动物源性大肠杆菌的耐药性和氨基糖苷类耐药基因的检测

为调查不同动物源性大肠杆菌的耐药性,本试验对65株源于畜禽的大肠杆菌进行18种常见抗菌药的药敏试验,用PCR法检测3种氨基糖苷类耐药基因aac(3)-II、arm(A)和aac(6′)-Ib。结果显示：65株大肠杆菌中对氨基糖苷类药物链霉素耐药率最高(75.38%),其次为复方新诺明(69.23%),耐药率最低的是头孢哌酮舒巴坦(0%);耐药基因aac(3)-II、arm(A)和aac(6′)-Ib的检出率分别为29.23%、1.54%和9.23%;有51株分离菌株存在多重耐药,占总株数的78.46%。结果表明,动物源大肠杆菌对多种抗菌药具有耐药性,在氨基糖苷类耐药基因中以携带aac(3)-II为主。     

猪源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性以及耐药基因的检测

为指导临床合理用药,根据耐药表型和基因型研究耐氨基糖苷类药物猪源大肠杆菌的流行情况,采用K—B法检测大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类药物的耐药基因以明确其基因型。结果显示,60株临床分离菌中,耐氨基糖苷类抗生素菌株54株,耐药率为90％;aac（3）-Ⅰ基因PCR扩增均为阴性;aac（3）-Ⅱ基因检出阳性28例,阳性率为46．7％;aac（6’）-Ⅰ基因检出阳性54例,阳性率为90％。结果表明,耐氨基糖苷类药物的大肠杆菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅰ为主。     

犬源大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药性及4种耐药基因的检测

为调查犬源大肠杆菌氨基糖苷类药物4种耐药基因的携带情况,探讨氨基糖苷类耐药表型与耐药基因的相关性,本试验选用氨基糖苷类代表药物庆大霉素、阿米卡星、大观霉素和妥布霉素进行药敏试验,参照相关文献用已建立的检测氨基糖苷类4种主要耐药基因的PCR方法对分离鉴定的156株犬源大肠杆菌进行分子检测。随机选取4种耐药基因阳性进行克隆测序并对药敏试验结果和耐药基因检测结果进行比较分析。结果显示,犬源大肠杆菌对庆大霉素、妥布霉素、大观霉素和阿米卡星的耐药率分别为55.8%、32.7%、25.0%和20.5%;所检大肠杆菌4种耐药基因aacC2、aphA3、aadA和aacC4的检出率依次为55.8%、26.3%、23.1%和9.0%。两株携带4种耐药基因,8株携带了3种耐药基因,携带两种或两种以上耐药基因菌株数占总菌株的40.4%(63/156)。序列分析结果表明,犬源大肠杆菌扩增产物与GenBank中的相应序列同源性较高。犬源大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因以aacC2为主,耐药率与耐药基因的符合率基本呈正相关。     

禽源沙门菌氨基糖苷类耐药表型及耐药基因研究

为调查禽源沙门菌临床分离株对耐药基因的携带情况,探讨氨基糖苷类药物的耐药表型与耐药基因的相关性。试验选用氨基糖苷类代表药物阿米卡星等7种抗菌药物采用K-B法对135株沙门菌进行药敏试验,应用PCR技术进行了7种代表性耐药性基因的检测。结果显示:135株分离株对链霉素、阿米卡星、新霉素、卡那霉素、庆大霉素、大观霉素、妥布霉素的耐药率分别为88.9%、83.0%、54.8%、74.8%、78.6%、66.7%、65.9%;共检测出6中耐药基因,add A1、aph(3′)-Ⅱa、aac C2、ant(3′′)-Ⅰa、arm A、rmt B,阳性率分别为57.8%、17.0%、45.2%、31.9%、16.3%、30.4%;所检沙门菌携带2种或2种以上的菌株占63.7%(86/135),有2株同时携带6种耐药基因;耐药性与耐药基因的检出率基本一致,但无绝对相关性。结果表明江苏地区沙门菌对氨基糖苷类药物耐药现象非常严重,且耐药基因广泛存在。     

