速解灵对马立克疫苗溶液pH值及马立克疫苗PFU的影响

近年来,随着集约化养鸡场的增多和规模不断扩大,环境污染愈加严重,细菌性疾病明显增多,如沙门氏菌病、霉形体病、大肠杆菌病、葡萄球菌病等,常造成严重的纤济损失,在生产实际中,某些养鸡场从雏鸡出壳后1日龄即开始使用抗生素治疗或预防。有些生产者更为方便起见,在对1日龄雏鸡进行马立克氏病(MD)疫苗免疫接种时,将抗生素添加到MD疫苗中同时使用,希望一举两得,但我们先前的研究表明,大多数搞生素对MD疫苗溶液的pH和空斑数(PFU)有较大影响。近来,据国外报道,一定量的头孢类抗生素(速解灵,ceftiofur)在加入MD疫苗中后对疫苗pH、PFU无影响,为了证明其效     

新成果·新技术·新方法

鸡马立克氏病(MD)多价疫苗 鸡马立克氏病(MD)多价疫苗是由两种或三种血清型MD疫苗株病毒(I型“814”、Ⅱ型SB-1和Ⅲ型HVTFC126)按规定配比组成,主要用于提高该病单价苗的防制效果,用于防制该病强毒株的爆发流行。该疫苗每羽剂量含三种血清型病毒总数在2000蚀斑形成单位(PFU)以上,无新城疫等病毒污染,免疫保护率(即发病减少率)达90％以上,在正确使用条件下,免疫鸡群的MD发病率可降低到1％以下。其免疫效果优于国际上的同类疫苗。     

用无细胞火鸡疱疹病毒疫苗对鸡进行抗马立克氏病接种

带有抗火鸡疱疹病毒(HVT)和马立克氏病(MD)疱疹病毒母体抗体的3个品系鸡群,在1日龄时用不同剂量的无细胞HVT接种。对这些鸡用MD强毒进行攻击,无论是注射攻毒还是接触感染攻毒,接种鸡都获得了保护,甚至当接种剂量为每只鸡250噬斑形成单位(PFU)这样的小剂量时,结果也是如此。用1,000PFU的真空冻干无细胞HVT疫苗或结合细胞HVT疫苗,对4个品系的肉用鸡和4个品系的白来杭鸡进行接种。在8或21个星期的实验期间内,没有发现MD肉眼病交频率有重大差异。     

不同保存方式对猪伪狂犬活疫苗病毒含量的影响

为了探究猪伪狂犬(Bartha-K61株)病活疫苗及专用稀释液的最佳保存温度及保存时间,试验取40瓶山东某生物公司生产的猪伪狂犬(Bartha-K61株)病活疫苗(批号为20190801,-20℃保存)进行试验,其中20瓶用专用稀释液稀释,20瓶不稀释,分别在4℃、37℃存放,并分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时测病毒含量;取不同温度(4℃、23℃、38℃)保存的稀释液对-20℃保存的疫苗进行稀释,每个温度稀释2瓶,当稀释后的疫苗温度为37℃时测定病毒含量。同时从-20℃保存的疫苗中取出2瓶作为对照,测定病毒含量。结果表明:疫苗在稀释前低温冷冻保存最好,如果4℃存放,不要超过8 h;稀释后的疫苗要及时使用,若不能及时使用,可于4℃保存,保存时间不超过8 h。室温保存尤其是天气炎热的夏季保存时间不要超过6 h。猪伪狂犬病活疫苗专用稀释液的保存温度以23℃为最佳。     

鸡马立克氏病疫苗荧光抗体染色阳性细胞数与蚀斑数线性回归（FAC+PR）方法的建立及应用

为解决鸡马立克氏病（MD）疫苗,尤其是MD多价疫苗在生产中疫苗配制环节上的盲目性,本试验建立了MDCVl988／Rispens／B5疫苗荧光抗体染色阳性细胞数（FAC^＋／mL）与疫苗蚀斑数（PFU／mL）两个数量化指标的线性关系（FAC^＋PR）。统计学检验证明,在此双变量下所建立的线性回归能客观反映该疫苗FAC^＋细胞数与疫苗PFU数之间的相互关系。将FAC^＋PR方法运用于MD疫苗的实验室制备,结果理论PFU／mL与实际PFU／mL的平均误差仅为5．4％。由此可见,采用这种方法可有效、准确估计出疫苗毒液中的PFU含量,并可以此为标准进行疫苗的配制。     

