饲料中玉米赤霉醇类药物的测定--超高效液相色谱-串联质谱法

本研究建立了饲料中玉米赤霉醇类药物的UPLC-MS/MS分析方法。饲料样品经乙腈水溶液提取,离心后提取液经多功能净化柱净化,氮气吹干,用乙腈+乙酸水溶液（50：50,V/V）溶解, UPLC-MS/MS分析。结果显示,6种玉米赤霉醇类药物在5.0～50.0 g/kg浓度范围内线性关系良好, r≥0.999。以单一饲料、浓缩饲料、配合饲料和预混料等为添加基质,其回收率在65.8%～104.6%,检出限为5.0 g/kg。本方法灵敏度高、专属性好、操作简单、结果可靠,可满足饲料中玉米赤霉醇类药物的分析检测。     

牛肉组织中玉米赤霉醇及相关物残留的气相色谱-质谱法测定

建立了能够同时检测牛肉组织中玉米赤霉醇（又名α-玉米赤霉醇）及3种相关物（β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮和α-玉米赤霉烯醇）残留的气相色谱-质谱联用法。样品均质后,用甲醇提取样品中的待测物,浓缩,用水稀释后,乙酸乙酯萃取,浓缩。用氢氧化钾溶液溶解,正己烷去脂,乙醚萃取,氨基固相萃取柱净化,衍生化后,用气相色谱-质谱联用仪检测,外标法定量。玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮和α-玉米赤霉烯醇线性范围均为0.5-10.0 ng/mL,检测限均为1.0 ng/g,在添加5.0 ng/g时,回收率为71.5%-81.4%,变异系数为1.4%-5.0%。     

动物性食品中玉米赤霉烯酮残留的LC-MS/MS法测定

建立了用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定动物性食品中玉米赤霉烯酮毒素残留量的检测方法。样品(猪肉、猪肝、鸡肉)经乙腈∶水(75∶25,V/V)提取,正己烷除脂,Bond Elut Mycotoxin萃取柱净化,0.1%甲酸水溶液-乙腈(75∶25,V/V)洗脱,采用质谱电喷雾电离源,正离子扫描,多反应监测模式(SRM)监测,外标法定量。该方法玉米赤霉烯酮标准曲线的线性回归系数在0.9983~0.9998之间,线性范围1~100 ng/m L,方法检测限均为1.0 ng/g,定量限为5.0 ng/g,回收率在76.1%~87.22%之间,相对标准偏差2.33%~8.36%,变异系数(CV)在17%以内,可有效实现动物性食品中玉米赤霉烯酮毒素残留检测。     

复合免疫亲和柱净化-UPLC-MS/MS测定饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素

为建立饲料（浓缩饲料、配合饲料、植物性饲料原料）中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素残留量的复合免疫亲和柱净化-UPLC-MS/MS检测方法,实验样品经86%乙腈提取,复合免疫亲和柱净化,定容后经液相快速分离,电喷雾离子化,采用MRM监测模式,正负离子扫描,外标法定量。结果表明：黄曲霉毒素B1检测限为0.02 μg/kg,定量限为0.05 μg/kg,在0.05 ~ 2.0 μg/L线性关系良好,r≥0.9990,在添加不同倍数定量限浓度水平上回收率为90.5% ~ 97.8%,变异系数≤2.6%|玉米赤霉烯酮检测限为0.2 μg/kg,定量限为0.5 μg/kg,在0.5 ~ 10.0 μg/L线性关系良好,r≥0.9992,在添加不同倍数定量限浓度水平上回收率为85.4% ~ 93.7%,变异系数≤4.6%|T-2毒素检测限为0.02 μg/kg,定量限为0.05 μg/kg,在0.05 ~ 2.0 μg/L线性关系良好,r≥0.998,在添加不同倍数定量限浓度水平上回收率为87.4% ~ 95.2%,变异系数≤3.9%。本方法分析速度快、灵敏度高、准确可靠,可用于饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的检测分析。 [关键词] 黄曲霉毒素B1|玉米赤霉烯酮|T-2毒素|复合免疫亲和柱|液相色谱-串联质谱     

