高致病性PRRS活疫苗对猪瘟抗体水平的影响

为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)活疫苗对猪瘟(CSF)抗体水平的影响,试验将同期断奶、日龄相近、PRRS与CSF抗体水平接近的70头健康仔猪随机分为7组(A组、B组、C组、D组、E组、F组、G组),采用不同的免疫方案,并于CSF疫苗免疫后第14,28,42天在前腔静脉采血,用ELISA检测CSF抗体,用全自动血细胞分析仪对血细胞进行分析。结果表明:在CSF免疫后第14,28天检测,E组(HP-PRRS疫苗与CSF疫苗同时分点注射)和F组(HP-PRRS疫苗与CSF疫苗混合接种)的CSF抗体平均值均显著低于D组(CSF疫苗免疫后第14天免疫HP-PRRS疫苗)和G组(仅接种CSF疫苗,不接种HP-PRRS疫苗)(P0.05),但与A组(HP-PRRS疫苗免疫后第7天免疫CSF疫苗)、B组(HP-PRRS疫苗免疫后第14天免疫CSF疫苗)和C组(CSF免疫后第7天免疫HP-PRRS疫苗)CSF抗体平均值差异不显著(P0.05);HP-PRRS活疫苗与CSF疫苗同时分点注射或混合接种、HP-PRRS活疫苗免疫后第7天免疫CSF疫苗,平均白细胞数和淋巴细胞比例均显著低于其他组(P0.05),说明免疫HP-PRRS活疫苗能引起猪群CSF抗体水平降低。     

两种猪圆环病毒2型疫苗临床免疫效果的比较

选取国内商业PCV2疫苗A和B,在一个大型猪场进行小型田间试验.将36头母猪随机平均分成3组,每组母猪所产仔猪在14日龄分别接种疫苗A(A组)、 疫苗B(B组)、 生理盐水(C组,对照).采集免疫后不同时间的仔猪血清,检测PCV2抗体,比较各组的发病率、 死亡率与增重.结果显示,接种疫苗组与对照组的仔猪发病率与死亡率都低、 且无差异;但接种PCV2疫苗的两组都显著(P<0.05)提高了增重,并改善了血清中PCV2抗体变化趋势.另外,A组的临床数据稍优于B组.检测结果表明,仔猪免疫PCV2疫苗的临床效果明显优于未免疫组,PCV2疫苗A的临床免疫效果稍好于疫苗B,为试验猪场今后进行PCV2疫苗免疫提供了实验依据.     

妊娠母猪免疫高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗对仔猪免疫功能的影响

规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）呈持续性感染,给养猪业造成的损失最为严重。部分规模化猪场未实施切实的猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫,呈慢性和潜伏感染,作者现场对妊娠母猪接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS）减毒活疫苗（TJM-F92株）,旨在从体液免疫、细胞免疫、非特异性免疫功能角度探讨妊娠母猪接种疫苗后对仔猪免疫功能的影响。选取妊娠60 d母猪随机分为A、B 2组,A组母猪接种HP-PRRS减毒活疫苗（TJM-F92株）,B组母猪接种等量生理盐水,2组所产仔猪于10、20、30日龄时检测PRRSV、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病病毒（PRV） 母源抗体,以MTT法测定外周血T、B淋巴细胞转化率、以琼脂平板法测定血清溶菌酶含量、以Griess试剂法测定NO含量。试验结果表明,妊娠母猪免疫HP-PRRS减毒活疫苗（TJM-F92株）后,其所产10日龄仔猪PRRSV母源抗体水平显著高于对照组仔猪（P＜0.05）,仔猪CSFV阻断抗体极显著增高（P＜0.01）,20日龄仔猪PRV感染抗体显著下降（P＜0.05）;免疫组和对照组所产仔猪的T、B淋巴细胞转化率及NO、溶菌酶含量均无显著差异（P＞0.05）。提示,妊娠母猪免疫HP-PRRS减毒活疫苗（TJM-F92株）,对所产仔猪非特异性免疫功能和T、B免疫功能均无免疫抑制作用,仔猪抗PRRSV母源抗体、抗CSFV阻断抗体均显著增高且PRV感染抗体降低。     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟弱毒疫苗免疫效果的影响

