小分子化合物单克隆抗体的制备及其在动物医学领域的应用

农药、兽药、重金属、生物毒素等残留物质的痕量检测在医学诊断、食品安全、环境监测等领域均具有重要意义，其中基于抗原-抗体特异性识别的免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便快捷等优点，但如何获得小分子化合物的特异性抗体是研制免疫分析技术的关键。作者介绍了基于杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的方法，分析了影响杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的因素，然后综述了小分子化合物单克隆抗体在兽药残留、药物开发、环境保护等动物医学领域的应用，最后展望了小分子化合物单克隆抗体生产和应用的发展趋势，为小分子化合物单克隆抗体的制备与应用相关研究提供指导。     

骆驼天然单域重链抗体库的构建与鉴定

构建骆驼非免疫噬菌体抗体库,完成抗体库的鉴定。从未经免疫的健康骆驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA后,特异性扩增骆驼重链抗体可变区(VHH)片段,将其与噬菌粒载体pCANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠埃希菌TG1后获得VHH抗体基因库,并分析其库容量及多样性。结果表明,经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与莱克多巴胺人工抗原特异性结合的噬菌体展示纳米抗体。构建的骆驼天然重链单域抗体库的库容量为107,多样性良好,独立克隆所占比例为90%,筛选出针对莱克多巴胺人工抗原的噬菌体颗粒。已成功构建骆驼天然噬菌体重链抗体库,并筛选出抗莱克多巴胺的噬菌体颗粒,为抗莱克多巴胺纳米抗体的表达和莱克多巴胺的免疫学检测奠定基础,并为后续淘选针对特定抗原的单域重链抗体奠定了基础。     

卵黄抗体的概念及作用

抗体是机体受到外来抗原物质刺激后,机体免疫系统细胞产生的可以特异性地识别和结合外来抗原的一类球蛋白。其作用是特异的识别,结合外来抗原物质,使之失活。具有特异性和针对性,无毒、无副作用,已广泛用于动物和人疾病诊断及防治中。卵黄抗体是禽类经免疫后所产卵的卵黄内含有的特异性抗体。研究证明,卵黄抗体是特异性抗体最方便、最廉价的来源。主要作用:免疫诊断和免疫检测用于植物和脊椎动物致病性病毒、细菌、包虫、酶、免疫球蛋白、受体等方面的诊断和特性研究。免疫预防和治疗在已患病个体体内对病原微生物有特异性的结合和灭活作用,…     

基因工程小分子抗体及其在动物疾病研究中的应用

利用基因工程方法构建的小分子抗体,不仅具备亲本抗体可与抗原特异性结合的特征,更因其分子量小、组织穿透性强、免疫源性低、血液清除快、可经济方便地生产等优点在疾病的诊断和治疗中凸显出重要价值。文章对基因工程小分子抗体结构、抗体功能、在动物疾病研究中的应用等方面的进展情况进行了简要综述。     

卵黄抗体在防治动物疾病中的应用

抗体（免疫球蛋白，Ig）是机体受到外来抗原物质刺激后．机体免疫系统细胞产生的可特异性地识别和结合外来抗原并使之失活的一类球蛋白。其作用是特异的识别，结合外来抗原物质，使之失活。鸡（或者禽类）经特定抗原免疫后，可产生相应的特异性抗体。并不断储存于卵黄中，这种抗体称为卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk，IgY），它是卵黄中唯一的免疫球蛋白，具有特异性和针对性。无毒副作用．广泛用于畜禽疾病的诊断与防治。     

单链抗体在兽医上的应用前景

抗原刺激动物免疫系统产生抗体,抗体识别抗原的部位在其重链和轻链的可变区.抗体是机体防御系统的重要分子,用来识别和清除外来入侵物.为了尽可能的与各种外来物发生作用,免疫系统需要无数种特异性的抗体分子.     

纳米抗体在口蹄疫防治中的研究进展

口蹄疫作为一种急性、热性和高度传染性疫病,目前尚缺乏长期有效且能完全抑制其病原的药物或疫苗。纳米抗体是一种新型基因工程抗体,具有生产成本低、与抗原亲和力高、特异性强、相对分子质量小等优点,且结构独特,因而成为对抗病毒的抗体之一,被用于某些病毒性疾病的预防及治疗。本文从纳米抗体的结构与特性、在口蹄疫诊断中的应用、在中和口蹄疫病毒中的作用以及在口蹄疫治疗中的展望等方面进行综述,探索其作为“探针”来诊断疾病的能力,以及将药物传递到机体内部,作为免疫抑制剂或治疗药物来中和病毒毒力的能力,以期为纳米抗体用于口蹄疫预防提供研发基础及创新思路。     

免疫学检测技术在食品安全中的应用

免疫分析技术是利用抗原与抗体的特异性结合反应为基础的分析技术,具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、检测成本低、安全可靠等优点,在食品安全检测中有着良好的应用前景。     