玉米赤霉醇单克隆抗体的制备及鉴定

将玉米赤霉醇 (α- zearalanol,ZER)琥珀酰化得到 ZER- 7-半琥珀酸酯 ,再利用混合酸酐法与牛血清白蛋白 (BSA)偶联得到免疫原 ,以此免疫原免疫 BAL B/c小鼠 ,利用杂交瘤技术得到两株稳定分泌 ZER单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1C1 2 和 9B4 ,经鉴定两株单抗亚型均为 Ig G1 ,间接 EL ISA测定腹水效价为 1∶ 3.2× 10 5。该抗体与同系物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的交叉反应率分别为 36 .2 5 % ,5 2 .73% ,0 .6 7% ,74 .36 % ,5 3.70 % ;与己烯雌酚、雌二醇、睾酮、克伦特罗的交叉反应率均小于 0 .1%。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定     

獭兔玉米赤霉烯酮中毒的诊断

山东某獭兔场饲养的3 000只母兔发生了一种以流产及青年兔死亡为特征的疾病,通过对发病兔进行细菌培养及兔病毒性出血症病毒的RT-PCR以及饲料中的玉米赤霉烯酮、呕吐毒素及黄曲霉毒素进行鉴别检测,首先排除细菌病及兔病毒性出血症发病的可能,并从饲料中检测3种毒素的含量分别为1 196.1、130.8、6μg/kg,经过对照饲料标准发现玉米赤霉烯酮严重超出标准(标准为300μg/kg)。通过饲喂试验发现这次发病与所饲喂的饲料有关,诊断为玉米赤霉烯酮中毒。     

同位素内标法测定饲料中氢溴酸常山酮——超高效液相色谱-串联质谱法

本研究建立了饲料中氢溴酸常山酮的UPLC-MS/MS分析方法.样品经乙腈提取,离心后经正己烷除脂净化,氮气吹干后,50％甲醇溶液复溶,UPLC-MS/MS分析.结果表明,氢溴酸常山酮在20.0～500.0 μg/L浓度范围内线性关系良好,r2=0.999 1.以浓缩饲料、配合饲料、预混料为添加基质,其回收率在60％～120％,检出限为25.0μg/kg,定量限为50.0μg/kg.结论显示,本方法灵敏度高,专属性好,操作简单,结果可靠,可满足饲料中氢溴酸常山酮的分析检测.     

高效液相色谱法对饲料中玉米赤霉烯酮的测定

研究了高效液相色谱法测定饲料中玉米赤霉烯酮的方法。样品经乙腈-水(体积比84:16)提取,提取液通过RomerMycosepTM226净化柱、浓缩,C18色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。对添加高、中、低3个浓度玉米赤霉烯酮的玉米样品进行加标回收实验,平均回收率为88.5%、85.3%和93.2%,变异系数为1.5%～3.9%,最低检测限为10μg/kg。实验结果表明,此法不仅定量准确、精密度高,而且操作极为方便。     

液相色谱-串联质谱法测定饲料中玉米赤霉烯醇的研究

玉米赤霉烯醇具有雌激素的作用,可造成家禽和家畜的雌激素水平提高,同时对雄性动物也有一定的影响,在急性中毒的条件下,使动物突然死亡。本文以液相色谱-串联质谱法测定饲料中的玉米赤霉烯醇,经试验:玉米赤霉烯醇在5~500 ng/m L的浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数均≥0.999;检测限能达到10μg/kg,定量限能达到20μg/kg;回收率均在60%~110%范围内;批内、批间相对标准偏差均≤15%。     

液质联用法测定饲料中玉米赤霉烯醇的方法研究

玉米赤霉烯醇具有雌激素的作用,可使家禽和家畜的雌激素水平提高,同时对雄性动物也有一定的影响,在急性中毒的条件下,使动物突然死亡。本文以液相色谱-串联质谱法测定饲料中的玉米赤霉烯醇,经试验:玉米赤霉烯醇在5~500ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数均≥0.999;检测限能达到10μg/kg,定量限能达到20μg/kg;回收率均在60%~110%范围内;批内、批间相对标准偏差均≤15%。     