为了解猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪瘟(CSF)弱毒疫苗诱导的体液免疫的影响,从未接种PCV2疫苗的猪场育肥猪中选取疑似病猪和健康猪各10头,分为A、B、两组,其中A组经ELISA试剂盒检测PCV2抗体呈阳性。A、B两组同时免疫CSF弱毒疫苗,免疫后每隔2周检测CSFV抗体水平。结果显示:感染PCV2后的猪只,CSFV抗体为阴性,而未感染PCV2组在接种CSF弱毒疫苗后抗体阳性率较高,抗体水平呈现逐渐升高的趋势,提示PCV2感染对CSF弱毒疫苗的产生有明显的抑制作用。     

猪瘟（HC）、口蹄疫（FMD）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）疫苗同时分点免疫的效果分析

选择日龄相近、饲养条件一致、健康状况良好的断奶仔猪150头,随机分为A、B、C三组,A组按传统免疫程序接种HC、FMD疫苗;B组按传统免疫程序接种HC、FMD、PRRS疫苗;C组则同时分点接种HC、FMD、PRRS疫苗。经检测,三种疫苗同时分点接种对动物本身不会产生任何免疫副作用;HCV抗体检测合格率首免后达到68.0%,二免后达到91.7%;FMD抗体检测合格率首免后达到80.0%,二免后达到81.3%;新生乳猪和断乳仔猪发生PRRS的死亡率分别从原来的17.5%、17.2%下降到0%。     

猪瘟免疫猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后免疫应答及T细胞表型变化特征

选择17头28日龄的CSFV和PRRSV抗体均为阴性的仔猪,于试验的第1天和第14天分别对其进行猪瘟耐热保护剂活疫苗（兔源）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征Nsp2A1882—2241弱毒疫苗免疫。在免疫后的第28、42天采集外周血液,分析特异性抗体表达量和外周血T淋巴细胞表型的变化,评估猪瘟免疫对猪繁殖与呼吸综合征免疫的影响。结果显示,在CSF免疫后第28、42天,CSFV高抗组中的CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋、CD4^＋CD8^＋和CD4-CD8数目均比CSFV低抗组高,CD3^＋和CD8^＋细胞数量比CSFV低抗组低;PRRS高抗组中,CD4CD8-细胞含量高于PRRS低抗组;在CSF免疫后第28天,CSFV抗体产生较高（阳性比率为73．33％）,PRRSV抗体产生较低（阳性比率仅为6．67％）。在CSF免疫后的第42天,CSF高抗组中PRRSV抗体阳性比率较CSF低抗组高8．33％。结果表明,CSFV特异性抗体产生高时能增加PRRSV特异性细胞免疫应答,增加CD4^＋细胞、CD4^＋CD8^＋细胞数量,提高机体免疫水平。CD3＋和CD4CD8-细胞应答作用值得重视。     

猪瘟和伪狂犬活疫苗几种免疫方式的免疫效果评价

为了评价猪瘟和伪狂犬活疫苗的免疫效果,采用猪瘟活疫苗（传代细胞源）和伪狂犬活疫苗（Bartha—K61株）对35—40日龄猪瘟和伪狂犬母源抗体阴性的健康仔猪分为4组,分别进行单独注射、分点同时注射与混合注射,观察各组注射后的副反应,并对不同时期的抗体用ELISA试验检测血清抗体效价来评价其免疫效果。试验结果表明,两种疫苗同时分点注射和混合注射,相互间的干扰很小,两种疫苗同时注射不影响各自免疫抗体的产生,原因可能是两疫苗共同刺激动物的免疫器官后有提高动物产生免疫抗体的作用．     

