五种牧草及三种草坪草种子寄藏真菌检测初探

采用PDA平皿法和滤纸法检测了市售5个牧草品种和3个草坪草品种种子样品寄藏真菌的情况,并就分离获得的真菌对种子出苗及幼苗生长的影响进行了初步研究.结果表明,供试种子样品带菌率为0～70.5%,分离获得的35个真菌分离物大多属于镰刀菌(Fusarium spp.)、链格孢菌(Alternaria spp.)、蠕孢菌(Helminthosporium spp.)、小核菌(Sclerotium sp.)、匍柄霉菌(Stemphylium spp.)和曲霉菌(Aspergillus spp.).供试样品中假俭草和波多马各(鸭茅)种子带菌率较高,在PDA平皿检测中其未经表面消毒处理的种子带菌率分别为48.4%和70.5%,表面消毒处理种子带菌率分别为40.8%和28.8%,分离获得的种子寄藏真菌对假俭草和波多马各种子出苗及幼苗生长的影响较小.圣地亚哥(南苜蓿)和菊苣种子带菌率较低,但分离获得的真菌对其种子出苗和幼苗生长的影响较大.以镰刀菌与匍柄霉菌接种过的南苜蓿种子出苗率分别比未经表面消毒且未接种真菌的对照低44.0%和21.7%,出苗后的病苗率分别为22.7%和29.7%;以链格孢菌与曲霉菌接种过的菊苣种子的出苗率分别比未经表面消毒且未接种真菌的对照低22.0%和27.5%,出苗后的病苗率分别为2.3%和29.3%.     

中华羊茅丸粒化处理后种带真菌的初步检测

为了研究牧草种子丸粒化技术,试验采用平皿测定法对中华羊茅丸粒化处理后种带真菌进行了检测。结果表明:中华羊茅丸粒化处理后种子外部带真菌的带菌量为34 400 cfu/g,裸种子外部带真菌的带菌量为26 600 cfu/g;丸粒化处理后种子外部带真菌的种类主要是青霉属(penicillium)、根霉属(Rhizopus)、镰刀菌属(Fusarium)、交链孢菌属(Alternaria)和附球菌属(Epicoccum Link),同时还检出了曲霉属(Aspergillus)、毛霉属(Mucor)、丝核菌属(Rhizoctonia)、腐霉属(Pythium)等真菌。无论是中华羊茅丸粒化处理后的种子还是裸种子,种子内部带真菌的种类主要是镰刀菌属(Fusarium)、青霉菌属(Penicillium)、交链孢菌属(Alternaria)和根霉属(Rhizopus);与裸种子内部带真菌相比较,丸粒化处理后种子内部带真菌的种类变化不大,但丸粒化处理后种子内部带真菌的带菌率有所增加,而且种子内部带真菌的分离频率也有所增加。     

紫花苜蓿无菌苗培养前的种子消毒技术研究

经过不同消毒处理的苜蓿种子的消毒效果表明:种子在消毒前,经无菌水浸泡24h(预处理)比不浸泡的消毒效果好,但是浸泡后,用酒精消毒时间不宜过长:2%次氯酸钠、10%次氯酸钙、0.1%升汞3种消毒剂中,0.1升汞消毒效果最好,种子带菌率为0,用75%的乙醇预处理可大幅度降低种子的带菌率;3种消毒剂中0.1%升汞处理的苜蓿种子发芽率较高.     

32个紫花苜蓿品种的种带真菌种类及致病性研究

植物病原菌通过种子可进一步在时间上延续和空间上传播。为确定我国目前主要种植的苜蓿品种是否携带苜蓿黄萎病菌等毁灭性病害的病菌和其他重要病菌,为苜蓿的引种调运和病害防治提供数据支撑,本研究从我国苜蓿育种者和经营进口苜蓿种子的公司收集了32个苜蓿品种,采用PDA平皿法分离并鉴定了种带真菌,采用浸种法测定了其对中苜3号的种子萌发、幼苗生长的致病性影响。结果表明,供试种子中未检测出苜蓿黄萎病菌及其他生产上的检疫性病原菌,苜蓿种子上的真菌主要为环境普遍存在的链格孢属、青霉属、曲霉属等真菌,共有19属20种;不同品种的种子带菌率有显著差异,不消毒处理下带菌率为26.18%~67.54%;消毒处理后平均种带真菌率有效降低了25.10%;枝孢霉、黑附球菌、枝顶孢、细交链孢等显著降低发芽率,篮状菌、球毛壳菌、黄曲霉、茄匍柄霉等菌对幼苗的芽和根有显著的抑制作用,严重的可引起幼苗枯萎、腐烂。     

