鸡肿瘤坏死因子-α原核表达及生物活性鉴定

为研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)免疫功能,从鸡盲肠扁桃体克隆TNF-α的CDs保守区全序列,与pGEX-6p-1载体连接构建原核表达质粒,转化大肠杆菌M109,IPTG诱导蛋白表达,经包涵体洗涤、溶解、复性、亲和柱层析获得纯化的融合蛋白,经Western-blot鉴定为鸡TNF-α融合蛋白;用CEF/VSV法和MTT法检测表明,该融合蛋白的抗病毒活性为1.2×26 U/mg,在5-6稀释度下能显著促进淋巴细胞增殖.     

牛磺鹅去氧胆酸对TGR5介导的NR8383细胞TNF-ɑ的影响

采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative,qPCR)法检测牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对TGR5介导的NR8383细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因水平的影响,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune-sorbent assay,ELISA)检测NR8383细胞中TNF-ɑ蛋白活性的变化情况。结果显示:高表达TGR5的NR8383细胞中TNF-α的mRNA表达量和蛋白活性均显著低于正常细胞组;另外,TCDCA能极显著降低LPS诱导的TNF-α基因表达量和蛋白活性(P0.01)。结果表明:TCDCA通过TGR5受体调控LPS对TNF-α基因表达及蛋白活性的诱导作用。     

肿瘤坏死因子α在动物脂肪代谢中的调控机制

肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-,αTNF-)α是由活化的单核/巨噬细胞产生的一种具有多种生物学活性的细胞因子,由140～150个氨基酸残基组成。近年来的研究发现,TNF-α在动物脂肪代谢中可降低脂蛋白脂酶(LPL)的活性,减少机体脂肪的生成;影响瘦蛋白(LP)的生成量;弱化葡萄糖转运蛋白(GLUT4)基因的表达,降低葡萄糖的吸收量;引起机体的胰岛素抗性;抑制脂肪细胞的分化,诱导脂肪细胞的调亡,从而调节机体脂肪代谢。同时,TNF-α在肥胖动物或人的脂肪组织中过量表达,也会给人和动物机体带来很多副作用。     

脂连素及其相关疾病研究进展

研究发现，脂肪不但作为一种储能组织，还作为一个活性很高的内分泌器官参与机体的能量代谢调节。脂肪组织能产生各种不同的活性蛋白分子，如纤溶酶原激活抑制物-1(PMI-1)、瘦素(1eptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及脂连素(adiponectin)等。其中，脂连素因其具有特殊功能及其与许多病理过程和疾病有关备受人们的关注。     

以雏鸡肝细胞为靶细胞检测鸡TNFα细胞毒活性方法的建立

鸡源性肿瘤坏死因子α(TNFα)样品检测,通常使用微量细胞病变法,操作繁琐费时,尽管国外有利用生物学方法测定的报道,但因需要特定的细胞系作为靶细胞[1],使鸡TNFα检测难以开展。然而,TNFα活性检测对鸡免疫、抗感染和抗肿瘤等方面的机制研究具有重要的意义,为克服靶细胞...     

肿瘤坏死因子-α对小鼠小肠类器官生长、屏障功能和肠道功能细胞的影响

【目的】研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对小肠类器官生长、紧密连接蛋白及各种功能细胞标记基因的影响,以建立小肠类器官的疾病损伤模型。【方法】取小鼠小肠,用温和细胞解离试剂(GCDR)消化液分离小鼠隐窝细胞并用肠道类器官培养基培养。选取0(对照组)、50、250、500 ng/mL TNF-α刺激小肠类器官48 h,光学显微镜下观察类器官生长情况,Edu染色示踪细胞增殖的情况,利用实时荧光定量PCR检测细胞增殖、屏障功能和肠道功能细胞标记基因mRNA表达水平。【结果】(1)与对照组相比,50和250 ng/mL TNF-α显著降低小肠类器官的出芽率(P<0.05),而对类器官形成率无影响(P>0.05);250和500 ng/mL TNF-α导致小肠类器官坏死率显著升高(P<0.05)。(2)与对照组相比,250 ng/mL TNF-α显著降低小肠类器官紧密连接蛋白Occludin mRNA表达量(P<0.05);500 ng/mL TNF-α显著提高小肠类器官紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA表达量(P<0.05)。(3)与对照组相比,50、250...     

