羊传染性脓疱皮炎弱毒苗耐热保护剂初步优化筛选试验研究

试验以羊传染性脓疱皮炎弱毒活疫苗为对象,依据冻干保护剂的保护功能,对耐热保护剂的组成、混合比例进行了初步筛选。通过反复试验,对其物理性状观察、水分含量测定、冻干前后病毒损失量、经37℃处理、25℃保存后病毒损失量等指标的比较进行筛选,优选出了符合要求的A3、A6、C4三个耐热保护剂配方。试验结果表明,使用保护剂的羊口疮疫苗在37℃保存20 d,病毒含量下降0.5~0.7个滴度,常规疫苗下降2.3个滴度;25℃保存60d,病毒含量下降0.3~0.6个滴度,常规疫苗下降2.5个滴度。从而证明了羊orf耐热活疫苗耐热效果优于常规疫苗。     

猪繁殖与呼吸综合征糖玻璃活疫苗制备及其耐热性能的初步研究

采用蔗糖、胰蛋白胨等成分配伍的耐热保护剂处方T28C-5,对猪繁殖与呼吸终审合征病毒(PRRSV)进行了真空梯度干燥,获得性状为干燥致密的白色泡沫状疫苗。采用扫描电镜对PRRS泡沫疫苗和传统的冻干商品疫苗进行了形貌分析,发现泡沫疫苗呈现糖玻璃样,而冻干疫苗呈现疏松孔道样。DSC测定结果表明,泡沫疫苗具有较高的Tg,为57.45℃。干燥的疫苗在37℃保存4个月,病毒效价损失≤1.0 Lg;25℃保存5个月,病毒滴度损失仍0.8 Lg;自然环境温度下保存190 d(历尽夏季、秋季、冬季),病毒滴度损失仍0.6 Lg。将37℃、25℃及4℃下保存3个月的泡沫干燥疫苗免疫20日龄仔猪,免后2周ELISA抗体水平合格且与商品苗趋势相当。试验结果表明泡沫干燥疫苗具有卓越的耐热性能。     

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗耐热保护剂筛选和优化

应用冻干制品加速热稳定试验,测试7组冻干保护剂配方对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（LaSota株＋H120株）的耐热保护效果。试验筛选出用于鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂,使用该保护剂的疫苗表现为37℃保存10d,病毒含量下降0．4个滴度,常规疫苗下降2～2．4个滴度;25℃保存30d,病毒含量下降0．4～0．6个滴度,常规疫苗下降1．8～2．6个滴度。证明此保护剂具有良好的耐热效果。     

羊传染性脓疱皮炎弱毒苗耐热保护剂的筛选优化

旨在筛选出羊传染性脓疱皮炎弱毒苗的最佳耐热保护剂。通过初步筛选,选出符合本试验设计要求的3组保护剂A3、A6、C4,以羊传染性脓疱皮炎弱毒为对象,以保存环境、保存期长短、病毒损失量为参数,采用单因子试验对3组耐热保护剂进行优化,优选出对羊传染性脓疱皮炎弱毒苗耐热保护效果最好、且经济实用的耐热保护剂A6组。试验结果显示,使用A6保护剂的羊传染性脓疱皮炎疫苗在37℃保存3周,病毒含量下降0.4个滴度,常规疫苗下降2.4个滴度;25℃保存60 d,病毒含量下降0.3个滴度,常规疫苗下降2.2个滴度;4℃保存9个月,病毒含量下降0.4个滴度,常规疫苗下降3.8个滴度,说明A6可作为羊传染性脓疱皮炎弱毒苗良好的耐热保护剂。     

羊传染性脓疱病毒耐热冻干保护剂筛选及冻干曲线优化

采用冻干试验筛选出保护剂基础配方,再通过Plackett-Burman设计法筛选主要保护剂基质,然后通过Box-Behnken响应面分析法对羊传染性脓疱病毒(ORFV)耐热保护剂配方进一步优化,用冻干试验进一步验证筛选出1种针对ORFV保护效果最好的耐热冻干保护剂作为疫苗用候选配方。同时,依据前期试验获得的活疫苗冻干曲线,通过进一步优化,获得疫苗最佳冻干曲线。利用该冻干工艺冻干的疫苗,保护剂的保护率可达95.3%,且疫苗各项指标均达到《中华人民共和国兽用生物制品规程》要求。经37℃保存7,15,30d病毒滴度分别下降0.46,0.70,1.00;2~8℃保存3,6,12,24个月病毒滴度分别下降0.10,0.10,0.40,0.60,证明此配方制备的疫苗具有良好的热稳定性。本试验解决了ORFV细胞弱毒疫苗仅能在低温条件下保存和运输的瓶颈技术问题,使疫苗的储存、运输更为方便。     