豫中平原区紫花苜蓿根部入侵病原真菌的种类及其分布特征

为探讨紫花苜蓿（Medicago sativa）品种不同季节根部入侵真菌及其表现规律，以31个紫花苜蓿品种为材料，分离和鉴定根部入侵真菌，结果表明，不同生长季节苜蓿根部入侵真菌区系中优势菌种类明显不同，春、夏、秋3个季节均有的建群菌种为细交链孢(Alternaria alternata)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)，3个季节各具有其优势菌种；不同苜蓿品种在3个季节的入侵真菌种类及其分离率均存在显著差异（P＜0.05），春季带菌率最低，夏、秋季带菌率相对较高。平均带菌率较高的5个苜蓿品种依次为：苜蓿王、WL 525HQ、赛特、四季旺和敖汉；较低的5个苜蓿品种依次为：阿尔冈金、佛拿尔、金皇后、飞马和THG 1。     

青海高原禾草内生真菌资源的调查和分离

青海高原的高寒特性决定其生境内禾草植物的多样性和特异性,然而有关青海高原地区禾草内生真菌的研究报道较少,本研究对青海高原地区48个样点内禾草植物内生真菌带菌率和内生真菌分离进行了研究.结果表明,14种禾本科植物内生真菌平均感染率低于50％,而12种植物内生真菌平均感染率大于50％.其中,缘毛鹅观草(Roegneria pendulina)、紫花针茅(Stipa purpurea)、醉马草(Achnatherum inebrians)、中华羊茅(Festuca sinensis)、硬质早熟禾(Poa sphondylodes)、微药羊茅(F.nitidula)、毛稃羊茅(F.kiritowii)和紫羊茅(F.rubra) 的平均带菌率均超过80％.同时,同属禾草植物内生真菌带菌率存在差异.禾草内生真菌分离率较低,其中紫花针茅、麦宾草(El ymus tangutorum)、光稃早熟禾(P.psiolepis)和异针茅(S.aliena)内生真菌在菌落和分生孢子形态上存在差异.可见,青海高原禾草内生真菌带菌率较高,同时不同禾草内生真菌可能存在多样性.     

披针叶黄华内生真菌的分离与鉴定

旨在探讨有毒植物披针叶黄华内生真菌种类与种群分布情况,本试验以采自青海的披针叶黄华为试验材料,用表面消毒法对样品消毒后进行内生真菌分离,结合形态学鉴定和5.8S rDNA-ITS序列分析对分离菌株进行种属鉴定,并应用MEGA7.0软件进行系统发育分析。结果显示,从披针叶黄华中共分离获得29种内生真菌,分属于7纲、9目、11科、12属。披针叶黄华内生真菌总相对分离频率为79.31%,其中,叶的内生真菌种类最多（41.38%）,茎次之（37.93%）,种子（13.79%）和根（6.90%）相对较少;根据系统发育分析,所有内生真菌分属于两大种群,种群间亲缘关系较近。综上表明,披针叶黄华内生真菌种类丰富,青霉属是优势菌属。     

贮藏时间对饲用燕麦种子寄藏真菌及真菌毒素的影响

为明确贮藏时间对饲用燕麦种子中寄藏真菌和真菌毒素的影响，本研究通过平板培养法、形态学观察和rDNA-ITS序列分析法，对3个燕麦（Avena sativa）品种种子携带的真菌进行了分离鉴定；通过高效液相色谱质谱联用法对优势菌属产生的毒性较强的3种真菌毒素细交链孢酮酸（TeA）、黄曲霉毒素B₁（AFB₁）和桔青霉素（CIT）进行了检测和分析。结果表明：饲用燕麦种子的带菌量随贮藏时间的增加总体呈降低趋势。从供试材料中共检出真菌16属34种，优势属为链格孢菌属、曲霉菌属和青霉菌属；带菌种类和分离率随贮藏年限的变化差异显著，不同品种的带菌情况也差异显著；3种真菌毒素随贮藏年限的延长基本呈先升后降的趋势，贮藏年限和品种间的互作对毒素含量的影响最大。综上，贮藏时间对饲用燕麦种子的带菌情况和真菌毒素检出量影响显著。     

