进口动物产品中莱克多巴胺残留的快速检测

应用经验证可靠的ELISA方法,对进口猪产品进行莱克多巴胺残留快速筛选检测,对ELISA检测阳性的样品采用色谱质谱联用分析方法进行确证检测。1330份猪产品的检测结果显示,采用ELISA方法检出阳性率达11．4％（152／1330）;对ELISA阳性样品采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC—MS／MS）或气相色谱-质谱方法（GC—MS）确证,阳性率达90．8％（138／152）。检测工作表明,综合运用快速筛选检验技术与确证检测技术可实现快速准确检测动物产品中莱克多巴胺残留,提高进出境检验工作效率。     

高效液相色谱-串联质谱法研究猪毛发中克仑特罗和莱克多巴胺的残留及代谢规律

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时检测猪毛发中克仑特罗和莱克多巴胺残留的方法。猪毛发经1 mol/L氢氧化钠溶液水解、乙酸乙酯萃取、MCX固相萃取柱净化,流动相溶解后用HPLC-MS/MS进行检测。克仑特罗在1.9～463.2 ng/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 0);回收率为83.3%～86.6%,相对标准偏差为6.7%～9.2%;检出限为0.3μg/kg,定量限为0.8μg/kg。莱克多巴胺在2.8～562.9 ng/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 2);回收率为83.4%～88.4%,相对标准偏差为7.2%～9.6%;检出限为0.4μg/kg,定量限为1.2μg/kg。应用该方法研究了克仑特罗、莱克多巴胺在猪毛发中的代谢规律并进行了猪毛发样品检测。结果喂药7 d至停药21 d猪毛发中均检出克仑特罗、莱克多巴胺残留;检测猪毛发样品25份,1份样品检出克仑特罗,残留量为58.68μg/kg。     

液相色谱-串联质谱法测定猪肉中3种β-受体激动剂类药物残留

试验建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测猪肉中的克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺残留的方法,并对方法进行了优化。样品经0.2 mol/L的乙酸铵缓冲液提取,加入β-葡萄糖醛苷酶进行酶解,提取液经PCX柱进行净化,液相色谱-串联质谱进行测定,内标法定量。结果显示,猪肉中3种β-受体激动剂残留浓度在0.2~10 μg/kg范围线性关系良好,线性相关系数分别为0.9997、0.9999和0.9993,定量检出限均为0.5 μg/kg,回收率分别为93.57%~96.63%、92.35%~96.01%和91.66%~96.54%,该方法灵敏度高、重现性强,适用于猪肉组织样品中克仑特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的确证检测。     

动物组织中莱克多巴胺残留胶体金免疫层析和LC-MS/MS检测方法的比较

采用胶体金试纸卡法和LC-MS/MS法分别对猪肉、猪肝样品进行检测,鉴定胶体金试纸卡法和LC-MS/MS法检测结果的符合率。结果表明：应用胶体金试纸卡法检测样品中莱克多巴胺的最低检测限为5.0μg/kg,LC-MS/MS检测方法的检测限为0.25μg/kg;2种方法的检测结果一致。胶体金试纸卡法特异性较高,样品前处理简单,检测快速,成本低,适用于动物组织中莱克多巴胺残留的定性筛查;LC-MS/MS灵敏度高,适合于阳性样品的确证和精确定量。     

气相色谱-质谱法同时测定猪肝中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺残留

猪肝用乙酸乙酯、盐酸溶液提取后，经SCX固相萃取柱净化、BSTFA衍生化，定容后用气相色谱-质谱（GC／MS）外标法测定。测定结果表明：采用该方法，猪肝中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的检出限分别为0．3、1．0ng／g。盐酸克伦特罗在3．0～300ng／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为85．6％；莱克多巴胺在10～1000ng／mL范围内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为76．6％。该方法简便可靠、干扰小、灵敏度高，可用作猪肝中克伦特罗和莱克多巴胺残留的同时测定。     

深圳市龙岗区生猪尿样中莱克多巴胺残留调查与分析

莱克多巴胺属于β-兴奋剂,在动物产品中残留量过高会危害人类健康,本试验采用酶联免疫法检测龙岗区屠宰生猪尿样中莱克多巴胺的残留,经检验辖区生猪102份样品全为阴性,非辖区生猪102份样品,6份阳性,阳性率达5.9%,分析并建议加强对莱克多巴胺的监管.     

