新疆部分地区梅迪维斯纳病毒感染的血清学调查

旨在了解新疆地区梅迪维斯纳病的流行现状和特点，本研究于2017—2019年从新疆阿克苏、阿勒泰、巴州、昌吉、哈密、石河子和伊宁收集2 647份羊血清样品，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行梅迪维斯纳病抗体检测，对不同地区、品种、性别来源绵羊的梅迪维斯纳病抗体阳性率进行统计分析。结果显示，阿克苏、阿勒泰、巴州、昌吉、哈密、石河子和伊宁梅迪维斯纳病抗体阳性率分别为28.95%（121/418）、0.67%（5/751）、2.50%（2/80）、4.91%（8/163）、1.14%（3/264）、1.22%（1/82）和17.10%（152/889）；其中，阿勒泰羊、和田羊、哈萨克羊、美利奴羊、萨福克羊、小尾寒羊的梅迪维斯纳病抗体阳性率分别为0.35%（1/288）、1.14%（3/264）、22.87%（231/1 010）、13.86%（42/303）、1.85%（13/702）和2.50%（2/80）；新疆本土品种羊与引进品种羊血清梅迪维斯纳病抗体阳性率分别为0.79%（8/1 015）、1.58%（15/947）；公羊与母羊梅迪维斯纳病抗体阳性率分别为3.59%（34/946）、15.17%（258/1 701）。本研究结果分析表明，需要对梅迪维斯纳病进行早期检疫，及时发现并淘汰病羊，改善饲养管理条件，这对促进羊产业健康发展具有重要意义。     

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白纳米抗体的筛选及反应原性检测

本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3(P80)非结构蛋白的纳米抗体。用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞。通过噬菌体展示技术构建羊驼重链抗体可变区噬菌体展示文库。经过连续3次吸附-洗脱-扩增的生物筛淘,从中挑选出与BVDV-NS3蛋白结合的噬菌体。对经菌液PCR、琼脂糖凝胶电泳鉴定到的单域抗体(VHH)克隆进行基因测序和同源性比对。用ELISA方法验证筛选出的纳米抗体的反应原性,找到与BVDV-NS3蛋白亲和力高的纳米抗体。结果表明,获得插入率为92.8%、库容为1.84×1014 CFU/mL的噬菌体展示文库。ELISA结果和氨基酸序列分析显示,成功得到1条与BVDV-NS3蛋白具有良好反应性且与VHH同源性较高的纳米抗体序列。本研究利用大肠杆菌成功表达BVDV-NS3抗原蛋白,建立BVDV纳米抗体噬菌体展示文库,筛选到针对BVDV重要抗原蛋白相应的纳米抗体且与VHH同源性较高。试验结果为牛病毒性腹泻/黏膜病的防控、诊断、治疗及纳米抗体药物的研制提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白纳米抗体的筛选及反应原性检测

本研究旨在获得高效特异性的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）NS3（P80）非结构蛋白的纳米抗体。用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,测得抗体效价后分离全血中的淋巴细胞。通过噬菌体展示技术构建羊驼重链抗体可变区噬菌体展示文库。经过连续3次吸附-洗脱-扩增的生物筛淘,从中挑选出与BVDV-NS3蛋白结合的噬菌体。对经菌液PCR、琼脂糖凝胶电泳鉴定到的单域抗体（VHH）克隆进行基因测序和同源性比对。用ELISA方法验证筛选出的纳米抗体的反应原性,找到与BVDV-NS3蛋白亲和力高的纳米抗体。结果表明,获得插入率为92.8%、库容为1.84×10¹⁴ CFU/mL的噬菌体展示文库。ELISA结果和氨基酸序列分析显示,成功得到1条与BVDV-NS3蛋白具有良好反应性且与VHH同源性较高的纳米抗体序列。本研究利用大肠杆菌成功表达BVDV-NS3抗原蛋白,建立BVDV纳米抗体噬菌体展示文库,筛选到针对BVDV重要抗原蛋白相应的纳米抗体且与VHH同源性较高。试验结果为牛病毒性腹泻/黏膜病的防控、诊断、治疗及纳米抗体药物的研制提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒NS5A蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

为防控牛病毒性腹泻的流行，淘选得到抗BVDV-NS5A的纳米抗体序列，并探究其结合活性。通过重组质粒pET30a-NS5A诱导表达并纯化蛋白，免疫羊驼，获得重组质粒pCANTAB 5E-VHH,构建了一个初始的抗BVDV-NS5A纳米抗体展示文库。利用3轮固相亲和筛选，对筛选后的单克隆抗体通过ELISA验证其特异性与结合力并测序、分析。构建出具有较好多样性的噬菌体展示文库，测得库容为5.3×10⁷ CFU/mL,插入率73.9%。通过评价和分析显示，得到20株不同氨基酸序列的纳米抗体，其中7株与NS5A蛋白具有较好反应性。针对抗BVDV-NS5A蛋白淘选纳米抗体，并证明得到的纳米抗体有较好的结合力。研究结果有望用于研发BVDV诊断试剂盒、抗BVDV的候选药物，同时也为后续BVDV的致病机制研究奠定了基础。