单个B细胞抗体制备技术研究进展

单克隆抗体在疾病预防、诊断和治疗方面具有重要意义，尤其在免疫机制研究方面具有突出贡献。随着单克隆抗体制备技术的发展，单个B细胞抗体制备技术成为新一代快速制备单克隆抗体的方法。该技术利用每个B细胞仅可产生一种特异性抗体的特性，直接筛选出分泌特异性抗体的B细胞，对其表达抗体重链和轻链的基因进行克隆和体外表达，从而获得特异性单克隆抗体。相较传统抗体制备技术，该技术具有快速、高效、产量高等优点，且表达的抗体具有天然构象，不仅可用于病原微生物相关抗原的抗体开发、病毒跨种传播机制等研究，还在抗肿瘤治疗、抗自身免疫病等方面发挥重要作用。本文主要对单个B细胞抗体制备过程和应用现状进行综述，以期为单克隆抗体制备技术的发展和完善提供参考，促进其更好地应用于相关领域。     

卵黄抗体在动物疫病防治中的应用

抗体（Antibody）是机体受到外来抗原物质刺激后，免疫系统细胞产生的可以特异性地识别和结合外来抗原并使之失活的一类球蛋白。抗体的主要作用是与抗原（包括外来的和自身的）相结合，从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物．中和它们所释放的毒素或清除某些自身抗原，使机体保持平衡。禽类经特定抗原免疫后，可产生相应的特异性抗体，并不断储存于卵黄中．这种抗体称为卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk，IgY），它是卵黄中唯一的免疫球蛋白，具有特异性和针对性．无毒副作用，可以广泛用于人类和畜禽疾病的诊断与防治。     

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白纳米抗体的筛选及反应原性检测

本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3(P80)非结构蛋白的纳米抗体。用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞。通过噬菌体展示技术构建羊驼重链抗体可变区噬菌体展示文库。经过连续3次吸附-洗脱-扩增的生物筛淘,从中挑选出与BVDV-NS3蛋白结合的噬菌体。对经菌液PCR、琼脂糖凝胶电泳鉴定到的单域抗体(VHH)克隆进行基因测序和同源性比对。用ELISA方法验证筛选出的纳米抗体的反应原性,找到与BVDV-NS3蛋白亲和力高的纳米抗体。结果表明,获得插入率为92.8%、库容为1.84×1014 CFU/mL的噬菌体展示文库。ELISA结果和氨基酸序列分析显示,成功得到1条与BVDV-NS3蛋白具有良好反应性且与VHH同源性较高的纳米抗体序列。本研究利用大肠杆菌成功表达BVDV-NS3抗原蛋白,建立BVDV纳米抗体噬菌体展示文库,筛选到针对BVDV重要抗原蛋白相应的纳米抗体且与VHH同源性较高。试验结果为牛病毒性腹泻/黏膜病的防控、诊断、治疗及纳米抗体药物的研制提供参考。     

纳米抗体在家畜传染病防治中应用的研究进展

随着社会经济水平的提高,人们对动物性食品的需求量显著扩大,对其安全性的要求也越来越严格。因此,家畜疾病的科学防控就显得尤为重要。目前,我国家畜疾病尤其是传染病的防控效果并不理想,仍需要不断开发和探索新的防控产品和防控策略。纳米抗体是最小的功能性抗原结合片段,和传统抗体相比,其具有分子量小、结构简单、稳定性高、易于基因改造、抗原特异性好、组织穿透力强等优点。纳米抗体源于骆驼科动物,作为一种新型抗体,在动物疾病防治技术中的研究和应用正逐步增加。本文重点综述纳米抗体在家畜传染病中的应用和研究进展,并结合发展趋势预测未来的研究重点。     

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白纳米抗体的筛选及反应原性检测

本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）NS3（P80）非结构蛋白的纳米抗体。用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞。通过噬菌体展示技术构建羊驼重链抗体可变区噬菌体展示文库。经过连续3次吸附-洗脱-扩增的生物筛淘,从中挑选出与BVDV-NS3蛋白结合的噬菌体。对经菌液PCR、琼脂糖凝胶电泳鉴定到的单域抗体（VHH）克隆进行基因测序和同源性比对。用ELISA方法验证筛选出的纳米抗体的反应原性,找到与BVDV-NS3蛋白亲和力高的纳米抗体。结果表明,获得插入率为92.8%、库容为1.84×10¹⁴ CFU/mL的噬菌体展示文库。ELISA结果和氨基酸序列分析显示,成功得到1条与BVDV-NS3蛋白具有良好反应性且与VHH同源性较高的纳米抗体序列。本研究利用大肠杆菌成功表达BVDV-NS3抗原蛋白,建立BVDV纳米抗体噬菌体展示文库,筛选到针对BVDV重要抗原蛋白相应的纳米抗体且与VHH同源性较高。试验结果为牛病毒性腹泻/黏膜病的防控、诊断、治疗及纳米抗体药物的研制提供参考。     

猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定

为构建猪圆环病毒2型(PCV2)特异性纳米抗体文库,并对其库容和多样性进行鉴定分析,使用PCV2全病毒灭活疫苗免疫羊驼,经四次免疫后采血分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,通过RT-PCR反转录合成cDNA;根据羊驼重链抗体基因序列设计特异性引物,通过巢式PCR扩增羊驼单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)基因片段vhh,并将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,构建pCANTAB- vhh重组质粒;通过电穿孔法将重组质粒导入E. coli TG1获得抗PCV2特异性纳米抗体基因文库。文库菌梯度稀释后计数单克隆菌落数,并通过菌液PCR鉴定重组菌阳性率,计算抗体文库库容量;对PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,分析抗体文库多样性。结果显示,构建的PCV2特异性纳米抗体文库重组菌阳性率为92.0%,库容量为2.75×10¹⁰ CFU/mL;测序后序列比对分析结果表明,纳米抗体文库包含的基因序列具有丰富的多样性。本研究成功构建了PCV2特异性纳米抗体文库,且文库质量满足后续试验要求,为进一步获得针对PCV2抗原的纳米抗体奠定了基础。     

Engineered cross‐reacting nanobodies simplify comparative oncology between humans and dogs

Antibodies cross‐reacting with homologue antigens in different species would be essential reagents for the development of comparative oncology studies. In comparison with conventional immunoglobulin Gs, recombinant nanobodies (single‐domain variable regions of heavy‐chain only antibodies of Camelidae origin) can be easily isolated in vitro and engineered into a variety of reagents with optimized characteristics for different research and clinical applications. We recovered an anti‐human epidermal growth factor receptor 2 (anti‐HER2) nanobody from a naïve llama library by direct panning on whole cells and expressed it fused to Fc and green fluorescent protein. These immunoreagents were assessed by flow cytometry and immunofluorescence with both human and canine cells overexpressing HER2 and its canine homologue dog epidermal growth factor receptor 2. The reported data illustrate the potential of using this class of antibodies in comparative oncology and suggest some development perspectives enabled by in vitro panning of pre‐immune nanobody libraries.     

Cross-reactivity of monoclonal antibodies to bovine immunoglobulins with immunoglobulins of other species.

Monoclonal antibodies (Mabs) to bovine immunoglobulin heavy chain of the four major isotypes gamma 1, gamma 2, alpha, mu and the light chains (combined kappa and lambda) were produced and found to cross-react in enzyme-linked immunoassay (ELISA) with immunoglobulins of some other animal species despite the discrete specificity associated with an antibody derived from a single clone. This cross-reactivity, particularly amongst ruminants, could be utilized in serological testing for the diagnosis of disease in these species. For example, Mabs produced against bovine immunoglobulin light chain cross-react with bison immunoglobulin light chain and were used successfully in serological testing as the secondary detection antibody in an indirect ELISA for the diagnosis of Brucella abortus in bison herds in north-western Canada.     

胶体金免疫层析技术在动物病毒性传染病诊断中的应用

自胶体金标记技术问世以来,已在妊娠检测、传染病、毒品、食品安全和兽医等领域得到了广泛的应用.就兽医领域而言,已应用在动物寄生虫、细菌、病毒以及兽药残留检测等方面.论文总结了胶体金免疫层析技术的基本原理和常见的检测抗原、抗体的方法,对胶体金免疫层析技术在动物病毒抗原和抗体检测中的应用进行了详细的介绍,并对该技术在动物病毒...     

核酸适体及其在疫病诊断上的应用

核酸适体是指采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。鉴于适体特有的亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等特点,其被广泛应用于分析化学、基因调控、蛋白质组学和新药研发等领域。在疫病的检测方面,核酸适体逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已初步应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种检测技术平台,并具有良好的敏感性和特异性,显示出了良好的应用前景。本文就适体技术及其在疫病诊断中的应用进展作一综述。     

Novel insight into antibody diversification from cattle

The bovine preimmune repertoire develops in the absence of maternal antibodies due to the placental barrier formed by syndesmochorial type of placenta. The limited germline sequence diversity, both at the heavy and light chain loci, imposes constraints on generation of combinatorial diversity in cattle. The cattle, thus, must employ other strategies for antibody diversification. Analysis of VDJ rearrangements in adult cattle have led identification of generation of large IgM antibody molecules that may have an exceptionally long CDR3H region (up to 61 amino acids). The IgM antibodies with an exceptionally long CDR3H are indeed functional as some of these recognize structurally dissimilar antigens. The antibody diversification in cattle involves generation of an exceptionally long CDR3H in addition to point somatic mutations.