鸡痘耐热保护剂活疫苗的研究

选择不同基质组成保护剂与鸡痘抗原进行冻干试验，试制一种适宜鸡痘弱毒株的耐热冻干保护剂。应用耐热冻干保护剂和专用的冻干曲线，制成鸡痘耐热保护剂活疫苗，经37℃保存10d的耐老化试验，每羽份病毒含量下降0．2—0．4个滴度；疫苗在2—8℃保存24个月后，每羽份病毒含量下降0．2-0．4个滴度，且均≥10^3.0EID50／羽，具有良好的热稳定性。19万羽的田间试验证明，鸡痘耐热保护剂活疫苗安全、有效。     

鸡传染性支气管炎耐热活疫苗的研究

应用鸡传染性支气管炎病毒(H52株)与不同耐热保护剂配方和冻干曲线进行筛选.结果表明:采用冻干曲线2和耐热保护剂WXS冻干鸡传染性支气管炎病毒H52弱毒疫苗效果最佳.试制耐热活疫苗3批,其各项检验均符合要求.耐老化试验表明:经过37℃放置10d的每羽份病毒含量下降0.6～0.8个滴度,每羽份病毒含量达104.7～105.1EID50.保存期试验表明:2～8℃保存24个月疫苗每羽份病毒含量下降0.4～0.6个滴度,每羽份病毒达104.1～104.3EID50.疫苗2～8 ℃保存24个月后效检抗体水平达到1:16～1:32.免疫持续期试验表明:免疫21日龄SPF鸡,6个月后血清中和抗体效价达到1:32～1:64.田间试验表明临床观察无不良反应,安全有效.特异性试验表明耐热活疫苗抗原性不变.耐热保护剂生物学和理化特性表明保护剂安全、稳定,室温保存期达3个月.     

鸡传染性支气管炎活疫苗耐热保护剂的研究

应用冻干制品加速热稳定性试验,测试三组冻干保护剂配方对鸡传染性支气管炎(H120株)活疫苗的耐热保护效果。结果表明A配方的耐热保护剂效果最好,使用该保护剂的疫苗表现为37℃放置10d后,病毒含量下降在0.6~0.8个滴度。     

鸡新城疫La Sota系新型保护剂冻干苗的保存期试验

鸡新城疫Ｌａ Ｓｏｔａ新型保护剂冻干苗、经１０￣１５℃保存试验,该疫苗效价的稳定性明显优于蔗糖脱脂乳冻干苗,１０￣１５℃保存４个月疫苗效价１００％合格,保存５个月２／３批效价仍合格;而蔗糖脱脂乳冻干苗,保存４个月,２／３批效价合格,保存５个月,疫苗全部失效。     

鸡新城疫LaSota系新型保护剂冻干苗的保存期试验

鸡新城疫ＬａＳｏｔａ新型保护剂冻干苗、经１０～１５℃保存试验，该疫苗效价的稳定性明显优于蔗糖脱脂乳冻干苗，１０～１５℃保存４个月疫苗效价１００％合格，保存５个月２／３批效价仍合格；而蔗糖脱脂乳冻干苗，保存４个月，２／３批效价合格，保存５个月，疫苗全部失效。     

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(耐热保护剂)活疫苗的研究

通过对不同保护剂基质与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT)相溶性的研究及冻干曲线的优化,成功研制出一种适宜HVT的耐热冻干保护剂。用其与相匹配的48h自然回温冻干曲线冻干的HVT耐热活疫苗,其病毒冻干损失比SPGA常规疫苗减少约50%,在2~8℃条件下可保存24个月,37℃保存10d病毒存活率达50.5%,而SPGA规程苗仅为31.6%。经约50万羽份的田间试验,证明安全有效并显示出良好的耐热性能,达到国外同类产品水平。     

耐热保护剂鸡传染性支气管炎活疫苗试验

用3批耐热保护剂冻干的鸡传染性支气管炎活疫苗在2-8℃条件下放置2年，疫苗的病毒含量EID50由10^53、10^55、10^55分别下降为10^37、10^41、10^37。在20-25℃条件下储存6个月病毒含量EID50由10^53、10^55、10^55分别下降为10^39、10^35、10^41。由试验结果可知，试验中的3批耐热保护剂冻干的鸡传染性支气管炎活疫苗在2—8℃条件下保存有效期不少于2年，20-25℃条件下仍具有6个月的有效期。     

猪瘟无明胶无蛋白耐热活疫苗的研制及冻干工艺

为提高猪瘟(CSF)活疫苗的耐热性能,同时避免明胶和蛋白对猪只产生的免疫副反应,用葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、氨基酸等成分设计无明胶无蛋白耐热保护剂,根据配方的共晶点、塌陷温度科学设计冻干程序,并比较了不同预冻方式对猪瘟活疫苗效价的影响。结果表明,猪瘟病毒采用无明胶无蛋白耐热保护剂配方A冻干后具有较好的耐热性能,37℃保存10,15d,病毒的耐热损失分别为0.6lg和0.9lg;对快冻、慢冻以及退火3种不同的冻干方式进行比较,发现对猪瘟病毒冻干损失由大到小依次为:退火慢冻快冻,而耐热损失则相反;与传统的含明胶含蛋白耐热疫苗相比,猪瘟无明胶无蛋白耐热疫苗耐热效果更好,可在2~8℃长期保存30个月,动物试验表明该疫苗对猪只安全、无副反应。     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究：Ⅱ，鸡传染性法氏囊病弱毒（B87）冻干活疫苗耐热保护剂的试验