微波处理构建不感染内生真菌德兰臭草种群的方法探讨

微波技术会对生物组织产生一定的生物学效应。为了研究微波技术对德兰臭草（Melica transsilvanica）内生真菌的去除效果,采用微波中低档对感染内生真菌的德兰臭草种子进行不同时间的杀菌处理,通过显微镜检结合植株内生真菌分离技术、种子萌发指标、植株生长指标评价内生真菌去除效果。结果表明,输出功率300 W的微波处理30 s能有效杀灭种子中的内生真菌,并对种子发芽率、发芽势和发芽指数均无显著影响;微波处理10 s,20 s分别降低植株带菌率的10.7%,25%,并且对植株生长有促进作用;微波处理较长时间（40 s及以上时间）虽能有效杀灭种子中的内生真菌,但对种子萌发、植株生长有抑制作用。因此,微波处理种子技术是一种有效、简便、可行的内生真菌去除技术。     

结缕草种子打破休眠方法的研究

对贮藏2年、1年和当年收获的结缕草种子通过不同NaOH处理浓度和处理时间组合的研究结果表明：结缕草种子随着贮藏时间的增加，可部分解除休眠，随着贮藏时间的增加，打破休眠获得高发芽率所需NaOH的处理浓度和处理时间有所降低；在一定NaOH处理浓度和处理时间范围内，不同年份收获的结缕草种子的发芽率随着处理浓度和处理时间的增加而提高，30％的NaOH处理浓度，10～20分钟处理时间可推荐用于结缕草种子的工厂化处理；结缕草种子经NaOH溶液处理后，其发芽检验中的末次计数时间可从28天缩短为21天。     

蛭石引发对结缕草种子发芽率和发芽速度的影响

试验采用最终发芽率分别为90%(当年收获)、83%(贮藏1年)、74%(贮藏2年)、15%(贮藏3年)的结缕草(Zoysia japonica)种子为材料,以蛭石作为固体引发基质,研究水势和时间对种子最终发芽率、50%发芽时间和平均发芽时间的影响。结果表明,蛭石引发处理对当年收获和贮藏1年的结缕草种子的最终发芽率没有影响,但显著提高了贮藏2年和3年种子的最终发芽率,分别比对照提高了9%和12%;随着引发处理水势的增加和处理时间的延长,4份不同贮藏年限的种子50%发芽时间和平均发芽时间均有不同程度的缩短,分别比对照缩短1.8~3.0 d和2.1~8.2 d。与PEG溶液引发相比,蛭石固体引发最佳处理的水势更高,为-0.4~-0.1MPa;处理时间更长,为3~4 d。     

二月兰种带真菌致病性研究

二月兰是重要的地被、景观和绿肥作物。通过种子、离体叶片和温室盆栽试验，对分离自二月兰种子的链格孢菌，芸薹生链格孢，细极链格孢，黑附球菌，变红镰刀菌，顶孢哈氏霉，细基格孢属等5属7种可培养真菌进行了致病性测定。结果表明，7种真菌可致二月兰种子萌发后烂种烂芽率16.50%~68.50%，其中芸薹生链格孢、顶孢哈氏霉可引致种子发芽率降低18.18%~27.27%。7种种带真菌分别引致二月兰离体叶片出现褪绿和坏死腐烂等症状，发病率100%，病斑面积8.84%~99.38%，病情指数22.50~95.00。盆栽条件下，种带真菌均可致植物出现萎蔫褪绿和坏死叶斑等症状，病株率100%，叶片发病率41.56%~79.88%，病情指数16.22~56.93。与对照（不接种带真菌）相比，种带真菌侵染二月兰植株后第9天植物丙二醛（MDA）含量增加30.40%~204.15%，过氧化物酶（POD）活性变幅为-1.81%~82.87%，超氧化物歧化酶（SOD）活性升高18.78%~86.14%，叶绿素含量（SPAD值）降低13.24%~37.85%。致病性试验表明，芸薹生链格孢致病性最强，顶孢哈氏霉致病性最弱。     

