黄曲霉毒素M1胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的黄曲霉毒素M1试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为0.5ng/mL,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测.     

定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡的研制

为研制定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡,在硝酸纤维素膜上预包被黄曲霉毒素M1全抗原作为检测线,在硝酸纤维素膜上预包被羊抗鼠二抗作为质控线.将抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体用胶体金标记作为金标垫.将样品垫、金标垫、预包被黄曲霉毒素M1的硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在PVC板上,切割成4 mm宽的试纸条,将试纸条装入塑料卡壳中扣紧组装成检测卡.样本中残留的黄曲霉毒素M1与硝酸纤维素膜上的检测线共同竞争胶体金标记的黄曲霉毒素M1抗体,检测线的颜色深浅与其残留物黄曲霉毒素M1呈负相关,从而判定样品中黄曲霉毒素M1的含量.结果表明,检测卡的检测限为0.5μg/L,黄曲霉毒素M1检测卡对黄曲霉毒素M1的交叉反应率为100％,而与同族的其他物质的交叉反应率小于5％,与不同族的其他物质的交叉反应率小于1％.假阳性率小于5％,假阴性率为0％,密封好的检测卡常温下储存,保质期18个月.本研究为快速准确地测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留提供了物质基础.     

定性测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的高灵敏度检测卡的研制

试验研制定性测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的高灵敏度检测卡。在硝酸纤维素膜上预包被黄曲霉毒素总量全抗原作为检测线,预包被羊抗鼠二抗作为质控线。将抗黄曲霉毒素总量单克隆抗体用胶体金标记作为金标垫。将样品垫、金标垫、预包被的硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在PVC板上,切割成4 mm宽的试纸条,将试纸条装入塑料卡壳中扣紧组装成检测卡。样本中残留的黄曲霉毒素总量与硝酸纤维素膜上的检测线共同竞争胶体金标记的黄曲霉毒素总量抗体,检测线的颜色深浅与其残留物黄曲霉毒素总量呈负相关,从而判定样品中黄曲霉毒素总量的含量。结果表明:检测卡的检测限为10~30μg/kg,黄曲霉毒素总量检测卡对黄曲霉毒素B1的交叉反应率为100%,而与同族的其他物质的交叉反应率大于30%,与不同族的其他物质的交叉反应率小于1%。假阳性率小于5%,假阴性率为0%,密封好的检测卡常温下储存,保质期18个月。因此,本研究的定性测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的高灵敏度检测卡,可快速准确地应用于羊饲料中黄曲霉毒素总量残留的定性检测,为快速准确地测定羊饲料中黄曲霉毒素总量残留提供了依据。     

胶体金试纸条半定量检测鸡蛋中磺胺嘧啶残留

采用竞争反应模式建立了鸡蛋中磺胺嘧啶(SD)残留的胶体金试纸条半定量检测方法。该试纸条由吸样材料、玻璃纤维、硝酸纤维素膜、吸水材料组成。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金标记SD单克隆抗体;SD竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成胶体金试纸条。该试纸条在15min内可完成对SD残留的半定量检测,读条系统判定灵敏度为5μg/L,肉眼判定检测限为10μg/L,与其他磺胺类药物无交叉反应,在鸡蛋中的回收率为71%~96.7%;用试纸条与ELISA对来自动物试验的52份鸡蛋样品进行对比检测,以10、100ng/g为cutoff值,两者阳性(大于100ng/g)符合率为100%,弱阳性(10~100ng/g)符合率为72.7%,阴性(小于10ng/g)符合率为84.2%,两者总符合率为94.2%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E₂）残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E₂的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E₂兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E₂类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL,抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中E₂检测限为10 μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E₂胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E₂残留。     

黄曲霉毒素B1免疫层析检测方法的研究

以柠檬酸三钠为还原剂,制备了20nm胶体金颗粒,以此胶体金标记纯化的单抗4G6,喷于玻璃纤维上,AFBl蛋白偶联物和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条。结果：组装的试纸条特异性好,与AF类似物无交叉反应,对AFBl标准品最低检测限为3μg／L,检测时间约为10min,批内和批间重复性为100％,假阳性率和假阴性率均为0。操作简便,成本很低,适于AFBl的现场快速检测。在制备了单克隆抗体的基础上,应用胶体金免疫层析技术,建立了食品中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFBl）快速检测方法。     

