稀释粉对猪精液常温保存效果的研究

为了开发猪精液常温保存新型稀释粉,通过检测精子活率、质膜完整性、顶体完整性以及超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)产生量等指标,分析常温保存稀释粉对猪精液的保存效果的影响。结果表明,在常温保存条件下,自配稀释粉保存猪精液5d时间内,精子活率平均为0.63,精子顶体完整率和质膜完整率分别达到78.4%和48.6%;SOD活力、H2O2产生量和MDA产生量分别是177.39IU/mL、86.28mmol/mL和9.36nmol/mL,可以在生产实践当中应用。     

稀释液中添加SOD对猪精液常温保存效果的影响

超氧化物歧化酶能够清除氧自由基,防止细胞老化。为了探究常温稀释液中添加不同浓度超氧化物歧化酶(SOD)对猪精液常温保存效果的影响,本研究分别在BTS、Modena基础稀释液中添加100、200、300 IU/m L和400 IU/m L的SOD,每隔24 h观察精子活率,并在常温保存3 d后检测精液中过氧化氢(H2O2)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶活性的变化。结果表明:Modena稀释液中添加200 IU/m L SOD可显著提高猪精液常温保存的活率,降低精液中MDA和H2O2含量(P0.05),增强精液中SOD活性作用(P0.05),保存4 d后活率为0.657;BTS稀释液中添加300 IU/m L的SOD,可显著提高猪精液常温保存效果,保存4 d后活率为0.653。添加的适量SOD能提高精子的保存效果,SOD过量时反而会对精子产生毒害作用。     

Sch B对猪精液常温保存效果的影响

为了研究五味子乙素(Sch B)对猪精液常温保存效果的影响,本实验设计6个猪精液常温保存稀释粉配方,在筛选出的最佳自配基础稀释粉配方中添加了0、1、5、10、15μmol/L的Sch B,通过检测精子活率、质膜完整性、顶体完整性以及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量,分析Sch B对猪精液常温保存效果的影响。结果表明:6号基础稀释粉猪精液常温保存效果最佳,有效保存时间为4d,精子活率为0.63,质膜完整率为59.33%,顶体完整率为78.29%,均显著高于其他处理组(P0.05);在6号自配基础粉中加入10μmol/L Sch B猪精液的有效保存时间为5d,精子活率达到0.61,T-AOC浓度为4.85 U/mL,显著高于其他处理组(P0.05),并使MDA浓度显著降低为1.44nmol/mL(P0.05)。因此,基础稀释粉中添加Sch B可提高猪精液常温保存品质,延长精子有效保存时间,其最佳添加量为10μmol/L。     

不同常温保存稀释液对猪精液保存效果的影响

本研究利用3种不同的常温保存稀释液对猪精液进行常温保存,测定了精子活率、有效存活时间、生存指数、pH值以及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)活性。结果表明:3号稀释液稀释后精子活率在第3天和第5天均显著高于其他2种稀释液(P<0.05);精子有效存活时间和生存指数显著高于2号稀释液(P<0.05);pH值在精液稀释后的第4天显著高于2号稀释液(P<0.05)。精子T-AOC在第3天和第4天显著高于1号稀释液(P<0.05),但与2号稀释液差异不显著(P>0.05);3种稀释液之间精子MDA变化差异不显著(P>0.05)。因此,3号稀释液对精子的保存效果最好,有利于猪精液的常温保存。     

Gln对猪精液常温保存效果的影响

L-谷氨酰胺具有增强免疫力和抗氧化等生物学作用。为了探究猪常温稀释液中添加L-谷氨酰胺(Gln)对保存效果的影响,本试验在自配基础稀释液中添加0、0.5、1、2、4、8、16 mmol/L的L-谷氨酰胺,在常温保存过程中,检测精子活率、顶体完整性、质膜完整性、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)浓度等指标,分析Gln对猪精液常温保存效果的影响。结果表明:常温保存的过程中,在基础稀释液中添加4 mmol/L的Gln,精子活率、质膜完整率和顶体完整率显著高于其他组(P0.05),保存第5天时,精子活率为59%、质膜完整率为47.05%、顶体完整率为74.40%、T-AOC浓度为4.34 IU/m L、MDA浓度为1.51 nmol/m L。因此,添加4 mmol/L的Gln能够提高猪精液常温保存效果,延长猪精液常温保存时间。     

