内皮素-1(ET-1)对羊驼皮肤黑素细胞增殖和黑素生成的影响

旨在研究内皮素-1 (Endothelin-1,ET-1)对羊驼皮肤黑素细胞(Melanocyte,MC)增殖和黑素合成的影响.本研究中,体外培养正常羊驼皮肤黑素细胞,观察不同浓度ET-1(0、0.1、1、10、100 nmol·L-1)对羊驼皮肤黑素细胞增殖、黑素含量、内皮素受体B(Endothelin recepter B,EDNRB)基因、酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)基因、酪氨酸相关蛋白-1(Tyrosinase related protein 1,TRP-1)基因和表皮黑皮素1受体(Melanocortin 1 receptor,MC1R)基因表达量的影响.结果表明,ET-1处理羊驼皮肤黑素细胞3d后,羊驼皮肤黑素细胞增多,黑素含量、EDNRB、TRP-1和TYR基因表达量都明显增加(P＜0.05),以10 nmol·L-1组最为显著.ET-1能诱导羊驼皮肤黑素细胞增殖、树突增长,诱导EDNRB、TYR和TRP-1基因表达量增高,使黑素合成增加；同时诱导MC1R基因表达量增高,从而通过α-MSH信号通路对羊驼黑色素的生成产生影响.     

不同消化酶对羊驼皮肤黑素细胞分离的影响

本研究旨在探讨羊驼皮肤黑素细胞的分离、培养及鉴定方法,为进一步研究色素沉积提供合适的细胞模型。取1~3岁的青年羊驼皮肤,用胰酶、胰酶∶EDTA、DispaseⅡ酶3种不同的消化酶消化羊驼皮肤,再用胰酶∶EDTA消化,分离得到羊驼黑素细胞,接种于多种促进黑素细胞生长的营养成分DMEM/F12培养基中,通过观察黑素细胞的生长、细胞接种数和细胞贴壁数检验黑素细胞的纯度。结果表明,DispaseⅡ组处理的羊驼皮肤,分离得到的黑素细胞明显多于其它2个组(P＜0.01)。综上所述,选用DispaseⅡ酶作为分离羊驼皮肤的消化酶,可获得较纯的黑素细胞。     

miR-186-5p与α-MSH互作对绵羊黑素细胞黑色素生成的影响

黑色素合成受多种基因和miRNAs的调控,为了研究miR-186-5p与α-MSH协同作用对绵羊黑素细胞黑色素生成的影响。本研究在绵羊黑素细胞中转染miR-186-5p表达载体,同时添加α-MSH,通过实时荧光PCR（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测MITF、TYR、TYRP1和TYRP2 4种可能与之相关的基因表达情况;利用免疫组化检测MITF蛋白在黑素细胞中的表达和亚细胞定位;通过分光光度法测定黑色素含量变化;利用划痕试验测定细胞迁移情况,试验分为miR-186-5p转染组、miR-186-5p+α-MSH互作组和对照组,每组3个重复。结果显示,miR-186-5p能够抑制绵羊黑素细胞中MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表达,并最终抑制黑色素的生成。而添加α-MSH能缓解miR-186-5p对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2表达的抑制作用,进而在一定程度上恢复黑色素的含量。另外,miR-186-5p还能抑制细胞分裂,并阻碍细胞的迁移,而α-MSH无法抵消miR-186-5p产生的这种负面影响。上述结果表明,在绵羊黑素细胞中,miR-186-5p和α-MSH均参与调控黑色素合成途径,其中,miR-186-5p主要起负调控作用,而α-MSH主要参与相关位点的正调控,并能部分恢复miR-186-5p导致的黑色素含量下降。值得注意的是,miR-186-5p还参与调控细胞的增殖和迁移,而α-MSH不参与相关调控。     