40株动物源性大肠杆菌耐药性分析及氨基糖苷修饰酶耐药基因的检测

为调查动物源性致病性大肠杆菌氨基糖苷修饰酶耐药基因的携带情况,探讨耐药基因与氨基糖苷类抗生素表型的相关性,对40株源于畜禽的大肠杆菌常用氨基糖苷类抗生素进行药敏试验,用PCR法检测耐药基因aac(3)-Ⅱ、arm A、aac(6')-Ⅰb。结果表明:40株大肠杆菌在所用氨基糖苷类药物中对卡那霉素的耐药率最高,达57.5%(23/40),其次是链霉素与庆大霉素,耐药率分别为45.0%(18/40)和40.0%(16/40);耐药基因aac(3)-Ⅱ的检出率为17.5%(7/40),其中有6株的耐药表型都为对庆大霉素耐药,arm A的检出率为0,aac(6')-Ⅰb的检出率为2.5%(1/40)。     

广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析

对广西规模化猪场分离的120株猪源大肠杆菌进行了头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和酰胺醇类药物耐药表型检测,并通过PCR检测菌株的β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)、bla_(CTX-M))、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、oqxA、oqxB)、氨基糖苷类耐药基因(aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)和酰胺醇类耐药基因(floR)携带情况。耐药性检测结果显示,猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星具有高敏感率(74.0%),而耐药率最高为四环素类84.2%,酰胺醇类为70.8%,氟喹诺酮类为68.9%,氨基糖苷类为49.4%,大环内酯类为43.3%,最低为头孢菌素类31.4%。猪源大肠杆菌最低对1种药物耐药,最高对18种药物耐药,111株为多重耐药菌,以11耐(15株)、8耐(13株)和7耐(12株)为主,共有82种耐药谱型。耐药基因检测结果显示,8个耐药基因的阳性率均≥50.0%,其中阳性率最高为bla_(TEM)基因(91.7%),最低为aac(6′)-Ib-cr基因(50.0%),共存在53种基因组合类型,主要为bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+ermB+floR(14株,11.7%)和bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+ermB+floR(13株,10.8%)。耐药基因和耐药表型相关性分析结果显示,bla_(TEM)和bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢氨苄耐药情况极显著相关(P0.01),bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢拉啶和头孢曲松耐药情况极显著相关(P0.01),qnrA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星耐药极显著相关(P0.01),aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对庆大霉素和卡那霉素耐药极显著相关(P0.01),floR基因与大肠杆菌对氟苯尼考耐药情况极显著相关(P0.01)。本研究结果表明广西规模化猪场猪源大肠杆菌仅对极少数抗菌药物具有较高敏感率,多重耐药情况严重,具有丰富的耐药谱型,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,所携带的耐药基因与其耐药表型具有一定的相关性。     

云南楚雄规模化猪场仔猪大肠杆菌HPI基因调查及耐药性分析

为研究规模化猪场大肠杆菌高致病性毒力岛(high pathogenicity island,HPI)基因流行特征及其耐药性,本试验从云南省楚雄州地方猪场采集粪便及肛门拭子,应用麦康凯培养基、生化鉴定管及PCR扩增对大肠杆菌进行分离鉴定,分别通过PCR反应、动物回归试验及纸片扩散法研究分离菌株的HPI基因携带情况、致病性及耐药性。结果显示,共分离获得78株大肠杆菌,分离率为83.87%,HPI基因携带率高达96.15%;24 h内,HPI阳性菌株致小鼠死亡率100%,HPI阴性菌株致小鼠死亡率75%,对照组无小鼠死亡,表明HPI基因可提高小鼠死亡率;药敏试验结果显示,分离菌株对四环素、氨苄西林、复方新诺明、卡那霉素、庆大霉素、头孢他啶及阿米卡星的耐药率分别为88.46%、84.62%、73.08%、53.85%、38.46%、19.23%和5.13%,对多黏菌素B不耐药。本试验结果可为防治大肠杆菌相关疾病提供一定的理论依据。     

2012-2014徐州地区禽源大肠杆菌耐药性监测

为了掌握徐州地区大肠杆菌耐药菌株的情况和耐药程度,指导临床合理用药,笔者2012-2014年对徐州地区禽源大肠杆菌进行耐药监测,从临床分离鉴定出86株禽源大肠杆菌,采用纸片扩散法测定86株分离菌株对15种抗菌药物的敏感性。结果表明,禽源大肠杆菌分离株多重耐药现象严重,其中11耐和12耐的菌株所占比例最大,分别为25.58%和23.25%;分离的菌株对头孢类抗生素,特别是阿莫西林耐药率最高,达到100%,对氨基糖苷类药物则耐药率相对较低,粘杆菌素耐药率最低,仅为2.3%。     

