长效清消毒剂对鸡新疫病毒和传染性法氏囊病病毒的杀灭效果

长效清是一种新研制的缓释醛类消毒剂，分别与鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）作用后，接种鸡只，根据发病与死亡情况和ＩＢＤＶ琼扩沉淀反应结果判定长效清的灭毒效果。结果发现，长效清对ＮＤＶ的有效杀灭浓度为０．５％，感作时间不少于１０分钟对鸡ＩＢＤＶ的有效杀灭浓度为０．５％，感作时间至少１５分钟。     

鸡新城疫／传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（Ⅲ）

用同胚培养的含ＮＤＶ、ＩＢＶ胚液制备的二联油乳剂灭活苗，经免疫效力试验表明，用５０倍稀释的鸡二联灭活苗，０．５ｍｌ／只剂量免疫１８日龄鸡，４周后试验免疫鸡分别进行ＮＤＶ、ＩＢＶ强毒攻击，攻毒保护率在５０％以上，证明０．５ｍｌ剂量含有５０个半数保护量（５０个ＰＤ５０），ＮＤＨＩ抗体≥１：１６，ＩＢＶＮ抗体≥１：８便可保护。三批疫苗免疫１８日龄鸡，０．５ｍｌ／只组免疫鸡体现人有效抗体可维持１６周以上，     

同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应答反应

鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）混合在同一鸡胚中增殖,当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时,最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度,且在这一时间内不至于因孵育时间过长而致ＩＢＶ毒力减弱。结果表明ＮＤＶＬａｓｏｔａ株经１０倍稀释分别与４株ＩＢＶ１０００倍稀释液等体积混合后接种,能在同一鸡胚中正常增殖,即９６ｈ收毒,血凝（ＨＡ）方法测定两种病毒的血凝价均能达到最佳滴度,其血凝价不低于各自单独增殖的滴度。４种ＩＢＶ株与ＮＤＶ同胚增殖的ＨＡ滴度进一步证实,在合适的条件下,ＩＢＶ均不对ＮＤＶ的复制产生干扰作用,４种ＩＢＶ的血凝价无明显差异。免疫试验中用同胚增殖两种病毒二联苗接种,鸡体血清中可产生抗两种病毒的ＨＩ抗体,与各自单独接种时的ＨＩ抗体水平几乎一致。本试验中制备的ＩＢ血凝抗原在４℃保存一个月,其血凝活性保持不变。ＩＢＶ微量血凝抑制（ＨＩ）试验特异性测定结果证实,用自制ＩＢＶ血凝抗原进行ＨＩ试验检测鸡ＩＢ阳性血清均能产生稳定的特异性反应,并且无交叉反应。说明ＨＩ试验是检测ＩＢＶ抗体水平的有效可行的方法。     

同胚增殖鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果观察及免疫应 …

鸡新以病毒和鸡染性支气管炎病毒混合在同一鸡胚中增殖，当ＮＤＶ和ＩＢＶ接种浓度控制在一定范围时，最佳收毒时间选择使ＮＤＶ有足够时间增殖到最佳滴度，且在定时间内不至于因孵育时间过长耐 ＩＢＶ毒力减弱。     

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)干扰新城疫病毒(NDV)增殖现象的研究

ＩＢＶ毒株Ｈ１２０、Ｈ５２、ＭＡ５对ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ的干扰实验证明ＩＢＶ特异性干扰ＮＤＶ增殖。１）采取不同顺序的同胚接种法：ＩＢＶ接种之后再接种ＮＤＶ;或ＮＤＶ接种之后再接种ＩＢＶ,及ＩＢＶ,ＮＤＶ同时接种,ＩＢＶ均干扰ＮＤＶ的增殖。２）ＮＤＶ接种３６小时之内,干扰现象最为明显,Ｈ１２０,Ｈ５２的干扰能力稍强于ＭＡ５。３）ＮＤＶ血清中和实验结果显示,不同顺序同胚接种ＮＤＶ、ＩＢＶ时,ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ不影响ＩＢＶ的增殖能力。同胚增殖ＩＢＶ,ＮＤＶ的关键是控制ＮＤＶ、ＩＢＶ的接毒量及选择合适的收毒时间。     

巢式PCR快速鉴定鸡传染性支气管炎病毒的研究

鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）经鸡胚增殖后,直接用尿囊液提取ＲＮＡ后反转录成ｃＤＮＡ,用ＩＢＶ基因３’端的ＵＴＲ１－／ＵＴＲ２＋和ＵＴＲ３－／ＵＴＲ４＋两对引物进行巢式ＰＣＲ,所检测的４个ＩＢＶ标准参考株和１６个ＩＢＶ野毒株均得到了预期的１７４ｂｐ大小的片段,而鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）,鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）及正常鸡胚尿囊液经同样处理没有可见片段出现。本试验不需纯化册毒只需０５ｍｌ病毒尿囊液即可在２４小时内得到准确的试验结果。这表明与其它ＩＢＶ鉴定方法相比,该法具有快速、灵敏、特异的优点。     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

