饲用芽孢乳酸菌的生物学特性研究

试验研究了芽孢乳酸菌的生长特性、泌酸能力、高温耐受性、耐酸性、胆盐耐受性和抑菌能力,旨在为微生态饲料添加剂的研发提供试验依据。结果表明,芽孢乳酸菌在30 h时菌体质量浓度达到最高值,在32 h时产酸量最高,最后在pH 3.80左右趋于稳定;芽孢乳酸菌经90℃处理10 min后存活率达到73.47%,pH 2.0及1.0%胆盐处理3 h后存活率分别为54.69%、24.36%;芽孢乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌性能,抑菌圈直径分别为18.38、19.76、17.42 mm。结果说明,芽孢乳酸菌具备良好的生物学特性,是一株优异的益生菌株。     

一株土壤源地衣芽孢杆菌的鉴定及生物学特性研究

试验旨在筛选优质土壤源益生菌菌种资源，为畜牧生产中微生态制剂研发提供候选菌株。试验以北京市郊区农田土壤为材料，经紫外诱变、革兰氏染色和接触酶试验分离并筛选出1株对金黄色葡萄球菌具有明显抑制能力的菌株。通过16S rRNA基因进化分析和种属鉴定，判定该菌为一株地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。进一步通过耐热、耐酸、耐胆盐和抗生素敏感性检测，发现该地衣芽孢杆菌在85℃处理10 min后存活率高达93.33%,pH为3.0及2.5时对其活性均影响较小，并且在0.3%、1.0%和2.0%的胆盐浓度下培养3 h仍可继续生长，表现出优良的抗逆性。通过与病原菌混合培养以及对多种致病菌的抑菌试验检测，发现该菌株对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有抑制作用。     

丁酸梭菌对肉仔鸡饲料加工过程及消化道环境的耐受性研究

本试验通过模拟肉仔鸡饲料制粒条件及其消化道环境,研究丁酸梭菌在饲料制粒过程中及在肉仔鸡消化道内对不良环境的耐受性。试验分别对丁酸梭菌的温度、压力、人工胃液及肠道消化酶耐受性进行评价。高温耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮在85℃的条件下分别处理2.5、5.0、7.5 min,对照组不作处理。高压耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮分别在0.20、0.30、0.40 M Pa压力下处理5 min,对照组不作处理。人工胃液耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮在p H分别为2.00、3.00、4.00的人工胃液中处理48 min,对照组以p H为7.00的磷酸盐缓冲液(PBS)替代人工胃液。肠道消化酶耐受性试验:将含丁酸梭菌试验饲粮用p H为3.00的人工胃液处理48 min后,再在肠道消化酶混合液中处理198 min,对照组以p H为7.00的PBS替代肠道消化酶。每组均设3个重复。试验结束后平板计数法检测试验饲粮的丁酸梭菌活菌数,计算存活率。结果表明:85℃高温处理2.5、5.0、7.5 min后丁酸梭菌的存活率分别为70.43%、52.69%、46.35%;0.20、0.30、0.40 M Pa压力下处理5 min后丁酸梭菌的存活率分别为64.38%、87.14%、101.74%;p H为2.00、3.00、4.00的人工胃液处理48 min后丁酸梭菌的存活率分别为113.27%、123.07%、78.52%;经肠道消化酶混合液处理198 min后丁酸梭菌的存活率为47.71%。结果提示,丁酸梭菌能够耐受肉仔鸡饲料加工过程中的高温、高压环境,对人工胃液有较好的耐受性,但对肠道消化酶的耐受性较低。     

一株乳酸菌培养条件优化及对胆盐和酸性环境耐受性的研究

对一株猪源乳酸菌HEW-A208的培养条件进行优化,并研究其对胆盐及酸性环境的耐受性。通过对菌落数、菌落大小和溶钙圈大小3项指标进行检测,确定乳酸菌分离培养基为最优培养基;在p H2.5、3.5和4.5环境下处理150 min对该菌无显著影响,在p H 1.5环境下处理30 min该菌仍保持较高的存活率;胆盐对该菌生长有一定影响,但短时间内低质量分数处理影响较小。相同胆盐质量分数下,培养时间越长,活菌数越低,胆盐质量分数高于0.2%时该菌生长基本停滞。     