贵州省猪源大肠杆菌16SrRNA甲基化酶基因调查与转移情况的研究

对贵州省规模化养猪场的167株大肠杆菌进行16SrRNA甲基化酶基因的流行及转移情况研究,为氨基糖类药物在兽医临床上的合理使用提供理论参考。采用微量肉汤稀释法测定药物敏感性,聚合酶链反应(PCR,Polymerase Chain Reaction)方法检测16SrRNA甲基化酶基因的携带和转移。结果显示,阿米卡星、卡那霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素的平均耐药率分别为17.5%、67.8%、80.9%、77.67%和75.33%。检测到rmt B 8株,检测率为4.8%,未检测到arm A。由此可知,rmt B基因可转移至沙门氏菌和大肠杆菌,转移之后的菌株对大部分抗菌药物耐药水平大幅提高。     

动物源性大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性及其耐药基因的检测

旨在调查大肠杆菌3种氨基糖苷类耐药基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb和arm A的携带情况,探究耐药基因与氨基糖苷类药物耐药表型的相关性。采用K-B纸片法探究70株大肠杆菌对6种氨基糖苷类药物的耐药性;采用PCR法检测全部菌株氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb及16S rRNA甲基化酶基因arm A。结果显示:70株大肠杆菌中对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、妥布霉素、新霉素的耐药率依次是62.9%、42.9%、37.1%、35.7%和21.4%,耐药率最低的是阿米卡星为15.7%。70株大肠杆菌中检测出携带1个或多个耐药基因的菌株占总菌株数的32.9%,钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb的检出率分别是18.6%和15.7%,介导高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因arm A的检出率为4.3%,有1株大肠杆菌同时携带3种耐药基因。研究表明江苏南京、扬州、镇江、泰州、盐城等地区的大肠杆菌具有很严重的耐药性,其相关的耐药基因检出率与其所具有的耐药性呈正相关,部分耐药严重的菌株未检测到这3种耐药基因,提示可能存在其他耐药机制。     

河南省部分规模化奶牛场奶牛乳房炎源大肠杆菌耐药性分析与耐药基因检测

为了解规模化奶牛场乳房炎源大肠杆菌耐药现状和耐药基因分布情况,试验对采自河南省部分规模化奶牛场感染乳房炎奶牛的852份乳汁样本进行大肠杆菌的分离鉴定与16S rRNA基因PCR鉴定,对分离的大肠杆菌菌株进行药敏试验及耐药基因检测。结果表明：共分离鉴定224株大肠杆菌,分离率为26.29%。分离菌株对11种抗生素均有不同程度耐药性,其中对恩诺沙星、氟苯尼考、环丙沙星、四环素、阿莫西林、阿米卡星耐药比较严重,耐药率为63.39%～82.14%;对头孢他啶、头孢曲松耐药率相对较低,分别为22.32%、27.67%;对亚胺培南最敏感,耐药率为0。耐3种及以上抗生素菌株有193株,占86.16%。对不同奶牛场的85株大肠杆菌分离株进行耐药基因检测,共检测到11种耐药基因,未检出耐药基因tetM、bla_VIM和bla_NDM。酰胺醇类耐药基因floR携带率最高(为61.18%),喹诺酮类耐药基因oqxB(42.35%)、qnrS(44.71%)携带率和四环素类耐药基因tetA(30.59%)、tetB(38.82%)携带率相对较高,多重耐药基因检出率为51...     