马立克氏病双价苗的研究Ⅲ.双价苗与单价苗免疫效应的比较病理学研究

选用SPF种蛋孵化的京白鸡60只,随机分为三组,即马立克氏病单价苗组(2000PFU HVT)、双价苗组(2000 PFU HVT 1200 PFU SB—1)以及攻毒对照组.应用组织学和透射电镜等手段对两种疫苗的免疫保护效应进行了比较病理学研究.结果证明,双价苗免疫鸡,MD发病数显著减少,发病时间推迟,病变程度明显减轻,法氏囊有大量具有分泌活性的浆细胞;单价苗免疫鸡发病数较对照组略有减少,但对延缓或减轻MD肿瘤的发生无明显作用,在法氏囊网状细胞胞浆中、核碎片附近和细胞间隙中存在大量无囊膜的马立克氏病病毒粒子,残存的细胞发生变性、坏死.由此认为,双价苗对实验性鸡马立克氏病的免疫效果明显优于HVT单价苗.     

鸡马立克氏病活疫苗鸡马立克氏病双价活疫苗鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗

鸡马立克氏病活疫苗　　鸡马立克氏病活疫苗(Marek’sDiseaseVac cine,Living)系用自然低毒力的马立克氏病病毒弱毒株,接种鸡胚成纤维细胞培养,收获感染细胞,加入适宜冷冻保护液制成。用于预防鸡马立克氏病(MD)。【性状】　淡红色细胞悬液。【用途】　用于预防鸡马立克氏病。各种品种1日龄雏鸡均可使用。注苗后8日可产生免疫力。【用法与用量】　肌肉或皮下注射。按瓶签注明的羽份,用稀释液稀释,每羽0.2mL。(含2000PFU)。【免疫期】　1年6个月。【注意事项】　①疫苗必须在液氮中贮藏及运输。②从液氮中取出后应迅速放于37℃温水中,待完…     

新城疫活疫苗(lasota株)溶解在不同温度水中病毒含量变化情况

通过试验检测鸡场常用的高端和低端两种新城疫(lasota株)活疫苗初始病毒含量(EID50/羽份),并模拟饮水免疫,将两种疫苗稀释后分别放在10℃、20℃和30℃温度中水浴中1 h、2 h和3 h,检测在不同温度、不同水浴时间下疫苗病毒含量(EID50/羽份)的变化,为生产中饮水免疫提供理论依据。结果表明:高端和低端新城疫活疫苗初始病毒含量分别为106.5 EID50/羽份和106.0 EID6.050/羽份,高端疫苗病毒含量高于国家标准(10 EID50/羽份)3.2倍,低端疫苗和国家标准一致;放置在水浴中的疫苗病毒含量随着时间增加呈下降趋势,水温越高下降越快;高端疫苗在10℃3 h、20℃2 h和30℃1 h条件下可以保证病毒含量(EID50/羽份)不低于国家标准,而低端疫苗无论溶解在哪个温度的水中后,进行免疫的病毒含量(EID50/羽份)都低于国家标准。     

表达鸡马立克氏病病毒糖蛋白B基因重组鸡痘病毒毒种的纯净性检验及冻干疫苗的保存期测定

为了检测高效表达鸡马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的纯净性,对纯化后的0代重组病毒毒种进行了细菌和支原体检验;并对中间试制的冻干疫苗在-20℃保存期进行了测定。结果表明,重组病毒毒种高度纯净,没有污染任何细菌或支原体,符合新制品制造和检验规程申报的要求;中试冻干疫苗在-20℃保存了12个月,病毒含量始终大于109PFU/mL,疫苗保存期可达12个月。     