不同储存年限老芒麦种子种带真菌检测及致病性测定

对来自青海的5个不同收获年份的老芒麦种样进行了系统的种带真菌研究;测定了12种分离率大于1%的种带真菌对老芒麦种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,种样发芽率为56%~80%,S₂发芽率最高,达到80%,显著高于S₁和S₅(P<0.05);种样带菌率为24%~38%,随储藏时间延长呈下降趋势,S₅带菌率最高,达到38%,显著高于其他种样(P<0.05);共鉴定出老芒麦种带真菌15属17种,真菌分离率为0.25%~8.75%,其中青霉和曲霉是老芒麦最常见的种带真菌,在5个种样上均被分离得到;燕麦镰孢、串珠镰孢、镰孢菌1、离蠕孢和德氏霉5种真菌是老芒麦最主要的致病真菌,均显著地降低了老芒麦种子的萌发、抑制了幼苗的生长、降低了幼苗的生物量(P<0.05);细交链孢对种子的萌发没有显著抑制作用(P>0.05),但是显著地降低了幼苗的长度和干物质产量(P<0.05)。皮思霉、离蠕孢、曲霉3种真菌显著延长了老芒麦种子平均萌发时间,而燕麦镰孢则显著地缩短了种子平均发芽时间(P<0.05)。     

紫花苜蓿种子内生根瘤菌定位及灭菌方法研究

为探寻苜蓿种子内生根瘤菌的有效灭菌方法,试验以‘甘农9号’紫花苜蓿(Medicago sativa ‘Gannong No.9’)种子为材料,设置DF(碘伏浸泡6min),DS(碘伏浸泡5min→无菌水冲洗→ST液-0.9%无菌氯化钠溶液和0.5%吐温80浸1min),SH3(3%次氯酸钠浸泡6min)和SH10(10%次氯酸钠浸泡6min)4种灭菌方法,分别以完整种子、去皮种子、种皮、子叶、胚、子叶+胚、子叶-胚连接处、幼苗为研究材料,以无菌水浸泡相应时间处理为对照,分析4种灭菌方法对供试材料内生根瘤菌的灭菌情况以及对种子萌发能力及幼苗生长的影响。结果表明：内生根瘤菌主要分布于紫花苜蓿种子的子叶+胚(52.7个·粒^-1)中,种皮有少量分布(16个·粒^-1),而在子叶+胚组织中内生根瘤菌主要分布于子叶-胚连接处(38.33个·粒^-1),其余分布数量依次为子叶(9.67个·粒^-1)、胚(4.17个·粒^-1);DS处理可对种子完全灭菌,且DS处理下完整种子的发芽率、发芽势、发芽指数、胚芽长、胚根长和幼苗长与CK差异不显著。综上,子叶-胚连接处是紫花苜蓿种子内生根瘤菌的主要存在部位,DS处理是紫花苜蓿种子内生根瘤菌的最佳灭菌方法。     

火烧、施氮肥对结缕草种子产量和质量的影响

在山东胶州对结缕草(Zoysia japonica)进行火烧和施氮肥试验.结果表明:火烧后结缕草提前1周返青,生殖枝数和抽穗率分别为2621/m2和28.26%,而对照为1178/m2和23.46%,二者差异极显著(P＜0.01);火烧 施氮肥(秋季20 N/hm2 春季10 kg N/hm2)生殖枝数和抽穗率显著高于火烧、不施肥;火烧极显著提高了种子数/生殖枝、结实率和种子产量(P＜0.01),极显著降低了种子空瘪率(P＜0.01),其中火烧 施氮肥效果最好;火烧使结缕草种子发芽势(发芽率)、发芽指数和活力指数均有极显著提高(P＜0.01).     

不同处理对白刺花种子萌发效果的影响

以白刺花种子为材料,分别采用砂纸摩擦,30％NaOH浸种0．5、1、1．5、2、2．5、3h,90％NaOH浸种5、15、25、35、45、55min,98％浓硫酸浸种10、20、30、40、50min对种子进行硬实处理,在室温（25～28℃）下进行发芽试验。结果表明：砂擦处理效果最好,发芽率为80％;98％浓硫酸处理...     

用物理方法对结缕草种子进行催芽的技术研究

通过试验研究不同的物理方法对结缕草种子的催芽效果,对发芽及出苗情况的观察分析,发现各种处理方法均能比对照显著提高并促进种子发芽,其中以干热处理(75℃)后20,30min擦破种皮和电热毯催芽(28～30℃)2d效果最佳。     

苜蓿种带真菌及其致病性测定

对来自我国新疆,内蒙古,吉林,陕西,甘肃,宁夏,山东,黑龙江,山西,河北和江苏等１１个省（自治区）苜蓿产区的３０个审定登记品种的３８个苜蓿种子样品进行了系统的种带真菌检测研究;测定了２１种２５个真菌分离物对苜蓿幼苗根组织的入侵性及１９种真菌对苜蓿种子萌发和幼苗生长的影响。