ZD制剂对RAW264.7细胞分泌TNF-α水平及TNF-α诱导L929细胞死亡的影响

[目的]研究ZD制剂对炎症模型细胞中TNF-α含量及对TNF-α诱导小鼠成纤维细胞L929死亡的影响。[方法]通过脂多糖（LPS）刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞系来构建炎症细胞模型,使用5种不同浓度（100、10、1、0.1、0.01μg/m L）的ZD制剂进行试验,并用ELISA法检测ZD制剂干预前后细胞上清液中TNF-α浓度。通过TNF-α刺激小鼠成纤维细胞L929细胞系来构建细胞毒性模型,采用MTT法检测ZD制剂干预前后L929细胞活力。[结果]ZD制剂浓度为100、10、1、0.1μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异极显著（P〈0.01）;ZD制剂浓度为0.01μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异显著（P〈0.05）。经100、10μg/m L ZD制剂干预后的小鼠成纤维细胞L929细胞活力与TNF-α组相比显著提高。[结论]ZD制剂可以通过降低TNF-α的分泌量和降低TNF-α的生物学活性来达到抗炎的目的。     

A型魏氏梭菌α毒素Asp-56基因定点突变与结构分析

为探索A型魏氏梭菌α毒素第56位天冬氨酸(Asp-56)对其生物学活性的影响,将α毒素Asp-56密码子(GAT)定点突变成甘氨酸(Gly-56)密码子(GGT),构建了含α毒素D56G突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pM-D56G),该突变体蛋白表达量约为22.48%。α毒素和α毒素D56G突变体蛋白的二级结构主要由α螺旋和无规则卷曲组成,两者的圆二色(CD)光谱检测有微小变化。生物学活性检测结果表明,α毒素D56G突变体蛋白失去了α毒素的磷脂酶C活性,且α毒素D56G突变体蛋白免疫的小鼠能够保护1MLD的A型魏氏梭菌标准株C57-1毒素攻击。此研究为进一步研究α毒素分子结构与生物学功能的关系奠定了基础。     

武定鸡和科宝肉鸡成骨细胞矿化及TNF-α基因表达差异研究

为研究武定鸡和科宝肉鸡成骨细胞分化、矿化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达差异,试验通过提取武定鸡和科宝肉鸡骨间充质干细胞,并诱导分化为成骨细胞,检测成骨细胞分化、矿化差异及TNF-α基因表达差异。结果显示:与科宝肉鸡相比,在骨间充质干细胞诱导为成骨细胞过程中,武定鸡成骨细胞矿化能力较强,且TNF-α基因表达量显著低于科宝肉鸡。研究表明:TNF-α可通过调控成骨细胞分化来影响矿化过程,进而影响骨骼强度。可见,TNF-α基因对家鸡成骨细胞矿化起着重要的作用。     

奶山羊乳房炎及其疫苗免疫的免疫学变化

应用细胞培养技术,MTT测定法,放射免疫分析法,对正常组、乳房炎组、疫苗组、中药组、联合组奶山羊血液、脾、乳上淋巴结T、B淋巴细胞的增殖功能以及淋巴细胞IL-1、IL-6、TNF-α诱生活性的动态变化进行检测.结果,疫苗和中药可增强奶山羊血液和免疫器官的T淋巴细胞免疫功能和B细胞体液免疫功能,对淋巴细胞TNF-α、IL-1、IL-6免疫调节机能有促进作用,奶山羊在患乳房炎后其上述被检指标均降低.     

饲料用连翘叶不同提取物体外抗炎抑菌活性的比较研究

研究旨在比较饲料用连翘叶不同提取物的体外抗炎活性和抑菌活性。运用脂多糖诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7研究连翘叶水提取物、连翘叶40%乙醇提取物和连翘叶80%乙醇提取物的体外抗炎活性,并通过抑菌试验对3种连翘叶提取物进行了体外抑菌活性的比较研究。采用Griess法检测一氧化氮（NO）生成水平,酶联免疫分析法（ELISA）检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成水平。并使用纸片扩散法和微量肉汤倍比稀释法测定抑菌活性、最低抑菌浓度和最低杀菌浓度,结果表明：3种连翘叶提取物均能抑制NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的生成,抗炎活性80%乙醇提取物>40%乙醇提取物>水提取物。抑菌活性40%乙醇提取物>水提取物>80%乙醇提取物,3种连翘叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强。饲料用连翘叶乙醇提取物具有较好的体外抗炎活性和抑菌作用,可作为新型饲料添加剂开发应用。     

TNF-α的生物活性及其在肝脏损伤中的作用

早期发现TNF-α具有杀死肿瘤或抑制肿瘤增殖的作用.后来发现TNF-α具有广泛的生物活性,既可参与机体的免疫功能的调节,又在感染、组织损伤、炎症、休克等方面起重要介导作用;近年来还发现TNF-α在中枢神经系统以及许多生物因子诱导的肝损伤过程中也起重要作用.     

