水貂阿留申病对犬瘟热及细小病毒性肠炎疫苗免疫的影响

对81份水貂血样进行了水貂阿留申、犬瘟热及细小病毒性肠炎的抗体进行检测,并对检测结果进行了对比分析,表明阿留申抗体阳性水貂的犬瘟热及细小病毒性肠炎抗体合格率、均值,均远低于阿留申抗体阴性貂,验证了阿留申病对水貂的免疫应答有较为明显的影响。     

水貂阿留申病对水貂产仔性能及成活数量的影响

为了确定水貂阿留申病对水貂的产仔数、成活数的影响程度,试验采用水貂阿留申病毒抗体胶体金检测试纸条对吉林、大连、山东等地的4个水貂养殖场的1 458只母貂进行了水貂阿留申病毒抗体检测。检测过程中笔者根据检测结果将水貂体内阿留申病毒抗体分成四个等级:阴性、弱阳性、阳性、强阳性,并且对受检母貂的产仔数、幼仔成活数进行了统计。结果表明:水貂阿留申病阴性貂平均产仔数4.15只,平均成活数为4.11只;弱阳性貂平均产仔数为2.85只,平均成活数为2.85只;阳性貂平均产仔数为2.38只,平均成活数为2.20只;强阳性貂平均产仔数为2.67只,平均成活数为2.00只。由此看出,水貂阿留申病对水貂的产仔数、成活数有很大的影响,阴性水貂比阳性水貂平均产仔数多1.30~1.77只,而成活数方面阴性貂要比阳性貂高1.26~2.11只。     

水貂犬瘟热病毒核衣壳基因TaqMan荧光定量PCR方法的建立

为了建立快速检测水貂犬瘟热病毒的TaqMan荧光定量PCR方法,试验根据犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因的保守区域设计一对特异引物和探针,优化体系反应条件,并进行敏感性试验、特异性试验、重复性试验和水貂外周血淋巴细胞感染犬瘟热病毒后的检测。结果表明:建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法最低检出量为3.96个拷贝;与水貂细小病毒、水貂阿留申病毒均无交叉反应;批内重复和批间重复循环阈值(Ct)变异系数均小于1%;应用该方法可成功检出水貂外周血淋巴细胞中的犬瘟热病毒。说明建立的检测方法敏感性、特异性、重复性好,可以用于水貂犬瘟热病毒的临床检测。     

水貂阿留申病PCR检测方法的建立及应用

为了对水貂阿留申病毒(ADV)进行快速、准确地鉴定,试验根据基因库中ADV的NS1基因核苷酸序列,设计合成了一对特异性引物,经过反应条件的优化,建立了水貂阿留申病的PCR检测方法,对阳性病料进行特异性核酸扩增及产物测序,并对水貂肠炎细小病毒(MEV)、犬瘟热病毒(CDV)等病原核酸进行扩增检测该方法的特异性;用10倍系列稀释的ADV进行扩增检测敏感性;用该方法检测临床样品并与对流免疫电泳法进行了比较。结果表明:ADV阳性样品有明显目的条带(365 bp)出现,MEV、CDV均无特异条带出现,最低能检测到的病毒核酸量为2.53 ng/μL;临床样品检测表明PCR检出率为90%,对流免疫电泳法检出率为83%。     

水貂养殖场预防阿留申病扩散的生物安全措施

正众所周知,水貂阿留申病在母兽产仔率、仔兽成活率、水貂免疫力等多个方面严重影响养殖场的生产成绩,目前阿留申病已经成为国内水貂养殖生产水平提高的重要阻碍。一些养殖场近几年从国外引进阿留申病阴性水貂种群,为国内的养殖场提供种源。一些有认识、有能力的养殖场也开始进行阿留申病的检测,检测完成后淘汰阳性水貂。这些养殖场都面临着一个重要的挑     

水貂阿留申病毒地方强毒株ADV-LN的分离鉴定

本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3 d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。     

水貂阿留申病诊断抗原研究概述

近年来,随着水貂养殖行业的不断发展,一些疫病也成为了制约水貂养殖业发展的重要因素。水貂阿留申病作为毛皮动物的三大疫病之一(阿留申病、犬瘟热、病毒性肠炎),是导致母貂产仔率下降、公貂配种能力降低和毛皮质量下降的一种高度接触性传染病。至今为止,还没有商品化的疫苗来控制该病的传播及蔓延。控制水貂阿留申病最好的方法是通过检测淘汰所有抗体为阳性的水貂,进而达到净化貂群的目的。而在抗体检测过程中,诊断抗原的制备和纯化决定着检测方法的敏感性、特异性和准确性。论文对目前阿留申病毒细胞抗原及基因工程抗原研究进展做一综述,为今后该病病原检测工作提供参考。     