胶体金免疫层析法检测谷物中的黄曲霉毒素B1

采用胶体金免疫层析法检测谷物中的黄曲霉毒素B1,谷物样品经提取后,用胶体金免疫层析试纸条法对其进行黄曲霉毒素B1的测定,并与高效液相色谱法进行比较。结果表明:胶体金免疫层析试纸条法与高效液相色谱法的相符率可达90%以上,胶体金免疫层析试纸条法操作简单、快速、方便,可以应用于谷物中的黄曲霉毒素B1的现场快速检测。     

黄曲霉毒素B_1胶体金快速定量检测试剂盒的研发

本研究旨在应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测谷物和饲料中黄曲霉毒素B_1含量的胶体金快速定量检测试剂盒。该试剂盒以胶体金标记高特异性单抗,与偶联抗原进行正交试验,确定适宜条件,同时通过与对照线和试验线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,对样本中黄曲霉毒素B_1含量进行定量检测。结果表明,黄曲霉毒素B1胶体金快速定量检测试剂盒检测方法简便、快速、稳定性好,且可得出具体数据,避免了人肉眼观察的差异;与常见霉菌毒素无交叉反应,样品检测结果与高效液相色谱法检测结果的相对误差在20%以内。由此可见,本试验研制的黄曲霉毒素B_1胶体金快速定量检测试剂盒可用于谷物和饲料中黄曲霉毒素B_1含量的快速定量检测。     

呕吐毒素残留快速检测试纸条的研制

为研制一种用于检测牛奶中呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）残留的快速检测试纸条,试验以人工合成抗原DON-OVA和羊抗鼠二抗为原料,包被硝酸纤维素膜;以抗DON单克隆抗体为原料,制备金标抗体,并冻干保存于反应板微孔中,最终制备出可用于检测牛奶中DON残留的胶体金快速检测试纸条。结果显示,该检测试纸条检测限为100 μg/L,重复性、特异性均较好,可用于检测牛奶中DON残留。     

胶体金试纸条法和液相色谱-串联质谱法检测牛奶中四环素类药物残留比较

采用胶体金试纸条与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）两种方法检测牛奶中残留的四环素类药物。结果表明：胶体金试纸条的检测限为四环素40μg/L、强力霉素40μg/L、金霉素40μg/L、土霉素80μg/L;LC-MS/MS法在牛奶中四环素、强力霉素、金霉素、土霉素的检测限为50μg/L。采用两种方法对实际样品检测,检测结果一致。与液相色谱-串联质谱法相比,胶体金试纸条具有操作简便、快速、直观的特点,可作为筛选法对样品进行定性筛查,LC-MS/MS法进行阳性样品的确证和精确定量。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中氟喹诺酮类药物残留

利用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体制备了氟喹诺酮类胶体金免疫检测试纸条.该试纸条对牛奶中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星检测,检测限为20μg/L;对依诺沙星、恶喹酸检测,检测限为40μg/L.检测时间为5min.与三聚氰胺、磺胺类药物、氯霉素、大环内酯类药物、氨基糖苷类药物、四环素类药物在500μg/L浓度时,不发生交叉反应.试纸条的检测结果与仪器检测结果一致,重复性较好,在4℃条件下可以保存12个月.本研究制备的氟喹诺酮类药物残留检测试纸条可用于牛奶中11种氟喹诺酮类药物残留的检测.     

林可霉素胶体金快速检测试纸条的研制

本文利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中林可霉素的试纸条,经过测试,该试纸条的检测限为20μg/L,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0,该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

酶联免疫吸附和胶体金技术对黄曲霉毒素M1检测的结合验证

[目的]为准确完成生牛乳中黄曲霉毒素M₁检测。[方法]对比分析酶标仪、胶体金读数仪检测生牛乳中黄曲霉毒素M₁的处理过程和检测数据。[结果]发现2种方法检验操作过程各有优劣,检测结果能满足不同需求。酶标仪可用于半定量检测,并进行精准检测和半定量复核。胶体金读数仪适合快速定性筛查。[结论]2种方法可配合使用,相互补充,灵活运用设备优势,高效完成检测需求。     