IAC-HPLC荧光检测法测定饲料中的玉米赤霉烯酮方法研究

饲料样品经乙腈-水(8+2)提取,提取液用磷酸盐缓冲溶液稀释,经免疫亲和柱净化后,净化提取液用反相高效液相色谱荧光检测器测定,可以准确检测饲料中玉米赤霉烯酮含量。IAC-HPLC荧光检测法可以有效地将玉米赤霉烯酮与其类似物区别开。利用配合饲料、预混料、鱼粉、豆粕、浓缩饲料、玉米进行玉米赤霉烯酮准确性实验,回收率为90.1%～118%。利用鱼粉、预混料、鸡配合饲料、玉米进行方法精密度试验,相对标准偏差均在5%以内。因此,本方法中建立的免疫亲和柱净化、高效液相色谱荧光检测法具有良好的准确性、稳定性和特异性。     

我国部分地区饲料原料及配合饲料玉米赤霉烯酮污染情况调研

试验随机采集北京、山东、河南、四川等地的饲料原料共179份、配合饲料共61份,通过免疫亲和柱净化-高效液相色谱法对所采集样品中玉米赤霉烯酮(ZEA)含量进行检测。结果表明:在被检饲料原料中,棉粕/棉籽、麸皮、青贮饲料ZEA检出率为100%,但均没有超过我国限量标准。其中,玉米和DDGS中ZEA含量最高,阳性平均值分别为477.14μg/kg和417.67μg/kg,超标率分别为23.21%和13.33%;在被检配合饲料中,大猪料污染较为严重,阳性平均值为510.42μg/kg,为中度污染。乳猪料和其他配合饲料ZEA含量较低,但检出率高达100%。由于试验过程中存在不可避免的误差,此次试验结果仅代表我国部分地区ZEA污染情况,不具有全国代表性。     

玉米赤霉烯酮对畜禽的毒害作用研究进展

近几年我国许多省份发现小母猪采食饲料后阴道红肿，发情延期或假发情，严重时引起母猪阴道脱出、直肠外翻、子宫肿胀、胚胎发育不良及流产等类似中毒的症状。经研究分析发现，是玉米中的玉米赤霉烯酮所引起，这给养殖业造成了很大的危害。玉米赤霉烯酮对畜禽的毒副作用主要表现为雌激素中毒症，能引起猪和牛的不孕或流产。在所有家畜中，猪对玉米赤霉烯酮最为敏感，饲料中含有1mg／kg玉米赤霉烯酮就足以引起猪的雌激素中毒症，小公猪采食玉米赤霉烯酮后，出现“雌性化”症状，如乳头增大、睾丸萎缩等，还可引起母猪窝产仔数减少。现将玉米赤霉烯酮对畜禽的毒害作用研究进展综述如下。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮含量的研究

研究旨在建立一种超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中黄曲霉毒素B₁和玉米赤霉烯酮。试验样品经84%乙腈水溶液提取,净化,稀释定容后上机测定。结果显示,该方法在0.5～50.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数R²≥0.999 0;黄曲霉毒素B₁的空白样品平均加标回收率在81.8%～91.6%,精密度(RSD)≤4.5%;玉米赤霉烯酮的空白样品平均加标回收率在84.5%～93.9%,RSD≤4.1%。研究表明,该方法能够满足饲料中黄曲霉毒素B₁和玉米赤霉烯酮同步检测的要求。     

超高效液相色谱—串联质谱法测定牛奶中6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素的残留

试验旨在建立牛奶中6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素残留的超高效液相―串联质谱检测方法。牛奶样品经乙腈提取,免疫亲和柱净化,C₁₈色谱柱分离,以0.02%（V/V）乙酸―水/甲醇为流动相,采用梯度洗脱方式进行液相色谱分离,多反应监测模式,外标法进行定量。牛奶中6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素的检测限可达到1.0 μg/L,且在2.5～100.0 μg/L的浓度范围内,线性关系良好。该方法专属性强、灵敏度高、分离度好,适用于牛奶中的6种玉米赤霉烯酮类霉菌毒素残留的测定。     