水貂犬瘟热病毒分离鉴定及其H基因序列分析

为了解山东地区水貂犬瘟热病毒(CDV)遗传变异特征,采集水貂养殖场的发病水貂病料,通过RT-PCR鉴定为CDV阳性,将阳性病料接种Vero/Dog SLAM细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光、电镜负染、测序等方法鉴定,得到4株犬瘟热病毒,分别命名为WD1株、WD2株、WX1株和WX2株。分离株H基因测序结果显示,WD1株、WD2株、WX1株均为Asia-Ⅰ型,其中WD1和WD2与近几年仅在水貂和狐狸养殖场流行的新犬瘟热毒株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为97.5%~99.2%和97%~99%;WX-1型与国内犬源HL001株的同源性最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.6%和99.5%;WX2与疫苗株同属于一个分支,与疫苗毒Lederle株核苷酸和氨基酸序列同源性高达99.5%和98.8%。结果表明,水貂养殖场存在多株犬瘟热病毒混合感染的情况,提醒养殖场应注意防控,该结果也为犬瘟热病毒分子流行病学积累了资料。     

一起猪瘟和沙门氏菌混合感染的诊治与防控

为了诊断延边朝鲜族自治州和龙市某养殖场猪群所发疾病,试验通过流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、病死猪肝脾直接涂片观察、细菌学检测、利用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒(PCV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)及猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行检测,并根据诊断结果进行治疗与防控。结果表明:沙门氏菌和猪瘟病毒(CSFV)检测阳性,诊断该养殖场猪群所患疾病为猪瘟病毒和沙门氏菌的混合感染。用药治疗后,治愈55头(治愈率70.51%),死亡23头(病死率29.49%),疫病得到控制。     

一株水貂源伪狂犬病毒株的分离鉴定

从辽宁大连疑似水貂伪狂犬病发病死亡水貂脑、内脏中及饲喂的猪肝中分离到1株病毒并进行了鉴定。该分离毒株接种BHK-21细胞24 h后出现圆缩、聚集、脱落等典型的细胞病变(CPE);分离毒株能够被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和;分离病毒接种家兔后,引起家兔出现奇痒等典型的伪狂犬病临床症状;同时根据Gen Bank公布的PRV的Tg ET基因设计引物并扩增出特异性的目的片段,扩增产物经过测序比较,表明扩增产物序列为猪伪狂犬病毒g E基因序列。以上结果表明,该病毒为伪狂犬病毒,依据来源确定为水貂源性伪狂犬病病毒株。     

水貂肺炎综合征的鉴别诊断

水貂肺炎严重影响着水貂的的生产性能,有的长期咳嗽造成慢慢消瘦,有的造成急性死亡,特别是激素水貂换毛期感染绿脓杆菌引起的出血性肺炎造成大面积死亡,成为继犬瘟热、肠炎、阿留申之后的的第四大流行病,引起各大养殖场的重视。下面就几种引起水貂肺部病变的几种细菌性疾病鉴别诊断进行归纳。     

规模猪场猪伪狂犬病的诊断实例

天津某规模猪场发生妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,分别对流产胎儿的组织和母猪血清进行了实验室检测。流产胎儿的组织经PCR或RT-PCR检测,猪伪狂犬病毒(PRV)为阳性,猪圆环病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为阴性。经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测胎儿组织为阳性,检测母猪血清中猪伪狂犬gE抗体为阳性;用病毒的分离培养试验分离到了猪伪狂犬病毒,根据临床症状、抗原抗体检测及病毒的分离培养试验确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

水貂阿留申病的防控措施

正水貂阿留申病广泛流行于世界各养貂国家,我国各养貂场均有此病发生,本区的水貂养殖场水貂阿留申病都有不同程度的感染,2014年,本区两水貂养殖场部分水貂,经对流免疫电泳检测,阿留申阳性率分别达到87.8%(36/41)和77.3%(17/22)。水貂阿留申病的危害很大,严重影响毛皮动物的繁殖能力,免疫机能和毛皮质量。1水貂阿留申病的流行特点     

水貂阿留申病灭活疫苗免疫效果观察

为评价水貂阿留申病灭活疫苗的免疫效果 ,对接种疫苗水貂及阿留申病阴性、阳性水貂的死亡、空怀、流产、产仔、产仔成活数进行了比较 ,结果证实 ,水貂阿留申病灭活疫苗对水貂具有较好的免疫保护作用。     

水貂阿留申病病毒CIEP抗原结合蛋白初探

以水貂阿留申病病毒对流免疫电泳(CIEP)细胞抗原为材料,经酶印迹(Westemblotting)测定,水貂阿留申病病毒CIEI细胞抗原与多克隆阳性血清反应,分子量为60000,50000和25000,而与CIEP阴性的抗水貂阿留申病病毒的单克隆抗体(Y—2—9)反应,分子量为60000,50000.因此初步确定水貂阿留申病病毒CIEP细胞抗原决定族位于分子25000蛋白上.     