一氧化氮合酶与动物生殖

一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）在氧气存在下能催化精氨酸分解生成一氧化氮（nitric oxide，NO），同时产生L-瓜氨酸。NOS有以下几种形式：神经型NOS（neuronal NOS，nNOS，又称Ⅰ型NOS）、诱导型NOS（inducible NOS，iNOS，又称Ⅱ型NOS）、内皮型NOS（endothelial NOS，eNOS，又称Ⅲ型NOS），其中nNOS和eNOS又被称为组成型NOS（constitutive NOS，cNOS）。cNOS为Ca^2＋依赖型，主要位于内皮细胞（eNOS）及脑（nNOS）；iNOS为非Ca^2＋依赖型，主要位于巨噬细胞、嗜中性白细胞、内皮细胞及上皮细胞。     

miR-186-5p与α-MSH互作对绵羊黑素细胞黑色素生成的影响

黑色素合成受多种基因和miRNAs的调控,为了研究miR-186-5p与α-MSH协同作用对绵羊黑素细胞黑色素生成的影响。本研究在绵羊黑素细胞中转染miR-186-5p表达载体,同时添加α-MSH,通过实时荧光PCR (quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测MITF、TYR、TYRP1和TYRP2 4种可能与之相关的基因表达情况;利用免疫组化检测MITF蛋白在黑素细胞中的表达和亚细胞定位;通过分光光度法测定黑色素含量变化;利用划痕试验测定细胞迁移情况,试验分为miR-186-5p转染组、miR-186-5p+α-MSH互作组和对照组,每组3个重复。结果显示,miR-186-5p能够抑制绵羊黑素细胞中MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表达,并最终抑制黑色素的生成。而添加α-MSH能缓解miR-186-5p对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2表达的抑制作用,进而在一定程度上恢复黑色素的含量。另外,miR-186-5p还能抑制细胞分裂,并阻碍细胞的迁移,而α-MSH无法抵消miR-186-5p产生的这种负面影响。上述结果表明,在绵羊黑素细胞中,miR-186-5p和α-MSH均参与调控黑色素合成途径,其中,miR-186-5p主要起负调控作用,而α-MSH主要参与相关位点的正调控,并能部分恢复miR-186-5p导致的黑色素含量下降。值得注意的是,miR-186-5p还参与调控细胞的增殖和迁移,而α-MSH不参与相关调控。     

不同代次羊驼皮肤黑素细胞TYR基因表达变化的研究

为了探讨TYR基因在体外培养的羊驼皮肤黑素细胞不同代次间表达变化差异,根据Gen Bank中已发现的序列(EU293064)设计引物和探针,以羊驼皮肤黑素细胞的RNA为模板,采用QRT-PCR Taq Man探针法研究羊驼酪氨酸酶基因在不同代次间羊驼皮肤黑素细胞中m RNA表达量.结果表明,经过内参基因校正后,第10代羊驼黑素细胞中TYR基因的相对表达量是第3代细胞相对表达量的25倍(P0.01),第10代细胞与第5代细胞表达差异不明显(P0.05)。表明TYR基因表达量的差异与羊驼皮肤黑素细胞传代可能存在一定的相关性。     

一氧化氮／一氧化氮合酶与血吸虫感染

一氧化氮合酶（NOS）家族中诱生型一氧化氮合酶（iNOS）在细胞因子或脂多糖刺激下,催化合成的一氧化氮（N0）对多种寄生虫具有杀伤作用。因此,认识一氧化氮在抗血吸虫感染中的作用,有着重要的理论意义和潜在的临床应用价值。本文就一氧化氮的生物学特性、生物合成、作用机制以及近年来一氧化氮／一氧化氮合酶在血吸虫学研究中的应用作一综述。     

α-黑素细胞刺激素对泰和乌骨鸡皮肤黑色素细胞增殖及黑色素合成的影响

旨在研究α-黑色素细胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)对泰和乌骨鸡皮肤黑色素细胞增殖和黑色素生成的影响,初步探讨α-MSH调控泰和乌骨鸡黑色素合成的机制。利用体外培养的乌骨鸡皮肤黑色素细胞,观察不同质量浓度α-MSH(0、2.5、5、10 mg/L)及其拮抗剂([D-Trp7,Ala8,D-Phe10]α-MSH(6-11)-amide,D-AD-MSH)处理后黑色素细胞增殖、黑素皮质素受体1(melanocortin 1receptor,MC1R)基因表达、酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)含量和黑色素含量的变化。结果表明,不同质量浓度的α-MSH对细胞有促增殖的作用,2.5mg/Lα-MSH处理组细胞的增殖率极显著高于不添加α-MSH的对照组(P0.01)。α-MSH剂量依赖性地提高MC1R基因表达。2.5mg/Lα-MSH处理组细胞cAMP的含量显著高于对照组(P0.05),其他处理组之间差异不显著(P0.05)。不同浓度的α-MSH处理均极显著提高细胞TYR活性(P0.01或P0.05)。与对照组相比,2.5mg/Lα-MSH极显著提高皮肤黑色素细胞的黑色素含量(P0.01),5、10.0mg/Lα-MSH具有提高黑色素细胞黑色素含量的趋势(P0.05)。α-MSH拮抗剂D-A-D-MSH预处理乌骨鸡皮肤黑色素细胞显著抑制α-MSH对黑色素细胞MC1R基因表达、cAMP含量、TYR活性和黑色素含量的上调作用(P0.05)。α-MSH能促进泰和乌骨鸡皮肤黑色素细胞增殖,提高MC1R基因表达、cAMP含量以及TYR活性并进而促进黑色素合成。     

