驻马店地区规模猪场伪狂犬野毒感染情况血清学调查

正2016~2017年共跟踪调查了24个规模猪场,种猪存栏均在500头以上,主要调查对象为种公猪、经产母猪、后备猪及4月龄以上育肥猪;调查的24个规模猪场均免疫过伪狂犬冻干活疫苗,其中16个猪场免疫过Bartha-K61株、6个猪场免疫HB-98株,2个猪场免疫2000株,其中4个猪场在使用冻干苗的同时使用伪狂犬灭活疫苗,使用的伪狂犬疫苗均为g E基因缺失疫苗。     

猪伪狂犬病活疫苗（Bathar-K61株）免疫佐剂的筛选

为筛选到一种适合猪伪狂犬病活疫苗的免疫佐剂,本研究通过稳定性试验、病毒效价测定、安全性试验、效力试验对5种不同类型免疫佐剂(AD01、AD02、AD03、AD04和AD05)进行了比较筛选.稳定性试验结果表明,AD01、AD03、AD04和AD05 4种佐剂稀释疫苗后6h不分层,表现出良好的稳定性,而AD02佐剂稀释疫苗1h后出现分层;病毒效价测定结果表明,AD01、AD03、AD04 3种佐剂稀释后疫苗病毒滴度为106.25-6.50TCID50/100 μL,与对照组病毒滴度无差异,而AD05佐剂稀释疫苗后,测得的病毒滴度低于对照组,仅为103.5～5.17TCID50/100 μL,对病毒效价有干扰;安全性试验表明,用AD01佐剂稀释疫苗免疫猪群后,猪只体温升高,平均体温为(40.3±0.2)℃,20％(2/10)的猪只出现呕吐,40％ (4/10)的猪只出现食欲下降和精神不振的临床症状,AD03、AD04佐剂稀释疫苗免疫猪群后,临床表现无异常,与对照组一致;效力试验结果表明,剩余的AD03、AD04两种佐剂稀释疫苗后在第7天均可检测到中和抗体,第60天抗体中和效价平均值达到高峰,分别为69.8±3.3和69.5±2.8,高于对照组的57.8±7.0.筛选结果说明,AD03、AD04两种佐剂均适用于猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株),此研究为提高猪伪狂犬病活疫苗(Bathar-K61株)的使用效果进行了有益的探索.     

猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)保存条件的研究

为研究猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)在-15℃和2～8℃保存的稳定性,本试验选择了 6批试制疫苗以12个月有效期为基础,延长保存至21个月(即有效期后9个月)后按照质量标准进行性状观测、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、病毒含量测定、安全检验、效力检验、剩余水分测定、真空度测定.检测结果显示:6批猪伪狂犬...     

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)最小免疫剂量的研究

为了确定猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)的最小免疫剂量,本研究将3批猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)分别稀释成10TCID_(50)/mL、102.0TCID_(50)/mL、103.0TCID_(50)/mL,每批疫苗各个稀释度分别免疫仔猪1.0 mL/头,并设攻毒对照组和阴性对照组。免后10 d连同攻毒对照组用伪狂犬病病毒GD1株进行攻毒保护试验,阴性对照组不攻毒。结果表明,10TCID_(50)/头和102.0TCID_(50)/头的免疫剂量在免疫后10 d依然无法提供完全的免疫保护,保护率为20%～80%(1/5～4/5);103.0TCID_(50)/头的免疫剂量能够保护仔猪抵抗PRV强毒的攻击,保护率为100%(5/5);攻毒对照组发病率为100%(5/5),死亡率为80%(4/5);阴性对照组全部健活。由此确定猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)最小免疫剂量为103.0TCID_(50)/头。     

鸡马立克氏病HVT活疫苗稀释液的比较研究

对自制的鸡马立克氏病HVT冻干活疫苗四种稀释液与国内外6家公司的稀释液(市售)进行比较研究,以寻求一种适宜HVT耐热冻干活疫苗的优质稀释液。用不同稀释液稀释HVT活疫苗,在(20±2)℃放置1~4 h,测定病毒存活率。结果表明:自制的BSW稀释液稀释耐热疫苗放置1 h后,病毒存活率为97.3%,三种国产稀释液平均为70%,三种进口稀释液平均为77 %。BSW稀释液室温贮存2年后,再稀释疫苗置(20±2)℃ 1 h,测定病毒存活率,结果BSW稀释液(存活率84.5%)高于国产稀释液和进口稀释液18%以上。临床应用50万余羽份,反映效果良好。     

猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株和变异株主要免疫原性基因分析

自2011年底以来,我国多个省份暴发了猪伪狂犬病,一些研究院所证实当前猪伪狂犬病毒流行株发生了一定程度的变异,疫苗不能提供完全的保护。为了在分子生物学水平上比较不同厂家猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株,以及与当前流行的猪伪狂犬病病毒变异株,在主要免疫原性蛋白之间的差异,选取了4个厂家的活疫苗Bartha-K61株,通过二代测序方法进行测序,对Bartha-K61株gB、gC和gD这3种主要免疫原性基因以及推导出的氨基酸序列与变异株之间进行同源性分析。结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株gB蛋白序列中有23处特征性的差异,同源性为96.3%~96.9%;gC蛋白序列中有25处特征性的差异,同源性为92.7%~93.1%;gD蛋白序列中有10处特征性的差异,同源性为96.8%~97.3%;以gB、gC和gD氨基酸序列建立的进化分析结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株分属两个不同进化分支。     

猪伪狂犬病病毒HNX株在免疫猪群中水平传播能力的研究

为研究猪伪狂犬病病毒(PRV)HNX株水平传播的能力及PRV活疫苗的保护效力,本研究通过以颈部肌肉接种PRV HNX株(2 m L 107 TCID50)的未免疫猪作为病毒的传染源,同居感染未免疫猪和Bartha-K61株活疫苗免疫猪,通过检测抗PRV的g B和g E蛋白抗体、中和抗体及干扰素水平等评估疫苗保护力,并利用荧光定量PCR方法检测同居感染猪排毒情况。结果显示Bartha-K61株活疫苗能够快速诱导免疫猪产生抗g B蛋白的抗体,但疫苗诱导产生的交叉保护中和抗体水平较低。同居感染期间,免疫猪和未免疫猪均出现典型的临床症状,体温明显升高。荧光定量PCR方法结果显示,疫苗免疫能够减少免疫猪排毒,但不能阻止排毒,也不能阻止野毒感染。本研究结果表明Bartha-K61株活疫苗阻止PRV HNX株水平传播的效力是有限的,有必要更换疫苗病毒株。同居感染期间,每组感染猪均表现敏感,表明PRV HNX株病毒具有较强的水平传播能力。     

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)免疫产生期和免疫持续期的研究

为评价猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)的免疫保护效力,本研究对3批疫苗分别进行免疫产生期试验和免疫持续期试验。免疫产生期试验中将3批疫苗以单剂量免疫仔猪,在免疫后2、3、4、5、6 d连同对照组分别攻击伪狂犬病强毒,结果表明猪伪狂犬病活疫苗免后5 d即可产生坚强的免疫保护力。免疫持续期试验中将3批疫苗以单剂量免疫母猪,免疫后12、14个月连同对照猪分别攻击伪狂犬病强毒,结果显示免疫母猪及其所产仔猪均健康存活,表明猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)的免疫持续期可长达14个月。     

评估3种不同毒株的猪伪狂犬病活疫苗的免疫效果

猪伪狂犬病病毒变异株的流行对伪狂犬病的防控提出了严峻挑战,传统的疫苗对新流行毒株不能提供完全的保护。为评估3种不同毒株的活疫苗C株、HB2000株、Bartha-K61株的免疫效果,在某猪伪狂犬病gE抗体阴性猪场进行试验。结果显示,虽然3组疫苗1次和2次免疫后gB抗体阳性率达到100%,但是中和抗体的效价差异显著。从经典毒株HB-J和变异毒株CW的中和试验结果看,C株产生的平均中和抗体效价均为最高,显著高于HB2000株和Bartha-K61株,提示C株免疫效果优于HB2000株和Bartha-K61株,可以作为防控猪伪狂犬病的高效疫苗。     