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与肥胖

肿瘤坏死因子 ( Tumor Necrosis Factor,TNF)包括由活化的单核 /巨噬细胞产生的TNF- α和由活化的 T淋巴细胞产生的 TNF- β两种。二者在细胞来源、相对分子量、等电点、糖含量等方面有很大差别。 TNF-α是一种具有多种生物学活性的细胞因子 ,由 1 40 - 1 5 0个氨基酸残基组成 ,其中有两个反平行β片层 ,每个β片层有 5个β折叠。它由 TNFRI和 TNFRII两种受体组成 ,二者胞内结构区的同源性极低 ( 2 7% ) ,可能启动不同的生物学反应。研究发现TNF- α是与肥胖相关的蛋白质之一 ,对脂肪代谢具有重要调节作用。TNF- α通过抑制进食、增加机体产热量 ;促进脂肪分解、抑制脂肪合成 ;诱导产生瘦素 ;引起胰岛素抑制、抑制前脂肪细胞分化 ;诱导前脂肪细胞及脂肪细胞凋亡等作用调节脂肪代谢和能量平衡。同时 ,TNF- α在肥胖动物或人的脂肪组织中过量表达 ,也会给人和动物机体带来很多副作用     

奶山羊乳房炎及其疫苗免疫的免疫学变化

应用细胞培养技术，MTT测定法，放射免疫分析法，对正常组、乳房炎组、疫苗组、中荔组、联合组奶山羊血液、脾、乳上淋巴结T、B淋巴细胞的增殖功能以及淋巴细胞IL-1、IL-6、TNF-α诱生活性的动态变化进行检测。结果，疫苗和中药可增强奶山羊血液和免疫器官的T淋巴细胞免疫功能和B细胞体液免疫功能，对淋巴细胞TNF-α、IL-1、IL-6免疫调节机能有促进作用，奶山羊在患乳房炎后其上述被检指标均降低。     

TNF-α对体外培养奶牛乳腺上皮细胞α-SMA mRNA及蛋白表达的影响

为研究重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白表达的影响,本研究采用组织块法体外培养和纯化出BMEC。以不同浓度(0、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL)重组人TNF-α作用BMEC,分别于不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h)采用实时荧光定量RT-PCR和western blot方法检测α-SMA mRNA相对表达量及其蛋白表达。结果显示,α-SMA mRNA相对表达量12 h TNF-α处理的各组及24 h,10 ng/mL处理组与对照组相比差异显著(p<0.05);随着TNF-α浓度的升高,α-SMA mRNA的相对表达量呈升高趋势;48 h和72 h处理组与对照组相比差异不显著。表明TNF-α对BMECα-SMA mRNA的表达有一定促进作用。然而,α-SMA的蛋白表达量却很低,只有24 h 10 ng/mL处理组检测到目的蛋白的表达。研究表明,外源性TNF-α能够促进BMECα-SMA mRNA和蛋白的表达。     

紫花地丁总黄酮体外抗炎活性研究

试验研究了紫花地丁总黄酮（TFV）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞活力、细胞中炎症介质含量以及相关基因表达的影响,以期探讨其体外抗炎活性的作用。试验采用MTT法筛选出TFV对小鼠RAW264.7巨噬细胞活力具有促进作用的最佳添加浓度;用酶联免疫吸附法（ELISA）检测了TFV对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞释放到细胞培养液中NO、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）含量的影响;运用实时荧光定量PCR法检测了TFV对LPS诱导的炎性小鼠RAW264.7巨噬细胞TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶2（COX-2）相对表达水平的影响;研究并分析了TFV的体外抗炎活性。试验结果表明,TFV在5~50 μg/mL浓度范围内能提高小鼠RAW264.7巨噬细胞的活力（P<0.05）;与LPS模型组比较,TFV能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量,并能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞内TNF-α、COX-2等炎症因子的mRNA表达量（P<0.05）。综上,TFV能显著下调LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子的释放量和下调TNF-α、COX-2 mRNA的表达量,说明抑制促炎性细胞因子基因的表达可能是实现其抗炎作用的原因之一。     