还原型谷胱甘肽对西门塔尔牛精液低温保存效果的影响

本实验旨在探究还原型谷胱甘肽（GSH）对西门塔尔牛精液低温保存（0℃）的影响。在精液稀释液中分别添加0（对照组）、1、2、4、6 mmol/L的GSH,在0℃条件下保存24、72、120、168、216 h时检测精子活力、顶体完整率和质膜完整性等指标;保存72 h和168 h时检测精子的丙二醛（MDA）水平、三磷酸腺苷（ATP）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性。结果表明：在精液低温保存72 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组（P<0.05）;在精液低温保存168 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组与其他GSH添加组（P<0.05）,MDA水平低于其他组（P<0.05）。因此,在本实验条件下,在精液稀释液中添加4 mmol/L GSH可以有效提高精液品质和精子的抗氧化能力,延长精子的保存时间。     

不同稀释液对猪精液常温保存效果的影响

试验利用北京信邦稀释液(试验Ⅰ组)和台湾精旺稀释液(试验Ⅱ组)对猪精液进行常温保存,测定精子活率、有效存活时间、生存指数、pH值。试验结果:试验Ⅱ组稀释后第4天,精液的pH值显著高于试验Ⅰ组(P0.05),试验Ⅱ组的精液p H值始终高于试验Ⅰ组;试验Ⅱ组稀释后精子活率在第4天显著高于试验Ⅰ组(P0.05),试验Ⅱ组精子的有效存活时间与试验Ⅰ组差异不显著(P0.05)。试验结果表明,试验Ⅱ组采用的台湾精旺稀释液更有利于精液的保存,适宜大规模推广应用。     

猪精液常温保存效果观察

为研究不同保存条件对猪精液常温保存效果的影响,观察精子的活力和有效保存时间之间的关系,采用常温下对精液添加抗生素、不同精液稀释比例、光照、振荡、混入尿液等,每隔12 h 显微镜检测一次精子活力的方法,以筛选常温下猪精液保存方式。结果显示,在精液保存过程中加入抗生素时,精液有效保存时间和精子活力明显高于未加抗菌药物的稀释液,其中加入庆大霉素的保存效果最好;精液稀释比例为1∶1～1∶2时保存效果最好;光照及剧烈振荡条件下,精液活力下降很快;混入尿液很容易使精子死亡。上述研究结果表明,常温下猪精液的理想保存方式是,在保证精子密度的前提下,精液与稀释液比例为1∶1～1∶2;同时在精液稀释液中添加广谱抗生素;保存过程中应避免光照、振荡、尿液污染等的影响。     

不同浓度谷氨酰胺对常温保存猪精液质量的影响

目前,猪人工授精的精液还以液态常温保存为主,但保存时间短、质量差的问题亟需解决。本试验通过在稀释液中添加不同浓度的谷氨酰胺,检测不同保存时间的精液质量参数,来衡量谷氨酰胺对液态常温保猪存精液的影响。试验分为5组,使用改良后的Modena稀释液,分别添加不同浓度的谷氨酰胺(0 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、60 mmol/L、80 mmol/L)。试验结果表明,添加40 mmol/L谷氨酰胺的精液稀释液可以有效提高猪精液的质量并延长精子保存时间。试验结果为猪精液常温保存技术的发展提供理论依据。     

丁羟基甲苯抗猪精子氧化损伤作用

分别在稀释、离心猪精液中添加0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L丁羟基甲苯(Butylated hydroxytoluene,BHT),15℃保存,检验保存35、d后精子TMS、PMI和NAR(%)、测定MDA浓度;确定并选择最佳BHT浓度用于猪精液冷冻保存,检验解冻后TMS、PMI、NAR和Mt-MP(%)、测定MDA浓度。结果显示:BHT显著提高稀释精液、离心精液各项指标百分率(P0.05),且MDA浓度显著降低(P0.05),BHT最佳浓度分别为0.8、1.6 mmol/L;0.8 mmol/L BHT显著提高冷冻-解冻精液各项指标百分率(P0.05),且MDA浓度显著降低(P0.05)。结果表明,BHT能通过抑制精子质膜氧化损伤,提高猪精液保存效果。     