4种市售莱克多巴胺检测试剂盒的质量评价

<正>莱克多巴胺的残留检测目前常用的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用及酶联免疫检测法等,试验旨在通过对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒质量评价与检测研究,为莱克多巴胺监测试剂盒的使用提供科学的参考数据。     

“瘦肉精”现场快速检测的应用及分析

使用"瘦肉精"快速检测卡,对深圳市某定点屠宰场待宰猪、牛、羊进行"瘦肉精"现场快速检测,用盐酸克伦特罗检测卡检测猪尿82258份、用莱克多巴胺检测卡检测猪尿82258份、用沙丁胺醇检测卡检测猪尿82258份,用盐酸克伦特罗检测卡检测牛尿20561份、用莱克多巴胺检测卡检测牛尿20561份、用沙丁胺醇检测卡检测20561份,用盐酸克伦特罗检测卡检测羊尿6443份、用莱克多巴胺检测卡检测羊尿6443份、用沙丁胺醇检测卡检测羊尿6443份。检测结果:盐酸克伦特罗快速检测为阳性的猪尿有3份、牛尿96份;莱克多巴胺快速检测为阳性的猪尿有2份;沙丁胺醇快速检测为阳性的牛尿12份。对现场快速检测结果为阳性的尿样送第三方检测机构使用液相色谱-串联质谱法进行复检确证,确证结果:盐酸克伦特罗检测卡假阳性率为6%,莱克多巴胺检测卡假阳性率为0,沙丁胺醇检测卡假阳性率为8%。     

高效液相色谱-四极杆质谱联用测定猪尿液中菜克多巴胺残留

采用自动固相萃取装置和Agilent HP1100高效液相色谱-四极杆质谱联用仪，优化质谱分析条件，建立猪尿中莱克多巴胺残留检测方法。方法的线性范围为0．010～0．200μg／mL，相对标准偏差在3．4％～5．8％之间，回收率在74．5％～94．2％之间，具有较好的准确度和精密度。     

加速溶剂萃取-固相萃取-气相色谱-质谱法测定饲料中三聚氰胺残留

研究旨在建立一种饲料中三聚氰胺残留测定的加速溶剂萃取-固相萃取-气相色谱-质谱方法。饲料样品经加速溶剂萃取仪提取,固相萃取净化后,气相色谱-质谱法(GC-MS)测定。筛选并优化了饲料中三聚氰胺残留的提取试剂、提取方法,确定了加速溶剂萃取仪工作条件,筛选了高效、适用的色谱柱,并确定了色谱、质谱条件。结果表明,加速溶剂萃取方法对阳性样品的提取效果显著优于超声萃取法,选用甲醇水溶液(V V=1 4)替代腐蚀性较强的10%三氯乙酸溶液,萃取效果好且不易腐蚀加速溶剂萃取仪,HP-5MS色谱柱分离效果优于DB-35MS色谱柱。采用本方法,提取效率高,且方法简便、快速,能满足饲料中三聚氰胺残留检测的需要,显著优于NY/T 1372—2007《饲料中三聚氰胺的测定》标准中采用的超声萃取法。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测猪尿中20种β-受体激动剂残留

建立了猪尿中吡布特罗、西马特罗、特步他林等20种β-受体激动剂残留检测的超高效液相色谱一串联质谱方法。猪尿样品经酶解后,调节pH值至碱性,用叔丁醇和叔丁基甲醚（6＋4,V／V）萃取,MCX柱净化,以0．1％甲酸乙腈溶液和0．1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。同位素内标法和外标法定量。20种β-受体激动剂在系列浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数1．2均大于0．99;20种药物在猪尿中的检测限为0．25μg/L,定量限为0．5μg／L。从0．5、1和5μg／L三个添加浓度检测结果可以看出,20种药物的回收率为75．7％～110．7％,批内批间相对杯准偏差均小于20％。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

牛奶中粘菌素和杆菌肽残留的固相萃取超高效液相色谱-串联质谱法测定

建立了牛奶中粘菌素和杆菌肽药物残留的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱测定方法,样品用4%三氯乙酸乙腈溶液提取,经乙醚除脂,HLB固相萃取柱净化,相色谱-串联质谱法分析,外标法定量。结果表明：粘菌素和杆菌肽在20~2 000μg/L浓度范围内呈现良好线性,R2均大于0.998;方法检出限为5μg/kg,定量限为10μg/kg;粘菌素和杆菌肽分别在10~100μg/kg和10~1 000μg/kg浓度添加范围内的平均回收率为84%~110%,批内、批间RSD均小于20%。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等优点,能够满足牛奶中其残留检测有关法规的要求。     