用耐热冻干保护剂配制的鸡传染性法氏囊病（B87）试验疫苗，在2－8℃条件下，保存12、24个月效价基本不变，保存37个月后，对鸡免疫攻毒,保护率仍为91％－100％。     

鸡新城疫耐热保护剂活疫苗(La Sota株)保存期试验

本实验将NDV La Sota株耐热保护剂活疫苗分别放入37℃、常温、2~8℃进行NDV La Sota株耐热保护剂活疫苗保存期试验。在37℃保存7d、10d、15d,将疫苗分别取出,进行病毒含量测定、性状检验。在常温保存10d、20d、30d,将疫苗分别取出,进行病毒含量测定、性状检验。在4℃保存9、12、15、18、24、27个月,按规定日期取出疫苗,进行疫苗的效力检验及外观性状检验。最后得出结论:耐热保护剂活疫苗可在2~8℃保存24个月。     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究Ⅲ.耐热保护剂鸡痘冻干疫苗的试验

试验中用耐热保护剂制备的鸡痘弱毒活疫苗,在2～8℃条件下保存效价比较稳定,保存24个月时试验疫苗效价下降率为6%～16.3%,而对照的常规疫苗下降率达31.4%.     

动物疫苗的应用与品种介绍（四）

猪繁殖与呼吸障碍综合征 (双价)、猪细小病毒、猪伪狂犬 三联耐热活疫苗 该疫苗系由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、细小病毒、伪狂犬病毒这三种病毒分别经细胞培养,收获的感染细胞培养物,以一定比例混合后,加以优选免疫增强剂及最新耐热冻干保护剂,经冷冻干燥制成。现简介如下:     

响应面法优化猪伪狂犬病病毒耐热保护剂的研究

为提高猪伪狂犬病活疫苗的保存温度,本实验应用响应面法(RSM)筛选并优化出猪伪狂犬病病毒(PRV)耐热保护剂最佳配方。结果表明:谷氨酸钠、L-精氨酸盐酸盐和D-山梨醇能够显著提高病毒对冻干环境的耐受能力,酶解酪蛋白、海藻糖、明胶、蔗糖和牛血清白蛋白显著性依次递减;以冻干后病毒保护率为响应值,响应面优化出最优配方为:谷氨酸钠2%、L-精氨酸盐酸盐2%、D-山梨醇2%、酶解酪蛋白7.6%、海藻糖1%、明胶4%、蔗糖15.2%、牛血清白蛋白2%。采用该配方进行验证试验,冻干保护率达到80.40%,经37℃保存7 d的耐老化试验及2℃~8℃保存24个月,3批疫苗病毒滴度分别下降0.55、0.62、0.47及0.47、0.51、0.41,证明该配方制备的疫苗具有良好的热稳定性。     

不同保护剂试制的羊痘鸡胚化弱毒冻干苗及其种毒保存期试验

1.用H.G氏液、筋胶液和脱脂乳三种保护剂分别试制的羊痘鸡胚化弱毒冻干苗的近期效价均为10~(-4)/ml。 2.在8～14℃下保存,三种保护剂试制的冻干苗保存18个月时,H·G氏液组与筋胶液组的效价仍达10~(-4),而脱脂乳组则下降为10~(-3);保存至63个月时,H.G氏液组与筋胶液组均为10~(-3)。脱脂乳组为10~(-2)。在0～4℃保存至18个月,三个组的效价均达10~(-4);至63个月时,除H·G氏液组为10~(-4)以外,其他两组均为1~(-3)。在-20～-25℃下保存63个月时,三个组的效价均为10~(-4)。 3.冻干的羊痘鸡胚化弱毒及其通过绵羊反应毒的种毒,在-20～-25℃下分别保存至139个月和92个月,对绵羊的毒价基本无变化。     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究——鸡传染性支气管炎冻干活疫苗耐热保护剂试验

本试验以水解乳蛋白、乳糖、硫脲、多聚蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP K90 )等为主要材料 ,配 A组保护剂 ,并加 B组保护剂 (国内常规的蔗糖脱脂乳 )和 C组保护剂 (国外疫苗保护剂 )分别与鸡传染性支气管炎病毒 (IBV H1 2 0、H52、HK肾型 )弱毒原液 ,按一定比例配苗 ,采取特定的冻干曲线制备的试验疫苗 ,在不同温度下保存后测定效价变化情况。试验证实 ,A组保护剂耐热保护性能最好 ,在 2～ 8℃条件下有效保存期达 2年以上 ,达到国外同类产品水平。