原花青素对猪精液常温保存效果的影响

为探究常温保存稀释液中添加原花青素(OPC)对猪精液保存效果的影响,本实验在经典猪精液稀释液BTS中添加0、10、20、30、40、50、60、70μg/mL OPC,检测17℃保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整性、总抗氧化能力(T-AOC)及精液丙二醛(MDA)含量等指标。结果表明:在经典猪精液稀释液BTS中添加OPC,随着添加浓度的增大,其对精子的保护作用呈先上升后下降的趋势,且添加浓度达50μg/mL时,效果最佳,可显著提高常温保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整率(P0.05);当保存至第5天时,精子活率仍为61.63%、质膜完整率为41.88%、顶体完整率为75.88%、T-AOC浓度为1.43 U/mL、MDA含量为2.37 nmol/mL。因此,在经典猪精液稀释液BTS中添加50μg/mLOPC能够提高猪精液常温保存效果,延长精液保存时间。     

添加N-乙酰半胱氨酸对猪精子常温保存的影响

为了研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对猪精子液态常温保存的影响,试验向保存液中添加不同浓度的NAC(0.5 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L、5 mmol/L),在15℃条件下保存猪精子,检测保存后的精子活率、活力和弯尾率。结果表明:在稀释液中添加1 mmol/L的NAC能显著提高精子的活率、活力、弯尾率(P0.05)。通过添加NAC可以显著提高精子的保存能力。     

稀释液中添加谷胱甘肽和透明质酸对猪精液超低温保存效果的影响

本试验在冷冻液中分别添加不同含量谷胱甘肽(GSH,1、3、5、7、9 mmol/L)和透明质酸(HA,300、600、900、1 200μg/m L)及联合添加GSH和HA,研究其对猪精液冷冻后活力、顶体完整率、体外受精胚胎卵裂率、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明,添加GSH以5 mmol/L浓度效果较好,除卵裂率与未添加GSH组无显著差异外(P>0.05),活力、顶体完整率、SOD活性及MDA含量均与未添加GSH组存在统计学差异(P<0.05);添加HA以900μg/m L组效果较好,除卵裂率与未添加HA组不存在显著差异(P>0.05),其冻后活力、顶体完整率、SOD活性及MDA含量均与未添加HA组存在统计学差异(P<0.05);联合添加GSH和HA,以添加GSH 5mmol/L和HA 900μg/m L组效果较好,且其各指标与未添加GSH和HA组均存在显著差异(P<0.05)。结果说明,冷冻液中联合添加GSH 5mmol/L和HA 900μg/m L可有效改善猪精液冷冻效果。     

安石榴苷对绵羊精液室温保存效果影响的研究

为研究安石榴苷对绵羊精液常温保存效果的影响，在以“Tris+葡萄糖+果糖”为主的绵羊精液基础稀释液中添加安石榴苷，分别配制成含不同浓度(0,10.0,12.5,15.0,17.5,20.0μmol/L)安石榴苷的稀释液后，常温条件下稀释、保存多浪羊精液，通过检测精子的活率、活力、顶体完整性、质膜完整性，以及精液中具有抗氧化性的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性，综合评价精液常温保存的效果。结果表明：15.0μmol/组精液保存72 h后，精子的活率(55.95%)、活力(42.82%)、顶体完整性(48.61%)、质膜完整性(44.40%)、CAT活性(4.61 U/mL)和SOD活性(62.70 U/mg)最高，且均显著高于对照组(P<0.05)。说明以“Tris+葡萄糖+果糖”为主的多浪羊精液基础稀释液中添加15.0μmol/L安石榴苷，能提高多浪羊常温保存效果。     

EGTA对猪精液液态保存的影响

猪精液液态保存体系中,钙离子浓度升高将降低精子活力,缩短精子体外保存时间。常用的金属螯合剂EDTA的溶解度较低,且容易发生沉淀,因此改进螯合剂对于改进猪精液保存液配方,提高猪精液液态保存质量十分重要。本研究中我们在精液液态保存液中分别添加不同浓度(1.5,3,6,12 mmol/L)的钙离子螯合剂EGTA,检测其对猪精子的活力、质膜完整性、顶体完整率、获能情况以及受精能力的影响。结果表明,精液保存液中添加EGTA能显著提高猪精子保存质量,其中添加3 mmol/L EGTA效果最好(P<0.05)。与对照组相比,添加3 mmol/L EGTA时,体外受精率和囊胚率显著提高(P<0.05)。因此,精液保存液中添加EGTA有助于提高猪精液液态保存的质量。     