微胶囊乳酸菌对高温制粒的耐受性

以3种不同厂家微囊化包被乳酸菌(微胶囊乳酸菌S、微胶囊乳酸菌Q、微胶囊乳酸菌X)产品为试验材料,在实验室内模拟饲料高温制粒过程,研究高温制粒过程对微胶囊乳酸菌活性的影响。在相同的处理条件下,不同的微囊化包被乳酸菌样品的高温制粒耐受性存在较大差异,其中微胶囊乳酸菌Q、微胶囊乳酸菌X在85℃干燥箱中经7 min干热处理后存活率都在90%以上,而微胶囊乳酸菌S在85℃干燥箱中经7 min干热处理后的存活率仅为40.2%。     

液态发酵凝结芽孢杆菌制剂的制备工艺及性能评价

试验旨在研究凝结芽孢杆菌的发酵条件、发酵液的浓缩方式、载体吸附等工艺,并评价其产品性能。采用10 L全自动发酵罐发酵凝结芽孢杆菌,采用有机膜和矿物质吸附剂对发酵液进行浓缩、吸附。采用体外消化试验、体外药敏试验、耐高温试验和产品储存试验评价产品性能。结果表明:1凝结芽孢杆菌制剂的最佳工艺参数为搅拌速度200 r/min,通气量350 L/h,浓缩设备为有机陶瓷膜过滤设备,矿物质吸附剂与发酵液比例为11。2产品在85℃处理10 min存活率为71%,经胃液消化后存活率为86.8%,过肠液后存活率为69%;产品在25℃和35℃储存30 d后仍保持50%作用的存活率,储存60 d后菌种数依旧可以到达108数量级。由此可见,此产品具有耐酸、耐胆盐、耐高温和易于储存等优良特性。     

饲料原料中两株优良乳酸菌的分离、筛选与鉴定

为获得性能优异的乳酸菌,对一些饲料原料中乳酸菌进行了筛选和鉴定,共获得了105株乳酸菌,通过形态学观察,16S rRNA基因序列分析以及生理生化试验等手段获取了有代表性的16株乳酸菌,通过产酸性能、酸耐受性、耐胆盐能力和抑菌效果等试验测定,共获得了2株性能优异的乳酸菌P16和C20。经鉴定,P16为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),对大肠杆菌K88(Escherichia coli CVCC 225)的抑菌能力较强,12 h发酵液pH值为3.36, 0.3%胆盐处理2 h存活率为82.00%;C20为希氏肠球菌(Enterococcus hirae)对指示菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC 25923)的抑菌效果较好,发酵液12 h pH值为3.88,0.3%胆盐处理2 h存活率为97.67%;此外,P16和C20酸耐受性也相对较强,具备一定应用潜力。     

预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化

试验旨在研究预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化。通过研究嗜酸乳杆菌、布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌不同浓度人工胃液、人工肠液、牛胆盐的耐受性及其对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性,确定其生物学特性;以大肠杆菌K99为指示菌,研究3种益生菌不同配比对大肠杆菌K99的抑菌效果,以确定其最佳组合。结果表明:(1)3种益生菌在不同pH人工胃培养条件下都具有较好的耐受性,其中嗜酸乳杆菌、芽孢杆菌在pH为5时,存活率达到了118.75%、142.24%,布氏酵母菌对不同pH均表现成活率达到了100%以上。(2)3种益生菌在人工胃液中9 h存活率较高,与0 h的OD600相比,布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌存活率分别为108.7%、129.73%、96.37%。(3)在含有不同浓度的牛胆盐培养基中,布氏酵母菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌存活率较对照组的存活率最高为60.49%、85.1%、47.42%。(4)3株益生菌按照不同配比在培养12 h后,试验组第2、4、8组较对照组相比差异显著(P<0.05);培养24 h后,试验组第3、4、5、6较对照组差异显著(P<0.05),组间差异不显著(P>0.05);第8个处理组在培养12 h后对大肠杆菌K99的抑菌效果较好。综合分析,3株益生菌对人工胃液、人工肠液、牛胆盐具有较好的耐受性,并具对大肠杆菌K99、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌均有一定的抑菌特性。嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏酵母菌最佳的优化配比为3:3:1。     