PCR检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济     

单抗免疫过氧化物酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒

以抗鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）的单抗株６ＤＨ８作为一抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗,建立了检测石蜡切片中ＩＢＶ抗原的单抗免疫过氧化物酶技术（Ｍｃ－ＩＰ）,并对人工攻毒鸡及临床ＩＢＶ感染疑似鸡进行了检测。在ＩＢＶＭ４１株人工攻毒鸡,用该技术于１～１２ｄ从气管、２～７ｄ从肾脏可以检测到ＩＢＶ抗原,阳性染色集中于气管粘膜上皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆;临床疑为ＩＢＶ感染的病鸡,以Ｍｃ－ＩＰ技术和单抗免疫荧光试验（Ｍｃ－ＩＦＡ）同时进行检测,结果阳性率分别为９０．３％及８３．９％。     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

Dot—ELISA间接法检测鸡新城疫病毒（NDV）的研究

常规方法分离纯化鸡ＩｇＧ,免疫羊制备羊抗鸡ＩｇＧ二抗,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记制备酶标记物的工作浓度为１：１０００;选用硝酸纤维素（ＮＣ）膜作固相载体,建立检测ＮＤＶ抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。检测ＮＤＶ鸡胚毒４０份,阳性检出率１００％;人工感染非免疫鸡的气管组织、肺组织各４７份,检出率为９３．６％;人工感染ＳＰＦ鸡气管组织、肺组织各４０份,检出率１００％。与传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）无交叉反应。试验显示该方法简便、特异、快速、结果直观,便于生产应用     

中药病毒克防治鸡病毒性疾病试验

中药“病毒克”用于治疗鸡非典型性新城疫，传染性法氏囊病，鸡痘，马立克氏病，减蛋白综合症，传染性脑脊髓炎６种病毒病，治愈率分别为８８．５３％，９７．１１％，８８．９２％，８０．４２％，９９．９５％，９８．６７％，对人工感染ＮＤＶ（鸡新城疫病毒）和ＩＢＤＶ（鸡传染性法氏囊病毒）的病鸡治愈率为６３．１６％，９３．３３％。该药还能提高鸡体的ＮＤＨＩ效价，ｒ球蛋白含量，淋巴细胞转化率和Ｅ玫瑰花环形成率，并降     

火鸡疱疹病毒（HVT）抗血清的制备及检测

制备２批抗火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）血清，无菌检验合格，与鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊炎病毒（ＩＢＤＶ）和Ｒｅｏ无交叉中和反应。蚀斑减少试验结果表明当病毒含量为１０个、５个羽份／０．１ｍｌ时，中和后尚有一些蚀斑存在。病毒含量为３．３羽份／０．１ｍｌ或更低时，中和后未见典型蚀斑存在     

PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。     

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。     

鸡群感染IBD强毒对ND免疫抑制的实验观察

６周龄商品ＡＡ肉鸡单独感染鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）强毒（ＩＢＤＶ）后，紧急注射ＩＢＤ高免卵黄，可在２天内得到控制；单独感染新城疫（ＮＤ）强毒后，紧急注射ＮＤⅠ系疫苗，可在５天内得到控制；而混合感染ＩＢＤＶ和ＮＤＶ或感染ＩＢＤＶ后继发感染ＮＤＶ，紧急注射ＮＤⅠ系疫苗，未能在７天内控制疫情。由此证明鸡群感染强毒ＩＢＤＶ可对ＮＤ产生严重免疫抑制。     

禽用生物制品外源病毒监测研究—鸡传染性法氏囊炎疫苗外源病毒检测

原倍鸡传染性法氏囊炎（ＩＢＤ）高免血清可以中和１０个羽份ＩＢＤ病毒；中和后的病毒接种鸡胚卵黄囊后继续孵化至出雏，雏鸡健活；用ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒和鸡鹌鹑痘病毒模拟污染ＩＢＤＶＢ８７毒再经ＩＢＤ高免血清中和，可以检出模拟污染的病毒；高免血清可以中和１０个羽份的ＩＢＤ疫苗毒。     

表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。     

应用三重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡３种病毒性呼吸道传染病的研究

根据鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）和鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的基因文库，设计了３对分别与ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＩＬＴＶ某段基因序列互补的引物。用这３对引物对同一样品中的ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＬＴＶ核酸模板进行三重ＰＣＲ扩增，结果均同时得到了３条与设计相符的３１０bp（ＮＤＶ）、１７２０bp(ＩＢＶ）和６４７bp(ＩＬＴＶ）三重ＰＣＲ扩增带，而对其他６种禽病病原的ＰＣＲ扩增结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该三重ＰＣＲ技术能检出１０pg的ＩＢＶ、１pg的ＮＤＶ ＲＮＡ模板和１０pg的ＩＬＴＶ ＤＮＡ模板。