两种稀释剂不同稀释倍数对猪精液保存效果的研究

为探讨课题组研制的猪精液17℃常温保存稀释剂在高倍稀释下对猪精子的保护效果,试验以BTS稀释剂为对照组,分别将原精进行1,3,5,10和15倍稀释,以精子有效存活时间内的活力、质膜完整性和顶体完整性为评价指标,研究课题组研制的稀释剂对高倍稀释的猪精液常温保存效果的影响。结果表明,配方组在5倍和10倍稀释时精液有效保存时间分别为8.77 d和8.43 d,在15倍稀释时配方组中精液有效保存时间明显下降,仅为4.56 d。而对照组中,精液最长有效保存时间为3倍稀释下的3.1 d;配方组采用10倍稀释,保存至第3天精子质膜完整率为82%,顶体完整率达87%,与对照组相比差异显著(P 0.05)。试验结论是课题组研制的稀释剂能够使猪精子耐受高倍稀释并具有较好的保护作用。     

不同浓度牛磺酸对猪精液负压条件常温保存效果的影响

【目的】 探讨负压条件下向Modena稀释剂中添加不同浓度牛磺酸对长白公猪精子常温保存质量及抗氧化能力的影响,以期为猪精液保存体系的完善提供参考。【方法】 向Modena稀释剂中分别添加浓度为0（对照组）、1、5及10 mmol/L牛磺酸,各组精液在―0.04 Mpa条件下保存11 d。于第1、3、5、7、9及11天利用计算机辅助精子分析系统（CASA）检测精子活力、活率、畸形率、平均路径速度（VAP）、曲线速度（VCL）及鞭打频率（BCF）;利用试剂盒测定精液的总抗氧化能力（T-AOC）及H₂O₂含量。【结果】 在保存1~11 d期间,3个牛磺酸组猪精子的活力及活率均显著高于对照组（P<0.05）;第11天时5 mmol/L牛磺酸组猪精子畸形率显著低于其他各组（P<0.05）;自第3天开始,1、5及10 mmol/L牛磺酸组猪精子的VAP均显著高于对照组（P<0.05）,其中以5 mmol/L牛磺酸组效果最佳;第11天时,5 mmol/L牛磺酸组猪精子的VCL、BCF均显著优于其他各组（P<0.05）;牛磺酸可显著提升猪精子的T-AOC （P<0.05）,但第11天时T-AOC较弱;第1~3天时,所有试验组间猪精子H₂O₂含量无显著差异,第5~11天时,3个牛磺酸组的H₂O₂含量均显著低于对照组（P<0.05）。【结论】 在―0.04 Mpa条件下,向Modena稀释剂中添加牛磺酸可以显著改善常温保存猪精液的质量参数与抗氧化性能,其中以5 mmol/L添加量最好,保存时间在9 d以内为宜。     

羧甲基纤维素钠对猪精液常温保存效果的影响

在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。     

对香豆酸影响猪常温保存精液品质的研究

本试验旨在探讨于猪精液基础稀释液（BTS）中添加不同浓度的对香豆酸（P-coumaric acid,PCA）对猪精液质量及抗氧化酶活性的影响。在猪常温稀释制剂中添加浓度为0、0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 g/L的PCA,利用CASA全自动精子分析仪与荧光探针技术分别在1~5 d内检测精子运动学参数与精子功能完整性;利用抗氧化试剂盒在1、3和5 d检测精子活性氧（reactive oxygen species,ROS）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。试验结果表明,在精液保存的第5天,0.09 g/L的PCA处理组与空白组相比,精子活力显著提高（P<0.05）,精子的顶体功能完整性、质膜功能完整性、线粒体功能完整性也显著升高（P<0.05）,不仅如此,0.03、0.06、0.09和0.12 g/L PCA处理可显著降低精子ROS与MDA水平,提高SOD活性（P<0.05）,其中0.09 g/L处理组相比其他组抗氧化活性效果最佳,而当添加浓度为0.15 g/L时,精子的抗氧化活性与0.09 g/L组相比显著降低（P<0.05）。综上,猪常温基础稀释液中添加PCA可改善精子常温保存品质,添加0.09 g/L效果最佳。     

稀释液中添加还原型谷胱甘肽对猪精液液态保存效果的影响

为了研究还原型谷胱甘肽对猪精液液态保存效果的影响,实验通过在稀释液中分别添加不同浓度的还原型谷胱甘肽,研究了它对猪精液液态保存后的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、DNA损伤率、体外受精卵裂率及囊胚率等影响。结果表明,向稀释液中添加1 mmol/L,5 mmol/L,10 mmol/L GSH均能显著提高精子保存质量。其中添加1 mmol/L还原型谷胱甘肽效果最好,10 mmol/L效果较差,但大部分指标仍显著高于对照组。证实了稀释液中添加还原型谷胱甘肽有助于提高液态保存猪精液的质量。