微囊化植物乳杆菌的肠道耐受性研究

为研究以海藻酸钠和脱脂乳作为混合壁材对植物乳杆菌A409微囊化后在动物消化道中的稳定性,试验选用不同质量分数的胆盐、人工胃液及人工肠液处理微囊化植物乳杆菌样品,测定不同处理时间内菌体的存活率。结果表明:研究所用微囊化植物乳杆菌样品具有良好的耐酸性能,用p H 2.5和3.5的人工胃液处理2 h,其存活率均超过80.00%;处理3 h,p H 3.5的人工胃液菌株存活率仍超过80.00%,但p H2.5的人工胃液菌株存活率仅剩64.70%,对强酸环境的耐受性略有不足;用0.10%~0.50%质量分数的胆盐溶液处理微囊化植物乳杆菌样品2 h后仍有较高存活率(超过80.00%),3 h后存活率降至65.60%~82.80%;微囊化植物乳杆菌经人工肠液处理,在0~8 h内有较好的耐受性(超过85.00%),8 h后存活率下降速度较快。以海藻酸钠与脱脂乳作为混合壁材的微囊化植物乳杆菌对酸性条件、胆盐质量分数、人工胃液和人工肠液均有较高的耐受性,在动物胃肠道中稳定性良好。     

鸡源产谷氨酸芽孢杆菌耐受稳定性研究

试验利用已有具有产谷氨酸的5株芽孢杆菌为试验菌株,研究其耐受稳定性,以利于该芽孢杆菌在动物饲料中添加应用。通过测定该5株芽孢杆菌第1代、第20代在不同p H值的酸和不同浓度胆盐的培养液中的生长情况,对试验芽孢杆菌进行耐受稳定性进行研究。结果显示,5株后备芽孢杆菌经过20代培养,表现出不同的耐受性。其中,第1代芽孢杆菌中J2、I3、C34在p H=1.5时的存活率为23.92%~46.43%;第20代芽孢杆菌中J2、I3、C34在p H=1.5时的存活率为16.41%~54.73%。在0.3%浓度的胆盐中,第1代芽孢杆菌中J2、I3、C34的存活率为54.07%~91.51%;在0.3%浓度的胆盐下,第20代芽孢杆菌中,J2、I3、C34的存活率为10.53%~92.25%。通过以上结果指出芽孢杆菌J2在不同p H值和胆盐浓度下稳定性最高,并具有传代稳定耐受性,可以作为微生态制剂后备菌深入研究。     

鸡源凝结芽孢杆菌的分离鉴定及耐受性分析

【目的】 试验旨在寻找1株性能稳定、环境耐受性强的凝结芽孢杆菌菌株,以在实际生产中发挥其替抗功能。【方法】 本研究采集160日龄健康海兰褐蛋鸡的粪便样本,进行细菌分离纯化,并对分离菌进行形态学特征观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析。通过绘制该菌的生长动力曲线确定其生长规律;利用耐酸、耐胆盐试验分析该菌株的耐受性;通过单因素试验对分离菌株的培养条件进行优化。【结果】 分离菌在普通培养基上长出表面粗糙、不规则的灰白色菌落,镜检为杆状、芽孢端生的革兰氏阳性菌。结合生化试验及16S rDNA基因序列分析综合鉴定该菌株为凝结芽孢杆菌,命名为NJ001。生长动力曲线表明,7~24 h为该菌株的对数生长期,24 h活菌数达到顶峰,凝结芽孢杆菌NJ001的最佳培养时间为24 h;耐受性试验结果显示,该菌株pH 3.0温育2 h存活率为59.5%,pH为4.0时存活率达到87.6%以上,对酸有较强耐受力;0.3%胆盐处理2 h存活率为54.0%,胆盐浓度升至0.5%时存活率仍有50%以上,该菌对胆盐有较强的耐受性。单因素试验结果发现,该菌的最佳培养温度为40 ℃,接种量2%,初始pH 7.0,摇床转速220 r/min。综合以上最佳培养条件,菌株活菌数可达最大值,为1.93×10⁸ CFU/mL。【结论】 所分离的菌株为具有较强耐酸耐胆盐特性的凝结芽孢杆菌,其最适生长条件易于实现;且与动物体内胃肠道环境基本吻合,具备作为微生态制剂的应用潜力。     