云南楚雄规模化猪场仔猪大肠杆菌HPI基因调查及耐药性分析

为研究规模化猪场大肠杆菌高致病性毒力岛（high pathogenicity island,HPI）基因流行特征及其耐药性,本试验从云南省楚雄州地方猪场采集粪便及肛门拭子,应用麦康凯培养基、生化鉴定管及PCR扩增对大肠杆菌进行分离鉴定,分别通过PCR反应、动物回归试验及纸片扩散法研究分离菌株的HPI基因携带情况、致病性及耐药性。结果显示,共分离获得78株大肠杆菌,分离率为83.87%,HPI基因携带率高达96.15%;24 h内,HPI阳性菌株致小鼠死亡率100%,HPI阴性菌株致小鼠死亡率75%,对照组无小鼠死亡,表明HPI基因可提高小鼠死亡率;药敏试验结果显示,分离菌株对四环素、氨苄西林、复方新诺明、卡那霉素、庆大霉素、头孢他啶及阿米卡星的耐药率分别为88.46%、84.62%、73.08%、53.85%、38.46%、19.23%和5.13%,对多黏菌素B不耐药。本试验结果可为防治大肠杆菌相关疾病提供一定的理论依据。     

致初生仔猪腹泻大肠埃希氏菌氨基糖苷类耐药性检测及AAC(3)-Ⅱ基因序列分析

从1995年至2006年分离鉴定的菌株中选取173株致初生仔猪腹泻大肠杆菌,进行氨基糖苷类药物的药敏试验;根据耐氨基糖苷类药物主要钝化酶—氨基糖苷乙酰转移酶(aminoglycoside acetyltransferases,AAC)的基因序列,设计一对引物,PCR扩增耐药基因片段,探讨AAC基因的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药性的相关性。对上述分离株中90个耐庆大霉素的大肠杆菌分离株进行检测,结果表明aac(3)-Ⅱ为这些分离株的主要钝化酶,检出64株,检出率为71.1%;对其中的20株PCR产物进行测序,结果表明对耐庆大霉素而不耐丁胺卡那霉素菌株aac(3)-Ⅱ基因保守区为213位A、232位C、527位A;对应的推导氨基酸序列中71位为赖氨酸、78位为脯氨酸和176位为谷氨酸。两者均耐药的菌株aac(3)-Ⅱ基因保守区具213位G、232位T、527位G,对应的推导氨基酸序列中71位为谷氨酸、78位为亮氨酸、176位为谷氨酰胺。     

中药提取物恢复耐药大肠杆菌对氨基糖苷类药物敏感性的研究

为考察五倍子、黄芩、黄连、艾叶、鱼腥草5种中药提取物恢复耐药大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素敏感性的作用,采用1/2 MIC中药提取物对耐药菌株进行耐药性消除,通过影印培养法筛选出耐药性消除菌落,观察耐药消除率和消除子MIC值变化,并检测质粒及耐药基因rmt B的携带情况。结果表明:5种中药提取物对耐药大肠杆菌均有一定的抑制作用,耐药菌经1/2 MIC作用48 h后,五倍子、黄芩、黄连、艾叶、鱼腥草的耐药消除率分别为20.67%、21.33%、17.33%、16.67%、9.33%;消除子对庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、阿米卡量(AMK)、新霉素(NEO)的MIC值均由高度耐药(512μg/m L)降至敏感(2~4μg/m L);5种中药提取物不能使耐药菌质粒丢失,却能导致耐药基因rmt B丢失。5种中药提取物可能是通过使高度耐氨基糖苷类药物的细菌丢失耐药主效基因来恢复对药物敏感性的。     

猪源大肠埃希菌药敏试验及耐药基因检测

为调查云南省某规模化猪场大肠埃希菌(E.coli)对氨基糖苷类药物的耐药性及耐药基因aadA1和aph(3′)的携带情况,采用K-B(Kirby-Bauer)法检测51株E.coli对6种氨基糖苷类抗生素的耐药性,同时对2个目的基因片段aph(3′)和aadA1进行PCR扩增。结果显示,51株猪E.coli对链霉素、新霉素、妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素的耐药率分别为49.0%、35.3%、47.1%、43.1%、15.7%及70.6%;利用PCR技术检测氨基糖苷类药物的相关耐药基因,其阳性检出率依次为aph(3′)(86.27%)和aadA1(54.90%)。结果表明,云南楚雄某猪场撒坝猪E.coli耐药性普遍存在,对氨基糖苷类抗生素存在多重耐药,其中以二重耐药为主,2个耐药基因检出率偏高。因此,猪场应该针对性选择用药,规范使用抗生素,从而延缓和减少耐药性的产生,促进社会公共卫生的发展。     