含硒型牛副伤寒活疫苗保存期试验的研究

为了弄清含硒型牛副伤寒活疫苗及其专用稀释液的最佳保存条件及保存期,将四批含硒型牛副伤寒活疫苗(批号200001、200101、200102、200201)分别置-20℃、0～4℃、15～21℃保存不同时间后,检查其活菌率及其对豚鼠的免疫效力;同时用3批含硒型牛副伤寒活疫苗专用稀释液(批号200101、200201、200202)分别置室温(15～21℃)下保存不同时间后,检查其物理性状及灭菌状态.结果显示,这四批疫苗于-20℃保存24个月、0～4℃保存12个月、15～21℃保存2个月,活菌率均在80%以上,对豚鼠的免疫效力均合格;同时这三批含硒型牛副伤寒活疫苗专用稀释液于15～21℃保存12个月外观物理性状及无菌检验均合格.因此,含硒型牛副伤寒活疫苗保存期暂定为-20℃ 24个月、0～4℃ 12个月、15～21℃ 2个月;保存专用稀释液15～21℃(室温)保存期暂定为12个月.     

四种方法测定伪狂犬病活疫苗病毒含量的稳定性对比试验

分别采用10 mL细胞培养瓶和96孔细胞培养板，采用不同条件培养病毒和不同稀释液稀释病毒，以检测伪狂犬病活疫苗病毒含量和比较结果的稳定性。结果显示，使用A、B、C、D四种方法测定伪狂犬病活疫苗病毒含量，对其稳定性的影响差异不显著；在生产实践中，因其便利性和实用性，采用细胞板测定法逐渐成为生产企业的首选，并有替代细胞瓶测定法的趋势。     

使用液氮保存疫苗应注意哪些事项

液氮冰冻（－１９６℃）保存的疫苗应定期检查液氮罐中液氮含量是否足够，随时添加，厂家配备的专用稀释液应置于室温环境下存放。疫苗使用的具体操作程序如下：①带上保护眼镜和手套，右手用长镊子从液氮罐中小心取出疫苗安瓶；②每次只取出一安瓶的冰冻疫苗，然后立即放入２７℃的温水中进行解冻；③轻摇疫苗安瓶，并在６０秒之内使安瓶中的疫苗完全解冻；④疫苗解冻后应立即把瓶盖打开，用１８号针头把安瓶中的已解冻的疫苗慢慢地吸取出来；⑤缓慢地把疫苗沿稀释液瓶壁注入稀释液中，并反复冲洗安瓶数次；⑥轻轻地把稀释液瓶摇动数次，以…     

猪伪狂犬病病毒高免血清的制备及应用

用伪狂犬病病毒及抗体阴性羊,以不同免疫剂量,间隔一定时间,多次免疫不同类型的猪伪狂犬病病毒(Bartha-K61株),制备猪伪狂犬病病毒高免血清,特异性强,效价可达1:2 048以上。本研究为伪狂犬病活疫苗或毒种的鉴定及外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。     

新城疫活疫苗(lasota株)溶解在不同温度水中病毒含量变化情况

通过试验检测鸡场常用的高端和低端两种新城疫(lasota株)活疫苗初始病毒含量(EID50/羽份),并模拟饮水免疫,将两种疫苗稀释后分别放在10℃、20℃和30℃温度中水浴中1 h、2 h和3 h,检测在不同温度、不同水浴时间下疫苗病毒含量(EID50/羽份)的变化,为生产中饮水免疫提供理论依据。结果表明:高端和低端新城疫活疫苗初始病毒含量分别为106.5 EID50/羽份和106.0 EID6.050/羽份,高端疫苗病毒含量高于国家标准(10 EID50/羽份)3.2倍,低端疫苗和国家标准一致;放置在水浴中的疫苗病毒含量随着时间增加呈下降趋势,水温越高下降越快;高端疫苗在10℃3 h、20℃2 h和30℃1 h条件下可以保证病毒含量(EID50/羽份)不低于国家标准,而低端疫苗无论溶解在哪个温度的水中后,进行免疫的病毒含量(EID50/羽份)都低于国家标准。     

猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断、血清学调查以及控制措施

目的为某规模化猪场猪伪狂犬病病毒野毒株感染防控工作提供科学的免疫防控方案。方法对某发病猪群（采用Bartha-K61经典毒株疫苗进行了猪伪狂犬病免疫）进行流行病学调查,并采用ELISA方法检测其猪伪狂犬病gB抗体和gE抗体水平。结果根据调查、解剖和血清抗体检测结果,初步确诊该发病猪群为猪伪狂犬病野毒感染。通过采取紧急免疫伪狂犬病HB2000毒株疫苗、调整免疫程序和配合药物治疗等措施,育肥猪死亡率从2.56%降低至0.60%;除了4周龄及12周龄猪群外,其余猪群伪狂犬病野毒抗体水平全部下降;种公猪、8周龄、10周龄、14周龄猪群伪狂犬病野毒抗体阳性率均为0。结论Bartha-K61经典毒株疫苗并不能提供完全的保护力,通过紧急免疫与流行毒株同源性较高的HB2000毒株疫苗,加强生物安全管理工作,能够有效控制猪伪狂犬病野毒感染。     

伪狂犬净化要同时做好野毒和疫苗毒抗体检测

正当今流行的伪狂犬的确是发生了变异,主要体现在毒力及抗原性发生了变化。抗原性发生变化关系到现有的疫苗是否能够很好的保护猪群。根据一些学术试验结果,先免疫Bartha-K61毒株的疫苗,然后用现在流行的伪狂犬毒株攻毒,结果是只有50%的保护率,表明抗原性发生了一定的改变。但这并不能说     

鸡新城疫耐热保护剂活疫苗(La Sota株)保存期试验

本实验将NDV La Sota株耐热保护剂活疫苗分别放入37℃、常温、2~8℃进行NDV La Sota株耐热保护剂活疫苗保存期试验。在37℃保存7d、10d、15d,将疫苗分别取出,进行病毒含量测定、性状检验。在常温保存10d、20d、30d,将疫苗分别取出,进行病毒含量测定、性状检验。在4℃保存9、12、15、18、24、27个月,按规定日期取出疫苗,进行疫苗的效力检验及外观性状检验。最后得出结论:耐热保护剂活疫苗可在2~8℃保存24个月。     

猪伪狂犬病病毒HDDJ株的分离鉴定

广东省某猪场常规免疫猪伪狂犬病疫苗(Bartha-K61株)的母猪流产,疑似为猪伪狂犬病病毒感染。为确定发病原因,将流产胎儿的脑、淋巴结、肺脏研磨混合液接种Vero细胞,形成稳定细胞病变(CPE),并测定其细胞半数感染量(TCID50),通过PCR鉴定、测序比对、进化树分析,确定感染病毒及基因型,动物回归实验判定病毒致病性。结果表明,分离毒株为PRV中国变异株,命名为HDDJ株,与猪伪狂犬病疫苗Bartha-K61株亲缘关系较远。     

当前伪狂犬流行毒株毒力分析及疫苗免疫策略

正通过在绵羊上做攻毒试验,了解不同伪狂犬疫苗毒株对变异株攻毒后保护情况。结果显示目前市面上的疫苗Bartha-K61株(包括国内外的)以及其他毒株保护率只有0~25%。因此讲,现有国内外猪伪狂犬疫苗毒株均不能完全保护新流行毒株的攻击。1当前伪狂犬流行毒株毒力分析2011年以前,由于疫苗普遍接种并配合g E抗体鉴别诊断技术,临床典型病例已较少,很多规模化猪场伪狂犬病基本达到净化。2011年之后,     

疫苗使用注意事项

<正>1疫苗的选购在购买及使用疫苗前,应仔细了解疫苗的生产日期、失效期、保存方法、剂量、稀释液、稀释方法和使用方法等。2疫苗的保存活疫苗与活菌苗必须低温冷藏。多数要求放在-15℃的温度避光保存。温度越低保存的时间越长。如:弱毒活疫苗(新禽冻干苗、猪瘟脾淋苗)应在-15℃避光贮藏,夏季运输应用带有冰袋的保温