一株植物乳杆菌生物学特性的研究

文章探讨了植物乳杆菌BLCC2-0001在胃肠道中的耐受性及作为益生菌的功能特性。人工模拟胃肠道环境,研究植物乳杆菌的耐受情况。同时对肠道中致病性大肠杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌等的拮抗特性和安全性试验进行研究。作用4h,在pH2.5和pH3.5的酸性环境及人工胃液、肠液中的存活率皆在80%以上,在0.3%的胆盐环境中,存活率为60%左右。对致病菌的抑菌圈直径均在20mm以上。安全性试验结果表明,该株乳杆菌不会产生硝基还原酶、无溶血现象发生,能产生少量的D-乳酸。植物乳杆菌BLCC2-0001具有较强的耐受胃肠道环境的作用,能抑制病原菌的生长,可以作为动物微生态制剂的菌株使用。     

一株丁酸梭菌的鉴定及生物学特性研究

试验对分离到的菌株DL-01进行鉴定和生物学分析,为其在动物生产中的应用提供参考。通过形态学观察、生化鉴定、16SrDNA基因序列分析的方法鉴定菌株;检测高温条件芽孢的存活率,对其代谢产物、遗传稳定性进行分析,探究其对抗生素、胆盐、人工胃液、人工肠液的耐受能力以及对致病菌的拮抗能力。结果显示:此菌株为丁酸梭菌;95℃处理10 min后,芽孢存活率达到95%;菌株代谢产生多种氨基酸、维生素、酶等物质,产丁酸性能较好;连续传代30代,菌株形态不变,DNA谱带基本相同;此菌株对多种抗生素具有良好的耐受性;在猪胆盐浓度为0.35%时,菌株DL-01仍然能够生长;经过2.5 h人工胃液和人工肠液处理后,活菌数达99%以上;能抑制肠出血大肠杆菌和魏氏梭菌生长。结果表明,丁酸梭菌DL-01具有较好的遗传稳定性、抗逆性等优良特性,这些优势有利于将其应用到动物生产中。     

一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性,并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线,活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性,牛津杯法测定抑菌活性,药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明,解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4～6 h的缓慢生长期后,进入对数生长期,12～24 h为该菌的稳定生长期;在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%;pH 2.0时该菌存活率为14.14%,随着酸性的减弱,存活率逐渐上升,在pH 7.0时存活率可以达到93.85%;随着胆盐浓度增加,解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降,相同的胆盐浓度,24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用;对抗生素阿莫西林耐药。综上,解淀粉芽孢杆菌能够快速活化,对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好,对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用,对阿莫西林耐药。因此,解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。     

6株芽孢杆菌的生物学特性比较研究

以实验室分离保存的6株芽孢杆菌为材料,对其主要生物学特性进行了研究,包括产酶活力,对NaCl、牛胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性及对抗生素的敏感性。结果显示,枯草芽孢杆菌1、凝结芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌均能产生较高活性的中性蛋白酶和淀粉酶;2株枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能耐较高浓度的NaCl;枯草芽孢杆菌2、凝结、纳豆和蜡样芽孢杆菌对牛胆盐的耐受性较强;除地衣芽孢杆菌外,其他5株芽孢杆菌对胃液和肠液的耐受性较好;6株芽孢杆菌均对常用饲用抗生素敏感。结果表明,枯草1、凝结、蜡样芽孢杆菌是优良的候选益生菌菌株。     

