由相似氨基酸构成的2个转角,转角关键位点氨基酸具有高度一致性;Ii编码基因在BL21细胞获得了有效表达,目的蛋白大小约41ku,Western blot和免疫荧光检测显示,表达产物具有良好的反应原性。试验成功获得了猪Ii及其异构体编码基因,明确了其功能区、分子遗传变异等特征,诱导表达获得了具有良好免疫活性的Ii重组蛋白,为进一步研究猪Ii分子结构与功能奠定了基础。     

特异性靶向犬细小病毒融合DNA疫苗的构建及免疫效果的研究

研究旨在构建特异性靶向犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）融合DNA疫苗,探讨其诱导机体产生免疫应答的效果。试验用重组技术构建了含细胞毒性T淋巴细胞抗原-4胞外区（CTLA-4₁₂₅）与犬细小病毒VP2的主要抗原表位区域（VP2₂₂₈）融合表达质粒pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈,同时构建了不含CTLA-4₁₂₅的pVAX1-VP2₂₂₈,体外转染COS-7细胞,Western blotting检测其表达产物;将pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈、pVAX1-VP2₂₂₈分别免疫小鼠,免疫后进行抗体水平测定和抗体亚型分析;通过淋巴细胞增殖试验和ELISA分别检测淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平。结果显示成功构建了pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈和pVAX1-VP2₂₂₈,并能在COS-7细胞中正确表达;抗体检测结果显示pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈免疫组抗体水平显著高于pVAX1-VP2₂₂₈免疫组（P<0.05）;淋巴细胞增殖试验显示pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈免疫组的刺激指数显著高于pVAX1-VP2₂₂₈免疫组（P<0.05）;γ-干扰素表达水平测定显示pVAX1-CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈免疫组极显著高于pVAX1-VP2₂₂₈免疫组（P<0.01）。结果表明,CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈融合DNA能有效增强动物对VP2₂₂₈抗原的免疫应答,为进一步研究融合DNA疫苗特异性的靶向递呈机制奠定基础。     

Construction of Specifically Targeted Chimeric Canine Parvovirus DNA Vaccine and Its Efficacy Assessment

To design chimeric DNA vaccine targeted to antigen-presenting cells with enhanced efficacy to induce immunization.The plasmid containing the gene encoding the extracelluar domain of canine cytotoxic T-lymphocyte antigen 4(CTLA-4₁₂₅),was directly fused to the gene fragment for major antigenic epitopes of VP2(VP2₂₂₈) by molecular engineering technology.The plasmid containing VP2₂₂₈ alone was also constructed to serve as control and transfection of COS-7 cells with the two resultant plasimds was performed respectively,followed by assay of Western blotting.The mice were immunized with the constructed two plasimds,respectively.After immunization,the antibodies anginst CPV in the immunized mice at different times were measured by HI.The spleen lymphocyte proliferation response was determined by lymphocyte proliferation assay,and the interferon-γ (IFN-γ) expression level of the mouse lymphocytes were measured by ELISA.The eukaryotic expression plasimds of CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈ fusion protein or VP2₂₂₈ alone were cloned.Western blotting showed that the two recombinant proteins could be expressed.Immunization results showed that the antibody levels in serum of CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈-immunized mice were significantly higher than that of VP2₂₂₈-immunized mice (P<0.05).The lymphocyte stimulation indexes and secreted IFN-γ levels of the CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈-immunized mice were significantly higher than that of VP2₂₂₈-immunized mice (P<0.05 and P<0.01),respectively.CTLA-4₁₂₅-VP2₂₂₈ chimeric DNA vaccine stimulates strong immune response in mice,making it possible for further exploration into chimeric DNA that target the antigen to APCs.     