玉米赤霉烯酮的污染情况及酯化葡甘露聚糖对其吸附效果的研究

近些年来,饲料企业和养殖户越来越重视镰刀菌属霉菌毒素的污染,尤其是玉米赤霉烯酮类霉菌毒素。不同畜种对玉米赤霉烯酮的敏感性差异较大,猪对其最为敏感。但是,饲用谷物一般都存在多种霉菌毒素混合污染,在这种情况下,增加了肉鸡、奶牛等其他畜种对玉米赤霉烯酮的敏感性。通过分析奥特奇生物制品有限公司多年来的检测数据发现,中国饲用谷物存在多种霉菌毒素混合污染的现象。其中,饲料的玉米赤霉烯酮类检出率达到93.60%,不同省份检出率略有差异,但均高于87.50%,云贵川和两广地区的饲料样品玉米赤霉烯酮类检出率最高,达到100%和99.06%。玉米副产物仍是玉米赤霉烯酮污染最严重的饲料原料,平均值达到198.49 μ g/kg。大量的科学研究和市场应用证实,酵母细胞壁来源的酯化葡甘露聚糖(E-GM)可以有效地吸附玉米赤霉烯酮类霉菌毒素,降低养殖过程中玉米赤霉烯酮污染带来的风险,对各畜种可以起到很好的保护作用。     

荧光定量法检测饲料中玉米赤霉烯酮

试验建立了饲料中玉米赤霉烯酮荧光定量检测方法。结果表明:玉米赤霉烯酮在0.1～1.6 mg/L浓度范围内线性关系良好,r2=0.999 0。以配合饲料、浓缩饲料、预混料为添加基质,其回收率在80%～120%,检出限为0.1 mg/L。该方法灵敏度高、操作简单、结果准确。     

郑州某粮库小麦中玉米赤霉烯酮含量的检测

为了解动物饲料小麦中是否含有玉米赤霉烯酮毒素,应用竞争性酶免疫分析法快速定量测定43个小麦样品中玉米赤霉烯酮毒素的含量,并进行了分析。结果显示,在被检的43个小麦样品中,含有玉米赤霉烯酮的有5个(5/43),检出率占11.6%,玉米赤霉烯酮含量超过国家粮食卫生标准的有3个(3/43),超标率占7.0%,说明作为畜禽饲料原料的小麦,存在引发动物玉米赤霉烯酮毒素中毒的潜在危险。本法适宜于大批量小麦样品中玉米赤霉烯酮含量的快速测定,这对于选择品质优良的小麦作为饲料、避免玉米赤霉烯酮对畜禽生长危害有重要意义。     

饲料中玉米赤霉烯酮快速定量检测方法的研究

利用免疫亲和柱荧光光度法测定了饲料中玉米赤霉烯酮,检测灵敏度为0.1mg/kg,检测范围为0~5mg/kg,变异系数为3.3%~13.3%,在其检测范围内的回收率为97%~106%,分析1个样品的时间只需25min。     

玉米赤霉烯酮降解酶制剂的贮藏及应用稳定性研究

本试验旨在通过添加最优的化学稳定剂提高玉米赤霉烯酮降解酶水剂的贮藏稳定性,并研究温度、空气、光照对玉米赤霉烯酮降解酶粉剂贮藏稳定性的影响。在玉米赤霉烯酮降解酶水剂的贮藏稳定性研究中,通过在不同温度下优化化学稳定剂的组成,筛选出3种提高酶稳定性的化合物明胶、甘油、聚乙二醇400,最佳配比为20%甘油(v/v)、5%聚乙二醇400(v/v)、0.5%明胶(w/v),使酶制剂水剂的活力经40℃储存30 d后基本不降低;对玉米赤霉烯酮降解酶粉剂贮藏条件的研究发现,在4℃、真空、避光条件下,玉米赤霉烯酮降解酶粉剂的贮藏半衰期可达300 d,且经过模拟胃肠液处理后该酶制剂仍具有较好的降解活性。本研究为该酶制剂的开发和产业化应用提供数据支撑,为玉米赤霉烯酮污染饲料的安全脱毒提供有效解决方案。