一株肉牛源干酪乳杆菌的特性分析

为了研制优良的肉牛用乳酸菌,促进肉牛健康养殖,对前期分离自牛粪的4株干酪乳杆菌(RG-6、RG-10、RG-16、RG-17)进行抑菌活性分析、抗逆性分析和药敏试验。结果表明:在测试的4株干酪乳杆菌中,RG-6具有良好的抑菌活性; RG-6生长良好,30℃厌氧条件下培养10 h即到达稳定期; RG-6能够耐受pH值为1的强酸刺激,耐受0. 3%的胆盐和1%胰蛋白酶的刺激,即使在70℃环境中仍能存活5 min; RG-6耐药性较强,除氟苯尼考、磺胺二甲氧嘧啶和阿莫西林外,对其余15种抗生素均表现为耐药。说明RG-6具有一定的应用价值,可用于研制肉牛用乳酸菌制剂。     

猪源乳酸菌的抗逆性及益生性研究

在对猪肠道中分离到的乳酸菌的抗逆性和益生性进行研究,拟为获取可用于发酵饲料生产接种菌奠定基础。采用体外法,对筛选得到的11株乳酸菌进行耐酸、耐胆盐、抑菌、温度敏感性和耐抗生素试验检测。结果显示:11株乳酸菌中,编号为L71、L76和L104的乳酸菌株可耐受p H2.5环境,暗示其对胃酸环境有一定的耐受性;L33、L35、L37和L104菌株可耐受猪肠道的胆盐环境;L22、L24、L26、L71、L76和L96菌株发酵液上清对大肠杆菌K88、K99和鸡白痢沙门氏菌均有较好的抑制效果;L76和L96菌株对60℃温度具有一定耐受性;L71、L76和L96对抗生素最低耐受量在益生菌的测定最低限制浓度范围内。研究表明:编号为L71和L76的2株乳酸菌具有较好的抗逆性,有用作发酵饲料生产接种菌的潜力。     

5株凝结芽孢杆菌的鉴定及抗逆性分析

通过细菌形态学、生理生化特征分析,5株鉴定均为凝结芽孢杆菌。以总菌数、抑菌性、热稳定性、耐人工胃肠液、耐胆盐能力等为评价指标,比较5个凝结芽孢杆菌产品的抗逆性。结果表明,5株凝结芽孢杆菌经65℃处理30 min后,存活率均超过100%;A株抑菌性最好,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌率分别可达99.85%和101.4%,显著高于D株(P0.01)和E株(P0.01)。经过人工胃液和人工肠液处理后,菌株A和B在模拟胃液(pH 2.0)存活率较高,均在80%以上,同时这A株菌完全耐受模拟肠液(pH 7.6);A株和B株耐受胆盐浓度可达1%,其他三株的耐受胆盐浓度可达0.3%。A株较其他株凝结芽孢杆菌具有较好的益生特性,在饲料生产上具有重要的应用价值。     

山羊源益生芽胞杆菌的筛选

为获得山羊源优良益生芽胞杆菌菌株,利用刚果红染色法对26株山羊源芽胞杆菌进行产纤维素酶初筛,结合滤纸酶以及羧甲基纤维素(CMC)酶活力测定进行复筛,并对其耐酸、耐胆盐生物学特性进行研究,初步确定其益生特性,并进一步对经上述筛选出的菌株的抑菌性以及对药物的敏感性进行了测定。结果显示,从26株山羊源芽胞杆菌中初筛出4株产纤维素酶较好的芽胞杆菌,对4株芽胞杆菌产酶复筛以及对酸和胆盐的耐受性测定后,得到一株枯草芽胞杆菌,该菌株滤纸酶活为4.4U,CMC酶活为1610 U,在pH 3.0的环境中存活率大于50%,在0.3%的牛胆盐溶液中存活率高于70%,对金黄色葡萄球菌具有抑制作用,且对16种常用抗生素敏感。该株枯草芽胞杆菌X7F3可作为山羊源微生态制剂候选菌株。     

一株泡菜来源副干酪乳杆菌生物学特性及抗逆性研究

研究对从泡菜中分离的一株副干酪乳杆菌进行生长曲线测定、耐酸试验、耐猪胆盐试验、人工模拟猪胃肠道环境耐受性试验和抑菌试验等抗逆性研究。结果表明:饲用微生态制剂湖南省工程实验室从泡菜中分离得到的副干酪乳杆菌耐酸性强(pH 2.0)和耐高胆盐质量分数(质量/体积0.3%),对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌等具有较好的抑菌效果。