猪瘟兔化弱毒疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同时接种的免疫效果评价

为评价猪瘟兔化弱毒疫苗和猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗同时免疫效果,本实验采用猪瘟活疫苗(细胞源)和PCV2灭活疫苗(LG株)两种疫苗同时分点注射和混合注射35日龄仔猪,于免疫后间隔3周、5周、7周、9周采血,通过猪瘟病毒(CSFV)抗体检测试剂盒和PCV2抗体检测试剂盒进行CSFV和PCV2特异性抗体检测。结果显示,无论是两种疫苗同时颈部两侧分点分别注射,还是用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗后混合免疫,免疫后3周CSFV和PCV2抗体均呈阳性,CSFV抗体滴度和PCV2抗体滴度于7周和9周达到峰值,与各疫苗单独免疫对照组抗体产生时间和滴度无明显差异。实验表明,两种疫苗可以同时注射或采用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗进行免疫,均不影响各自免疫抗体的产生。因此,可以将PCV2灭活疫苗作为CSFV活疫苗的稀释剂,采用一次性注射的形式同时接种这两种疫苗,为简化这两种病临床疫苗免疫注射方面提供了实验依据。     

猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗联合免疫试验

猪瘟和猪呼吸道病综合征（PRDC）给当前猪场造成重要威胁,猪瘟疫苗和猪肺炎支原体疫苗是重要的防制工具。由于两种疫苗同时注射有利于减少猪群应激并减轻劳动强度,本试验旨在探讨仔猪3周龄时同时注射猪瘟疫苗和肺炎支原体疫苗对猪瘟抗体滴度变化的影响。选择3头同期分娩母猪,将每头母猪所产12头仔猪随机平均分到A、B、C、D这4个组。4个组都在3、8周龄注射猪瘟疫苗。A组只注射猪瘟疫苗;B组和C组在1、3周龄接种猪肺炎支原体疫苗,3周龄时猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗同时注射,B组为两种疫苗分点注射,C组为混合注射;D组在2、4周龄注射猪肺炎支原体疫苗。统计分析表明,10周龄和13周龄时4个组猪瘟抗体滴度差异不显著,说明猪肺炎支原体疫苗与猪瘟疫苗同时注射并不干扰猪瘟抗体的生成。另外发现,在母源抗体水平较高的情况下,3周龄接种猪瘟疫苗会受到母源抗体的部分干扰。     

场间种猪群猪瘟E2蛋白灭活疫苗与猪瘟活疫苗免疫效果对比

为准确了解、比对不同种猪场猪群免疫猪瘟E2灭活疫苗与猪瘟C株 （脾淋源、ST传代细胞源）活疫苗效果。对A、B、C、D、E、F 6家猪场1 672头母猪免疫对应猪瘟疫苗后,分别采集6家猪场的20头、30头、10头、20头、10头、10头共计100头母猪的血清样品进行间接ELISA检测。结果显示100份样品中猪瘟抗体阳性率100%;其中免疫猪瘟C株 （脾淋源、ST传代细胞源）活疫苗组A、B、C场抗体效价OD均值分别为2.0662、2.0029、1.8147,离散度分别为41.86%、28.89%、43.85%;免疫猪瘟E2灭活疫苗D、E、F场抗体效价OD均值分别为2.6587、2.2537、2.4862,离散度分别为21.75%、7.72%、9.76%;经两样本均数比较T检验分析,2个试验组内抗体效价OD值差异不显著,2个试验组间抗体效价OD值差异极显著。     

猪圆环病毒2型感染对猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗体液免疫的影响

本试验采用ELISA方法对单独接种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株灭活苗组(HP组,n=3)和PCV2感染且出现病毒血症后接种PRRSV变异株灭活苗组(PCV2/HP组,n=3)不同时相血清中的PRRSV抗体进行检测;并对HP和PCV2/HP组血清中PCV2特异的抗体和核酸分别进行ELISA和荧光定量PCR检测。结果表明,在首免后70 d HP组血清平均抗体效价极显著高于PCV2/HP组(P<0.01);首免后56、63和77 d HP组平均抗体效价明显高于PCV2/HP组。其中在首免后56和63 d HP组抗体阳性率均达67%(2/3),PCV2/HP组在相应时相抗体阳性率为0;在首免后70和77 d HP组抗体阳性率均达100%(3/3),PCV2/HP组在相应时相抗体阳性率仅为0和33%(1/3)。结果提示PCV2感染可在一定程度上抑制PRRSV变异株(JXA1)特异性的抗体反应。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答