一氧化氮在免疫效应机制中的作用及其细胞因子的调控

一氧化氮（NO）在体内是一种自由基气体,早期研究人员发现活化的巨噬细胞可以产生NO2^-／NO3^-,其生物学效应是在关于内皮依赖性血管舒张作用的研究中发现的。一氧化氮在机体内由诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）或结构型一氧化氮合成酶（nNOS）与底物（L—Argininc/L-Arg）作用生成,不同的合成酶所产生的NO也具有不同的生理功能,     

NO及NOS在Ⅰ型鸭肝炎病毒致雏鸭肝损伤机制中的作用

人工感染4日龄雏鸭病毒性肝炎模型,探讨一氧化氮合酶（NOS）和NO在Ⅰ型鸭肝炎病毒感染后的肝脏中的动态变化及与肝损伤的关系。120羽4日龄雏鸭随机分为试验组和对照组,试验组腿部肌注Ⅰ型鸭肝炎病毒,对照组注射等量生理盐水。感染后动态观察肝脏的病变、测定肝组织内NOS活性和NO的浓度以及肝组织内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的分布规律。结果显示,病毒感染后,雏鸭肝功能和肝脏结构都受到不同程度的损害;NO对肝脏的损伤在感染后3d内持续增强,从4d开始逐渐减弱;iNOS主要存在于雏鸭的巨噬细胞中,其含量在感染早期上升,后期逐渐下降;肝组织内NOS活性及NO的浓度变化与免疫组化显示结果一致。结果表明,鸭肝炎病毒感染的雏鸭肝脏的损伤程度与NOS、NO浓度变化一致,提示NO在鸭肝炎病毒导致的雏鸭肝损伤中起重要作用。     

一氧化氮与原虫感染

现已阐明一氧化氮(NO)是较小的生物活性分子，具有较强的脂溶性，可自由穿过细胞膜，通过广泛的化学／自由基反应而发挥生物学效应，如神经细胞间的信号传递、血压恒定的维持和机体的防御反应并参与机体多种疾病的发生和发展。现已明确，催化NO合成的酶是一氧化氮合酶(NOS)，体内多种细胞存在NOS，目前普遍认为在NOS的3种同工酶亚型中与抗寄生虫感染密切相关的为诱导型NOSD(iNOS)，     

二乙烯三胺/一氧化氮聚合物诱导的奶牛乳腺上皮细胞损伤模型的建立

泌乳期间的奶牛由于代谢旺盛,往往会产生大量一氧化氮(NO),诱导发生氧化应激,进而对细胞产生毒害作用。本试验旨在探讨二乙烯三胺/一氧化氮聚合物(DETA/NO)诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)氧化应激的损伤条件,并建立氧化应激模型。本试验利用不同浓度(0、10、30、100、500、1 000μmol/L)的DETA/NO作为刺激源,作用BM EC 2、4、6、8、12、24 h,通过测定细胞存活率、抗氧化指标、炎症因子和NO含量及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)活性,筛选适宜的DETA/NO作用时间及作用浓度,建立BMEC氧化损伤模型。结果表明:1 000μmol/L的DETA/NO作用细胞6 h,细胞存活率降低为74.27%,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性也均显著降低(P0.05),然而,i NOS活性,NO、白细胞介素-1、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛含量则呈现相反的变化规律,显著升高(P0.05)。综上所述,1 000μmol/L的DETA/NO处理细胞6h,可构建理想的BM EC氧化应激模型。     