鸡源气载大肠杆菌生物膜形成与耐药相关性研究

为了探讨鸡舍环境中大肠杆菌生物膜形成与耐药性及消毒剂抗性之间的关系,试验采用96孔微量板法对鸡舍空气中分离鉴定的114株大肠杆菌测定其体外生物膜的形成能力和耐药情况。结果表明:114株气载大肠杆菌生物膜阳性率为34.21%,以弱阳性为主;形成生物膜的菌株呈现多重耐药性,生物膜阳性菌株对β-内酰胺类、氨基糖苷类药物的耐药率均高于阴性菌株,阳性菌株的消毒剂耐药性也高于阴性菌株。说明气载大肠杆菌生物膜形成和β-内酰胺类、氨基糖苷类药物耐药率及消毒剂的耐药性具有相关性。     

羊源大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型及耐药基因的检测

无菌采集绵羊粪便,采用细菌常规分离鉴定结合16S rRNA PCR扩增的方法分离鉴定大肠杆菌,应用K-B药敏纸片的方法研究分离的大肠杆菌耐药表型及PCR方法检测全部菌株氨基糖苷类耐药基因AadB、AadA1、Aac(3′)-Ⅱ、Aac(6′)-Ⅰb和Aph(3′)-Ⅰ的携带情况。结果显示,共分离100株羊肠道正常菌群大肠杆菌,分离株对链霉素的耐药率最高,为24%,其次是新霉素、丁胺卡那、庆大霉素和卡那霉素,分别为21%,14%,13%,7%;AadA1和Aph(3′)-Ⅰ耐药基因的检出率分别为98%和89%,未检测到AadB、Aac(3′)-Ⅱ和Aac(6′)-Ⅰb基因。结果表明,新疆石河子市羊肠道正常菌群大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素具有较为广泛的耐药性,耐药基因主要以AadA1和Aph(3′)-Ⅰ为主,本试验为羊致病性大肠杆菌耐药机理的进一步研究提供有用数据。     

2型猪链球菌河南株的生物学特性研究

从河南省豫东某规模化猪场保育猪群发生疫情的病死猪脑组织分离得到一株细菌,通过对该株细菌纯化鉴定、血清型分型鉴定、致病性试验及毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测等一系列研究,结果表明,该株细菌鉴定为2型猪链球菌,毒力较强,为携带胞外因子epf基因、溶血素sly基因、溶菌酶释放蛋白mrp基因的3个毒力基因的强毒力菌株;该菌株对头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林、青霉素、复方新诺明、左氟沙星、氧氟沙星等β-内酰胺类、磺胺类和喹诺酮类药物敏感;对氨基糖苷类、四环素类和大环内酯类药物高度耐药,携带有β-内酰胺类耐药基因blaTEM和氨基糖苷类耐药基因strB。该研究对临床防控猪链球菌病具有重要意义。     

95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查

为调查我国规模化猪场大肠杆菌细菌耐药性及其氨基糖苷类药物耐药基因的流行状况,采用K—B（Kirby-Bauer）法检测2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种抗生素的耐药性。结果表明：仅有多黏菌素B（85．6％）、头孢噻肟（85．3％）、阿米卡星（84．8％）和大观霉素（65．0％）相对敏感。480株大肠杆菌以多重耐药菌株为主,其中13、14、15、16和17重耐药较多,并且有26株18重耐药,14株19重耐药。采用WHONET5．4软件分析大肠杆菌耐药性,对阿米卡星、头孢噻肟和多黏菌素B耐药的猪场相对较少,分别是29、26和24个。采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因,耐药基因检出率分别是aadA1（65．89％）、aaC2（52．35％）、aaC4（12．91％）和aphA3（10．95％）。耐药基因型检出率较高的是aadA1／aaC2（29．61％）、aadA1（18．04％）。Excel软件统计相关耐药基因的猪场分布,表明耐药基因型aadA1／aaC2（43）、aadA1／aaC2／aaC4（20）和aadA1／aaC2／aaC4／aphA3（20）在猪场分布较普遍。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型与耐药基因型符合率较高的是阿米卡星（68．39％）。本研究表明猪肠道内常在大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性,也成为耐药基因的储存库,对猪场环境中耐药基因在致病菌和非致病菌间传播发挥重要作用,能够作为检测细菌耐药性的指示菌。