猪β2肾上腺素能受体基因真核表达载体及突变体的构建及表达

试验旨在构建猪β₂肾上腺素能受体（β₂ adrenergic receptor,β₂AR）基因及其突变体真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达。通过猪基因组DNA克隆猪β₂AR基因,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1（+）,构建真核表达载体pcDNA3.1（+）-β₂AR,加入c-myc标签后命名为myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR。以真核表达载体为模板构建突变体myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR-D130N、myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR-C285S和myc-pcDNA3.1（+）-β₂AR-D130N/C285S,并将构建的真核表达载体和突变体转染HEK293T细胞,利用Western blotting技术验证其表达。结果显示,猪β₂AR基因已正确重组入pcDNA3.1（+）载体中;经测序鉴定,猪β₂AR的第130位天冬氨酸成功突变为天冬酰胺,第285位半胱氨酸成功突变为丝氨酸。Western blotting检测结果证明所构建的表达载体均可在HEK293T细胞中表达。本研究成功构建了猪β₂AR野生型的真核表达载体及2个单点突变和1个双点突变的突变体,并验证其在HEK293T细胞中正常表达,为进一步研究猪β₂AR蛋白表达及其药理学活性奠定基础。     

Construction of Eukaryotic Expression Vector of Chicken MHCⅠα and β2m Genes and Its Expression in 293T Cells

To explore the mechanism of MHCⅠ molecule in immune response,chicken MHCⅠα and β₂m genes were cloned by PCR.Then the fragments were inserted into the eukaryotic expression vector with fluorescent protein,and the recombinant plasmids pEGFP-MHCⅠα and pmCherry-MHCⅠβ₂m were constructed.The recombinant plasmids were transfected into 293T cell with lipofectin reagent.The gene products of recombinant plasmids were mainly located to endomembrane system of the cells by fluorescence microscopy,and changed the intracellular localization of the fusion with the fluorescent protein.Moreover,the positive reactions were observed by the method of Western blotting,and the proteins had the molecular weight of 68.3 and 41.3 ku,respectively,in accord with the target proteins.The results showed that the recombinant plasmids were expressed in 293T cells with a good immunological activity,and the proteins had the binding reaction with specific antibodies.     

绵羊c-Myc与EGFP融合蛋白的真核表达及其对细胞增殖的调控作用

为了探讨c-Myc基因对细胞增殖及相关基因表达的调控作用，本试验构建了c-Myc-（G₄S）₃-EGFP融合基因的真核表达载体pc-Myc-EGFP，并利用生物信息学分析了其结构和理化特征。转染后分别通过细胞计数和qRT-PCR检测了其对绵羊胚胎成纤维细胞（sheep embryonic fibroblasts，SEF）增殖及相关基因表达的影响，并利用启动子分析软件解析了相应的表达调控机制。酶切鉴定和测序结果表明，载体构建成功。生物信息学分析表明，绵羊c-Myc蛋白主要定位于细胞核，含有螺旋环螺旋（helix-loop-helix，HLH）结构域，其分子量为48 474.78 u。融合蛋白c-Myc-（G₄S）₃-EGFP有较强的亲水性，且含有31个磷酸化位点。因（G₄S）₃有较高的灵活度（9.848 5），两侧的c-Myc和EGFP都保持各自的空间构象且互不干扰。进一步的细胞试验结果表明，重组质粒pc-Myc-EGFP在SEF中能够表达。过表达c-Myc促进了SEF的增殖，使cyclin D2、Cdk4、Cdk6、cyclin E1、cyclin A2、cdc25A mRNA的表达水平分别升高至5.20、3.10、6.54、6.52、23.37和8.22倍（P<0.01），E2F1 mRNA的表达升高至1.83倍（P<0.05）。启动子分析结果表明，各基因的5'调控区存在c-Myc和E2F1的结合元件。综上所述，绵羊c-Myc通过上调细胞周期相关基因的表达促进SEF细胞增殖，c-Myc的作用机制可能是通过直接作用于靶基因5'调控区的E-box元件，也可能是通过其他转录因子（如E2F1）的间接调控作用而实现。