2014-2015年红岛地区水貂阿留申病的流行病学调查研究

<正>为了解2014~2015年山东省青岛市红岛地区水貂阿留申病的流行情况和发病率,对红岛地区某水貂养殖场里的部分水貂采用剪脚趾的方法进行了血清取样,并分别采用碘凝集和对流免疫电泳两种试验方法进行血清学检测,进而总结红岛地区水貂阿留申病的发病率与流行状况。结果显示,红岛地区阿留申病的阳性检出率为63.33%以上,表明红岛地区水貂阿留申病的流行情况较为严重。     

山东规模化养殖场毛皮动物多重感染病原学分析

2012—2013年间,山东10个地市多家毛皮动物养殖场养殖的毛皮动物（狐狸、貉子、水貂）出现腹泻,皮肤湿疹,神经症状,空怀、流产、出血性肺炎等症状和病变类似的疫情,为探明其病因,本研究对发病规模化毛皮动物养殖场发病情况进行调查,并对送检的病料进行病原学检查,结果发现,犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒感染率分别为54.21%、47.30%、31.35%;肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、沙门杆菌、绿脓杆菌、加德纳菌的感染率分别为37.58%、25.05%、21.81%、14.04%、12.53%、10.37%、8.21%;犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌6种病原的单独感染、二重感染、三重感染、四重感染分别为22.03%、39.52%、36.07%、2.38%,未见五重以上的感染。结果表明,近两年造成山东规模化场毛皮动物发病主要原因是由犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒与肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌多重感染所致,这为规模化毛皮动物养殖场有效地控制疫病提供了理论依据。     

鉴别犬瘟热病毒强弱毒株SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立犬瘟热强弱毒株SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据Gen Bank公布的犬瘟热毒株的全基因序列并参考相关文献,选择M基因保守区域合成了1对通用引物M1/M4及鉴别犬瘟热强弱毒株的特异引物M2和M3。试验证明,该方法重复性良好;检测强弱毒株的最低检出限度在10拷贝;对新城疫病毒、水貂肠炎病毒、阿留申病毒、犬腺病毒、犬细小病毒5种病毒的特异性检测均为阴性;对175份犬瘟热疑似病料进行荧光定量RT-PCR,检出127份阳性样品,其中强毒株98份,弱毒疫苗株29份,常规RT-PCR检出112份阳性样品。结果表明,该方法的敏感性高于常规RT-PCR检测,并能有效的鉴别强弱毒株。     

水貂阿留申病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用

为建立便捷、灵敏的水貂阿留申病病毒(AMDV)纳米PCR检测方法,根据AMDV NS1基因的保守序列设计一对特异性引物,对纳米PCR反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化;测序检测扩增基因是否发生变异;对特异性和灵敏度进行了评估。结果表明,此纳米PCR的最佳退火温度为51℃,普通PCR为55℃;加入胶体金最佳浓度在0.2~0.8nmol·L-1,纳米PCR与普通PCR产物测序相似性大于99%。特异性检测表明该纳米PCR方法只扩增AMDV而不能扩增犬瘟热病毒和水貂肠炎细小病毒。在粪尿样品检测中该纳米PCR敏感性比普通PCR高10倍。检测40份临床样品,结果表明该方法比对流免疫电泳检测敏感性提高,从而为用粪、尿等低病毒样品检测水貂阿留申病提供了一种新的有效方法。     

水貂阿留申病对流免疫电泳(CIEP)操作方法及结果判定

水貂阿留申病是水貂的主要传染病之一,每年给水貂养殖业造成巨大的经济损失。本病至今缺乏特异性防治方法。用对流免疫电泳试验逐年检测貂群,严格剔出阳性病貂,保留阴性水貂以作繁殖,是日前世界上防制本病,净化阿留申病阳性水貂场的最有效办法。农牧渔业部动物检疫所采用猫肾传代细胞(CRFK)和阿留中病毒Utah-1国际标准毒株,在国内首次研制成功阿留申病病毒传代细胞抗原。这种抗原具有成分单纯、特异性强、沉淀线清晰、检出率高和成本低、方法简便、适于大批量生产等特点,与国外同类产品相比,结果完全一致,是口岸检疫和貂场净化的理想试剂。