表达鸡马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗的免疫效力

对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清型疫苗毒株CVI998/Rispens gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗时2种病毒的最适剂量配比进行了研究。试验表明,以对MD易感、MD和鸡痘病毒(FPV)抗体阴性SPF鸡为试验动物进行的试验中,不同免疫剂量的rFPV-gB/R(1×106、1×105、1×104PFU)同HVT组成的二价苗产生的免疫效力相当;以对MD易感、MD和FPV抗体阳性的狼山鸡进行的试验中,不同免疫剂量的rFPV-gB/R同HVT组成的二价苗产生的免疫力随rFPV-gB/R免疫剂量的降低而降低;所有的rFPV-gB/R+HVT的二价苗组均有一定的免疫保护作用。     

鸡马立克氏病的胚胎免疫试验

鸡马立克氏病(MD)是对养鸡业危害较大的疾病。虽然应用火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗以后，MD造成的损失已大幅度下降。但近年来，使用HVT疫苗后，鸡群大规模暴发MD的情况仍时有发生，其原因是多方面的。为了探讨鸡胚免疫的效果，并与雏鸡免疫接种的免疫效果比较，进行了下列试验。     

不同pH值的稀释液对马立克氏病冻干疫苗的稳定性作用

本试验将马立克氏病(MD)冻干疫苗稀释液用1NNaOH或1NHCl调成不同的pH值,分别稀释MD冻干疫苗(参照品),测定其稀释MD冻干疫苗后对疫苗的保护作用,以确定稀释液的最佳pH值范围。1　材料和方法1.1　MD冻干疫苗(参照品)　中监所生产。1.2　稀释液(SPG)　按《兽用生物制品质量标...     

表达MDV gB和/或鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒免疫效力试验

将表达鸡γ干扰素基因、表达MDV gB基因、共表达MDV gB和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒进行组合免疫观察在SPF鸡、狼山鸡中的免疫保护作用。在狼山鸡中随rFPV-gB剂量的减少，保护效力逐渐下降，而在SPF鸡中10^4与10^6PFU的rFPV-gB提供相同的保护效力，但存在减缓增重的副反应；在所有的疫苗组合中，由10^6PFU的rFPV-gB、10^5PFU的rFPV-IFN-Ⅱ和4000PFU HVT组成三价疫苗的保护效力最高且不影响增重，表明鸡γ干扰素既或降低重组鸡痘病毒的减缓增重的副反应，又具有免疫佐剂作用，与重组鸡痘病毒及HVT配合成疫苗是预防MD有效的冻干制剂。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养,加入适当的保护剂制成冻干疫苗.取3批冻干疫苗,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种14日龄和50日龄SPF鸡,接种剂量为5 × 106PFU,接种后3天出现局部反应,5天局部肿胀达到最大,接种鸡无其它全身反应,精神、食欲以及发育等均不受影响,说明重组病毒对试验鸡是安全的.取其中的200003批疫苗,用生理盐水作210-2～210-5稀释后,翅内侧无血管处皮下接种40日龄SPF鸡,免疫后4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒102株,结果表明,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力,在接种剂量为210-2～210-40.1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应,当接种剂量为210-50.2ml/鸡时可以使部分试验鸡(5/15)产生局部反应,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为210-40.1ml(相当于1000PFU).攻毒试验结果进一步证明,当接种剂量为210-40.1ml(相当于1000 PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒102株的攻击,降低鸡群的发病率和病死率.这些结果说明,疫苗接种后的局部反应与重组疫苗的免疫效力之间具有相关性,疫苗对接种鸡的局部作用反应了疫苗的免疫效力,我们研制的重组疫苗的最小免疫剂量为1000 PFU,这就为我们进一步考察疫苗的免疫效力试验奠定了基础.     