水产品中氨基糖苷类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法研究

建立了高效液相色谱一串联质谱方法测定水产品中链霉素、双氢链霉素、新霉素、庆大霉素和卡那霉素5种氨基糖苷类抗生素的检测方法。样品中的氨基糖苷类抗生素用磷酸缓冲溶液提取液提取后,经固相萃取进行净化,改进了前处理方法,并对液相和质谱的条件进行了优化。通过实际样品的添加回收试验,方法的定量下限（S／N=10）为10．0μg,／kg。三个添加水平分别为10．0、20．0和50．0μg／kg时,龙虾、鲴鱼的加标回收率均在60％一110％,日内相对标准偏差不超过15．0％。结果表明,该方法简单、灵敏、特异性强,适用于水产品中氨基糖苷类药物残留的检测和确证。     

Technical note: a monoclonal antibody-based immunoassay for determination of ractopamine in swine feeds

An ELISA was developed for routine screening of ractopamine in swine feeds. Swine feed samples were extracted and purified, and the aqueous portion of the extract was analyzed for ractopamine using ELISA and confirmed by HPLC. For swine complex feeds containing ractopamine at 2.5 to 40 mg/kg, the average recoveries ranged from 73.1 to 86.5% by ELISA and 81.9 to 98.2% by HPLC. For the swine supplement containing ractopamine at 50 to 400 mg/kg, the average recoveries were 105.5 to 111.4% by ELISA and 89.1 to 92.9% by HPLC. The limit of detection was 0.24 microg/g by ELISA and 0.48 microg/g by HPLC, respectively. Results from the swine complex feeds (P = 0.009) and the supplement (P = 0.005) using ELISA and HPLC were not highly correlated. The ELISA was more sensitive and rapid and less expensive than the HPLC method and could be used for ractopamine screening in swine feeds before confirmation and quantification by other methods, such as HPLC.     

不同解离方法对莱克多巴胺猪尿阳性样品的提取效果研究

采用同位素内标法和高效液相-串联质谱法对猪尿莱克多巴胺阳性样品进行三种不同解离处理方法比较试验。结果表明,三种方法差异明显,β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶在37℃酶解16 h效果最好,在60℃酶解2 h效果次之,0.1%高氯酸酸解提取效果最差。     

LC-MS/MS在硝基呋喃类兽药残留检测中的应用

综述了目前采用高效液相色谱/串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定硝基呋喃类兽药代谢物呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因残留分析的检测现状、最低检测限以及国内外利用同位素内标法使用LC-MS/MS测定硝基呋喃类兽药残留的检测现状及其达到的最低检测限,并阐明了其应用对我国食品安全体系健康发展的重要意义。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立一种敏感、特异、快速的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV N蛋白,亲和层析纯化后作为包被抗原,通过对各反应条件优化选择,建立了PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法,并进行了交叉反应和重复性试验,以及同类成品试剂盒间的应用效果对比试验。最终确定了抗原包被最佳浓度为2 μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,血清及酶标二抗孵育时间均为30 min,显色时间为10 min,检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒等5种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该ELISA检测方法批内和批间重复性的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒效果比较显示符合率为94.7%。本研究建立的间接ELISA方法将为猪群感染野毒PRRSV后的快速诊断及流行病学调查提供一种简便易行、快速高效的血清学抗体检测方法。     

Establishment and Application of an Indirect ELISA with Recombinant N Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

To establish a sensitive,specific and efficient method of antibody detection for porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV),PRRSV N protein was expressed through prokaryotic expression system and purified by affinity chromatography to act as a coating antigen.Then an indirect ELISA detection method for serum PRRSV antibody was finally set up after the optimization of reaction conditions.Besides,the research also involved cross reaction,repeated experiments,and comparison with other ELISA kits.It was determined that the optimum concentration of coating antigen was 2 μg/mL and that the dilution ratio for serum was 1:100,with 30 min of incubation and 10 min of chromogenic reaction.With this method,positive serum samples of five common swine pathogens,including classical swine fever virus（CSFV),porcine circovirus（PCV）and porcine pseudorabies virus（PRV）and so on,were tested,and the results were negative.Both intra-assay and inter-assay coefficients of variation were below 10%,and the comparison with commercial ELISA kits indicated that its accuracy was 94.7%.So this indirect ELISA,which had been established in this research,could provide a rapid diagnosis for swine infected by wild PRRSV and applied in epidemiological investigation,as a convenient and efficient serological antibody detection method.