雏鸭感染鸭肝炎病毒后血液中一氧化氮和一氧化氮合酶的变化

用不同毒力株鸭肝炎病毒人工感染雏鸭，测定雏鸭血浆一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的含量，研究NO在鸭病毒性肝炎发病过程中的作用。结果表明：雏鸭感染不同毒力株鸭肝炎病毒后第1天血浆一氧化氮和一氧化氮合酶含量就开始上升，第3天显著或极显著高于对照组，并持续至实验结束。揭示一氧化氮同雏鸭病毒性肝炎的发生发展过程有关。     

家兔大脑皮质和小脑皮质nNOS阳性神经元的分布

自从Furchgott等发现在哺乳动物体内有气态分子一氧化氮（NO）产生以来,NO作为一种新的神经递质和信息分子已在大量的实验中得到证实.NO的生成需要一氧化氮合酶（nitric oxidesynthase,NOS）的催化作用.     

兔脑一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的形态、结构和分布

应用MADPH—d酶组织化学技术，对兔脑一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的形态、结构和分布进行了研究。结果显示：①NOS阳性神经元呈蓝色，细胞核不着色，突起染色很清晰；神经元胞体大多呈多角形、梭形，还有一些呈圆形或卵圆形等。②NOS阳性神经元几乎分布于家兔的各个脑区，包括大脑皮质、小脑、丘脑下部、中脑和脑桥。小脑分布最集中，而延髓分布较少。以上结果表明，NOS阳性神经元及其催化产生的一氧化氮（NO）与中枢神经系统的诸多功能有关。     

黄芩苷对小鼠腹腔巨噬细胞影响的研究

黄芩苷是从黄芩中分离得到的黄酮类化合物,具有显著的生物活性。药理研究已证实具有抑菌、抗炎、抗病毒、清热等功效。文章从黄芩苷的提取方法,巨噬细胞功效,黄芩苷对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用进行综述,旨在为临床治疗炎症提供参考。     

1α，25-（OH）2D3影响体外培养OB增殖分化的钙离子通道机制

为研究1α,25-（OH）2D3影响体外培养成骨细胞（Osteoblasts,OB）增殖分化是否存在L-型钙离子通道机制。在体外培养SD大鼠0B基础上,添加不同浓度的1α,,25-（OH）2D。（0、10^-9、10、10^-7mol／I。）或和10mol／OB硝苯地平（NIF）作用24、48、72h。采用MTT法测定0B增殖率,PNPP法测定碱性磷酸酶（AI。P）活性。结果显示,1α,25-（OH）2D。卉13量依赖性地抑制oB增殖、促进ALP活性;10^-8mol／LNIF单独作用亦能抑制OB增殖、促进ALP活性;并且在培养早期（24、48h）能消除10mol／L 1α,25-（OH）2D3对OB增殖的抑制效应及对ALP活性的促进效应。结果表明,1α,,25-（0H）2D3能够抑制0B增殖、促进其分化;并且此过程涉及L-型钙离子通道机制。     

1α，25-（OH）2D3影响体外培养OB增殖分化的钙离子通道机制

为研究1α,25-（OH）2D3影响体外培养成骨细胞（Osteoblasts,OB）增殖分化是否存在L-型钙离子通道机制。在体外培养SD大鼠0B基础上,添加不同浓度的1α,,25-（OH）2D。（0、10^-9、10、10^-7mol／I。）或和10mol／OB硝苯地平（NIF）作用24、48、72h。采用MTT法测定0B增殖率,PNPP法测定碱性磷酸酶（AI。P）活性。结果显示,1α,25-（OH）2D。卉13量依赖性地抑制oB增殖、促进ALP活性;10^-8mol／LNIF单独作用亦能抑制OB增殖、促进ALP活性;并且在培养早期（24、48h）能消除10mol／L 1α,25-（OH）2D3对OB增殖的抑制效应及对ALP活性的促进效应。结果表明,1α,,25-（0H）2D3能够抑制0B增殖、促进其分化;并且此过程涉及L-型钙离子通道机制。     

兔脑NOS阳性神经元的总体分布和形态、结构的研究

为研究一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元在各年龄段家兔脑内的分布规律及其衰老性变化，用NADPH-d组织化学技术，观察了一氧化氮合酶阳性神经元在家兔脑内的分布和形态。结果显示：在家兔的小脑、大脑皮质、丘脑下部、中脑、脑桥等处有较多的一氧化氮合酶阳性神经元分布，延髓分布极少。NADPH—d阳性神经元呈蓝色，细胞核不着色，突起染色都很清晰。表明一氧化氮与中枢神经系统的诸多功能有关。