对20日龄SPF猪和20日龄猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）血清阳性猪，人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北京分离株（BJ－4）后48h接种猪瘟疫苗，利用ELISA方法检测仔猪针对PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫，利用MTS法检测仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原ConA的刺激反应。结果表明，不论是SPF仔猪还是带有PRRSV抗体的仔猪，在鼻内接种PRRSV后48h接种猪瘟疫苗，其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组，对有丝分裂原ConA的刺激反应也下降。由此说明，PRRSV感染使仔猪对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制。     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟疫苗体液免疫应答的影响

采用ELISA方法对单独接种猪瘟疫苗组(CSFV组,n=3)、PCV2感染且出现病毒血症后接种猪瘟疫苗组(PCV2/CSFV组,n=3)及PCV2感染同时接种猪瘟疫苗组(CSFV/PCV2组,n=3)不同时相血清中的猪瘟抗体进行检测;并对PCV2感染对照组(PCV2组)及PCV2/CSFV和CSFV/PCV2组血清中PCV2特异的抗体和核酸分别进行ELISA和PCR检测.结果表明,在接种后52 d CSFV组血清中抗体的阻断值显著高于CSFV/PCV2组(P<0.05);接种后42 d和52 d CSFV组平均抗体效价明显高于PCV2/CSFV和CSFV/PCV2组,其中在52 d CSFV组抗体阳性率这100%(3/3)而PCV2/CSFV和CSFV/PCV2在相应时相抗体阳性率仅为67%(2/3).结果提示PCV2感染可在一定程度上抑制猪瘟疫苗特异性的抗体反应.     

芦荟多糖对猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫猪抗体的影响

 试验研究了芦荟多糖在猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫过程中对猪抗体的影响。试验选择35日龄二元杂交断奶试验猪,随机分为8组,选用高低两个剂量的芦荟多糖分别与PRRSV灭活苗、活疫苗联合使用,在免疫后的不同时段采血,进行PRRSV抗体检测。结果表明,芦荟多糖高低剂量在PRRSV灭活苗免疫的中后期差异显著（P<0.05）,高剂量芦荟多糖组在免疫后第54 d抗体水平比对照组抗体高出73.5%;对于活疫苗,高剂量芦荟多糖能显著提高抗体水平,低剂量芦荟多糖对抗体的产生无显著作用（P>0.05）。试验结果显示,芦荟多糖联合PRRSV灭活苗免疫能显著提高抗体水平,但对活疫苗,只有高剂量芦荟多糖才能提高抗体水平。     

猪伪狂犬病病毒灭活疫苗对猪伪狂犬病病毒流行毒株和经典毒株的免疫保护效果评估

为评估猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）灭活疫苗（HN1201-ΔgE株）免疫后对PRV流行毒株和经典毒株的保护效果,本研究对试验猪分别免疫PRV灭活疫苗（HN1201-ΔgE株）和PRV活疫苗（Bartha-K61）,免疫后第0、7、10、14、17、21、24和28天采血测定PRV gB抗体,并分别使用PRV流行毒株HN1201株和经典毒株闽A株测定免疫后第0、7、14、21和28天血清的中和抗体水平,于免疫后第28天分别使用HN1201株和闽A株攻毒并观察,之后测定体温,测定攻毒后第7和14天PRV gE抗体,及攻毒后0~8 d的排毒情况。结果显示,HN1201-ΔgE免疫组较Bartha-K61免疫组gB抗体和中和抗体产生早,且抗体水平较高。两个免疫组试验猪在攻毒后虽然均无明显临床症状,且免疫组织化学检测（IHC）组织中的病毒抗原均为阴性,但HN1201-ΔgE免疫组试验猪脏器未见任何病理损伤,Bartha-K61免疫组试验猪部分脏器具有病理损伤。与未免疫对照组相比,2个免疫组试验猪在HN1201株和闽A株攻毒后,gE抗体转阳时间晚且排毒率低,HN1201-ΔgE免疫组gE抗体水平整体均低于Bartha-K61免疫组,攻毒后排毒检测中,Bartha-K61免疫组于2个毒株攻毒后第3~5天可检测到排毒,而HN1201-ΔgE免疫组全程未检测到排毒。研究结果表明,灭活疫苗（HN1201-ΔgE株）对PRV流行毒株和经典毒株均可提供完全保护。     