荧光微球免疫层析法快速检测鸡饲料中喹乙醇的含量

为更灵敏地进行全价鸡饲料中喹乙醇(OLA)含量的快速检测,本研究将新型标记物荧光微球与喹乙醇单克隆抗体偶联,以该复合物为检测试剂制备荧光微球免疫层析试纸条,在肉眼检测的同时,将该装置与荧光微球定量侧向层析读数仪联合使用,可进行全价鸡饲料中喹乙醇含量的定量快速检测。研究结果证明,饲料中喹乙醇的定性和定量检测限分别为100μg/kg和0.51μg/kg,IC_(50)值为1.89 ng/m L,定量检测回收率为78.71%~90.83%。该试纸条特异性强、准确性高,保存期长。定量检测只需18 min左右,肉眼检测需38 min左右,与相同抗原和抗体制备的胶体金试纸条相比,该方法可大大提高灵敏度。     

应用胶体金免疫层析法检测动物组织中呋喃西林代谢物的残留

本文应用胶体金免疫层析法检测动物组织中残留的呋喃西林代谢物。结果表明,试纸条检测限为1.0μg/kg,假阳性率小于5%,假阴性率为0;对其他药物无交叉反应,特异性较好;对实际样品检测结果与LC-MS/MS法检测结果一致。可见胶体金试纸条法具有操作简便、快速、直观的特点,可作为筛选法对样品进行现场快速筛查。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中氟喹诺酮类药物残留

利用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体制备了氟喹诺酮类胶体金免疫检测试纸条。该试纸条对牛奶中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星检测限为20g／L。对依诺沙星、恶喹酸检测限为40g／L,检测时间5min,与三聚氰胺、磺胺类药物、氯霉素、大环内酯类药物、氨基糖苷类药物、四环素类药物在500g／L浓度时,不发生交叉反应。试纸条的检测结果与仪器检测结果一致,重复性较好,在4℃条件下可以保存12个月,所以该研究制备的氟喹诺酮类药物残留检测试纸条可用于牛奶中11种氟喹诺酮类药物残留。     

牛奶中庆大霉素胶体金试纸条检测方法的研究

采用胶体金免疫层析法检测牛奶中庆大霉素残留。制备得到了庆大霉素半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫原和包被原,用免疫原制备特异性单克隆抗体,建立了一种简单、快速和高通量的检测牛奶中庆大霉素残留量的胶体金免疫层析法。试纸条对牛奶样品的检测限为20μg/L,假阳性率为0,假阴性率为0,重复性较好,牛奶样品可直接检测,检测时间只需5min,适合在基层抽检、乳品企业质控、原料奶站现场大量筛查使用。     

交体金免疫层析法快速检测牛奶中氟喹诺酮类药物残留

利用胶体金标记的抗氟喹诺酮类单克隆抗体制备了氟喹诺酮类胶体金免疫检测试纸条。该试纸条对牛奶中恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星检测检测限为20ug／L;对依诺沙星、恶喹酸检测检测限为40ug／L,检测检测时间5min：与三聚氰胺、磺胺类药物、氯霉素、大环内酯类药物、氨基糖苷类药物、四环素类药物在500μg／L浓度时,不发生交叉反应。试纸条的检测结果与仪器检测结果一致,重复性较好,在4℃条件下可以保存12个月,所以本研究制备的氟喹诺酮类药物残留检测试纸条可用于牛奶中11种氟喹诺酮类药物残留的检测。     

牛奶中恩诺沙星和环丙沙星检测试纸的研制及性能测定

应用胶体金免疫层析技术建立了恩诺沙星和环丙沙星快速检测试纸,并对试纸条的检测限、特异性和稳定性等参数进行了确定。结果表明,该试纸条对牛奶样本的检测限为50μg/L,能够特异性地检测恩诺沙星和环丙沙星,与液相色谱-串联质谱方法检测的阴性样本符合率为97．8％。该试纸条在2℃～8℃或室温可保存12个月,可应用于恩诺沙星在牛奶中的快速筛查现场检测。     

牛奶中磺胺类药物免疫胶体金试纸条的制备

本研究将磺胺二甲嘧啶与载体蛋白偶联形成完全抗原,与混合磺胺类药物单克隆抗体反应制备试剂条。通过抗原抗体之间的免疫反应,采用胶体金检测方法,制备用于检测牛奶中磺胺类药物的试纸条,检测灵敏度最低可达100μg/kg,该检测限满足欧盟及我国对磺胺类药物检测的需求,且能够实现牛奶样品中多种磺胺类药物的现场快速检测。