白细胞介素-8及其在动物疾病发生中的作用

白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)作为细胞因子,其在炎症和肿瘤性疾病的发生发展中发挥着重要作用。对其生物学功能和作用机制进行深入系统研究将为抗炎药物研发提供科学依据,为肿瘤治疗开辟新途径。作者就IL-8及其在动物疾病发生中的作用作一简要概述。     

紫花地丁总黄酮体外抗炎活性研究

试验研究了紫花地丁总黄酮(TFV)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞活力、细胞中炎症介质含量以及相关基因表达的影响,以期探讨其体外抗炎活性的作用。试验采用MTT法筛选出TFV对小鼠RAW264.7巨噬细胞活力具有促进作用的最佳添加浓度;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了TFV对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞释放到细胞培养液中NO、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)含量的影响;运用实时荧光定量PCR法检测了TFV对LPS诱导的炎性小鼠RAW264.7巨噬细胞TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)相对表达水平的影响;研究并分析了TFV的体外抗炎活性。试验结果表明,TFV在5～50μg/mL浓度范围内能提高小鼠RAW264.7巨噬细胞的活力(P0.05);与LPS模型组比较,TFV能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量,并能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞内TNF-α、COX-2等炎症因子的mRNA表达量(P0.05)。综上,TFV能显著下调LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子的释放量和下调TNF-α、COX-2 mRNA的表达量,说明抑制促炎性细胞因子基因的表达可能是实现其抗炎作用的原因之一。     

血清Leptin、sBO-R及TNF-α在猫脂肪肝综合征中的表达及临床意义

为了研究瘦素(Leptin)、可溶性瘦素受体(sBO-R)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等因子在猫脂肪肝综合征(FHL)中的作用机制,将收集的33例猫脂肪肝综合征作为试验组,并以27例健康体检猫作为对照组,检测血清中丙氨酸氨基转移酶活性(ALT)、总胆红素素(TBIL)和甘油三酯(TG)、Leptin、sBO-R、TNF-α及肝脏脂肪含量(LFC),分析LFC和TG与其他因子的相关性,经多元逐步回归建立线性方程,并建立了Leptin和TNF-α的ROC曲线。结果显示,与对照组比较,试验组血清中ALT、TBIL、TG均升高(P0.05),Leptin、TNF-α升高极为明显(P0.01),sBO-R降低(P0.05),LFC升高(9.32 vs 4.11);相关性分析显示,LFC与TG、ALT、TBIL、Leptin、TNF-α呈正相关,与sBOR呈负相关;多元逐步线性回归显示血清Leptin、TNF-α是脂肪肝和高脂血症的独立危险因素,sBO-R为脂肪肝保护因素,ROC曲线显示Leptin、TNF-α对FHL诊断的敏感性高(90.9%、81.8%),特异性强(92.6%、89.9%)。结果表明,Leptin和TNF-α与FHL密切关联,可能是导致FHL发生发展的重要原因,而且可作为FHL早期诊断的候选指标。     

大白猪肿瘤坏死因子α基因启动子区多态性及其对mRNA表达水平的影响

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)基因在机体固有免疫和炎症反应中发挥重要作用,本研究旨在分析大白猪TNF-α基因启动子区C-791T多态性及其与基因表达之间的关系,为分析TNF-α基因启动子区C-791T突变的遗传学效应提供科学依据。本试验利用PCR-SSCP方法对201头大白猪TNF-α基因启动子区C-791T位点多态性进行检测,同时利用Real-time PCR方法分析TNF-α基因C-791T位点不同基因型在大白猪11个组织中的mRNA差异表达情况。结果表明,大白猪TNF-α基因启动子区-791bp处存在碱基突变(CT),并检测到3种基因型,分别为:CC、CT和TT。TNF-α基因在断奶仔猪脾脏、肺脏、胸腺和淋巴结等免疫器官中表达量均较高;TT和CT基因型个体在11个组织中TNF-α基因表达量普遍高于CC基因型个体,且在十二指肠及空肠组织中达到差异显著性水平(P0.05)。因此,TNF-α基因启动子区C-791T突变对该基因的mRNA表达水平产生显著影响,有必要将TNF-α基因启动子区C-791T位点多态性作为提升机体肠道病原菌抗性的遗传标记进行深入研究。