猪流行性腹泻病毒全病毒灭活疫苗量效关系研究

本研究旨在探索猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)灭活疫苗不同抗原含量对仔猪感染的保护作用。测定不同浓缩倍数PEDV感染性病毒粒子数和病毒粒子总数,用不同浓缩倍数抗原分别制备灭活疫苗免疫小鼠,利用ELISA抗体检测方法、中和试验、ELISPOT方法测定体液免疫与细胞免疫产生情况,筛选合适抗原含量疫苗进行仔猪免疫并测定抗体,利用攻毒试验研究浓缩疫苗与保护之间的关系。结果显示,当抗原含量达8×10⁶ pfu·mL^-1以上时,灭活疫苗能有效刺激小鼠产生体液免疫及细胞免疫。以2 mL含8×10⁶ pfu·mL^-1抗原的灭活PEDV疫苗免疫仔猪可抵抗PEDV攻毒引起的腹泻及连续排毒,相较于总病毒粒子数,感染性病毒粒子数与抗体产生呈显著相关(r = 0.998 1),中和效价与仔猪保护呈显著相关性(r=0.974 7)。PEDV灭活疫苗可以提供良好的免疫保护,其中感染性病毒数量是提升抗体水平的关键因子,抗体滴度作为一项体液免疫的指标是判断免疫保护的重要参考。     

猪圆环病毒2型ORF2／猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应

为探讨猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2／猪白介素-2（PoIL-2）嵌合重组表达质粒（rpcDNA3．1／PCV2-linke PoIL-2）在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3．1／PCV2-linker-PolL2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞（Th）和细胞毒性T细胞（Tc）亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性EI。ISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3．1／PCV2qinker-PolL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显著优于rpcDNA3．1／oRF2质粒;在rpcD—NA3．1／PCV2-linkePolL-2质粒或rpcDNA3．I／ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3．1／PCV2-linkerPoIL-2质粒为下-步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。     

猪瘟免疫猪接种PRRSVnsp2A1882-2241弱毒疫苗后IL-12、IL-10、TNF-α应答特征

不同时间段采集猪的血液样本,利用ELISA方法检测血清和细胞培养上清中IL-12、IL-10、TNF-α等3种细胞因子的水平,分析猪双重免疫CSFV、PRRSV弱毒苗后血清和细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,IL-12在血清中的浓度显著高于细胞培养上清中的浓度（P〈O．01）,在CSFV高抗体PRRSV高抗体组中28d采血的细胞培养上清中IL-12的浓度高于14d采血的细胞培养上清中的浓度（P〈0．05）}IL-10血清中水平显著低于细胞培养上清中水平（P〈0．01）,在CSFV高抗体PRRSV高抗体组中28d采血的细胞培养上清中的IL-10浓度显著低于14d采血的细胞培养上清中的浓度（P〈0．01）;TNF-α在血清中水平显著低于细胞培养上清中水平（P〈0．01）,在3组中28d采血的细胞培养上清液中TNF-α浓度高于14d采血的细胞培养上清液中浓度（P〈0．05）。结果表明,2种疫苗特异性抗体应答高时,IL-12水平显著上调,IL-10水平显著下调,提示上调IL-12及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。TNF-α总体水平上升,但在血清中水平较低。     

PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株多重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、高致病性变异株以及TJM-F92疫苗株的Nsp2基因序列特点,设计2对特异性引物。经优化反应条件后,建立了能同时检测并区分PRRSV美洲型经典株、变异株及疫苗株的多重RT-PCR方法。该方法特异性强,与猪其他病毒间不存在交叉反应;敏感性高,对重组质粒标准品的检出下限为1.13×10³拷贝/μL。应用所建立的方法对349份临床疑似病料进行检测,结果检出PRRSV阳性119份,其中美洲型经典株5份、变异株107份、TJM-F92疫苗株7份,且有变异株和TJM-F92疫苗株混合阳性7份。表明本研究成功建立了PRRSV美洲型经典株、变异株及TJM-F92疫苗株的多重RT-PCR鉴别检测方法,可用于PRRSV的临床检测及流行病学调查。