表达鸡马立克氏病病毒糖蛋白B基因重组鸡痘病毒毒种的纯净性检验及中试冻干疫苗的保存期测定

为了检测高效表达鸡马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒（rFPV-gB/R）的纯净性,对纯化后的0代重组病毒毒种进行了细菌和支原体检验;并对中间试制的冻干疫苗在-20℃保存期进行了测定。结果表明,重组病毒毒种高度纯净,没有污染任何细菌或支原体,符合新制品制造和检验规程申报的要求;中试冻干疫苗在-20℃保存了12个月,病毒含量始终大于109PFU/mL,疫苗保存期可达12个月。     

鸡胚免疫研究进展

由于鸡胚免疫系统并不活跃,家禽在出雏前获得人工主动免疫一直使人们难以相信。在美国,随着蛋内注射的采用,鸡胚免疫已成为现实。本文就近十年来(1982～1992)国内外对鸡马立克氏病(MD)、传染性法氏囊病(IBD)、鸡新城疫(ND)、传染性支气管炎(IB)及 ND IB、MD IBD 疫苗鸡胚免疫的研究情况作一综述。     

鸡马立克氏病免疫失败的原因及防制对策

马立克氏病是由马立克氏病毒(MDV)引起的鸡的一种淋巴组织增生性疾病,是具有高度接触性和传染性的肿瘤性疾病。未经免疫或免疫失败的鸡群患病后死亡率一般在25%～30%不等,最高可达70%～80%,严重时甚至全群覆灭。自20世纪70年代广泛使用火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗以来,本病造成的损失已大大下降。近年来世界各地相继发现毒力极强的马立克氏病病毒,疫苗免疫失败屡有发生,给本病的防制带来了新的问题。本人现将对MD的一些新认识提供给同行,以供参考。1MD免疫失败的原因1.1MDV的早期感染鸡的日龄越小,对MDV敏感性越高。据测定,1日龄雏鸡对MD…     

鸡马立克氏病预防实践中需要注意的问题

鸡马立克氏病(MD)自20世纪70年代初期以来,由于各种MD疫苗的广泛使用,马立克氏病在很大程度上得到了控制.但由于疫苗不可能百分之百的保护鸡群安全,加之超强毒马立克氏病病毒(vvMDV)的出现,因此,仍有MD的发生,尽管不像以前那么严重,但对养禽业仍带来一定的危害,下面就如何预防MD的发生,谈谈笔者的看法.     

马立克疫苗的质量检测及其对鸡源食品安全的影响分析

山东某种鸡场7个父母代鸡群应用2个批次马立克（MD）CVI988/Rispens疫苗免疫后仍发生疑似MD病。本研究对其送检的3瓶MD苗（2个批次，编号为F11、F21、F22，其中F21、F22为同一批次）进行了毒力测定及禽白血病病毒（ALV）的检测。结果显示：MD疫苗F11、F21、F22的毒力检测结果分别为800PFU/羽份、1300PFU/羽份、1480PFU/羽份，3瓶疫苗的毒力均低于国家兽医药典规定2000PFU/羽份的标准，F11低于OIE规定不少于1000PFU/羽份的标准；3瓶MD疫苗冻融后上清和细胞培养上清的p27抗原均为阳性；3瓶疫苗均检测出E亚型ALV（ALV-E）的囊膜蛋白（env）基因（PCR方法扩增2400bp片段，包括LTR序列），与经典ALV-E株RAV-0（E）、SD0501（E）的同源性为98.9%-99.4%。本研究发现，送检的3瓶2个批次MD疫苗存在毒力不足和内源ALV污染的质量问题，有可能是该种鸡群发生疑似MD病的原因之一。     

鸡马立克氏病HVT活疫苗稀释液的比较研究

对自制的鸡马立克氏病HVT冻干活疫苗四种稀释液与国内外6家公司的稀释液(市售)进行比较研究,以寻求一种适宜HVT耐热冻干活疫苗的优质稀释液。用不同稀释液稀释HVT活疫苗,在(20±2)℃放置1~4 h,测定病毒存活率。结果表明:自制的BSW稀释液稀释耐热疫苗放置1 h后,病毒存活率为97.3%,三种国产稀释液平均为70%,三种进口稀释液平均为77 %。BSW稀释液室温贮存2年后,再稀释疫苗置(20±2)℃ 1 h,测定病毒存活率,结果BSW稀释液(存活率84.5%)高于国产稀释液和进口稀释液18%以上。临床应用50万余羽份,反映效果良好。