禽呼肠病毒感染鸡胚成纤维细胞后Toll样受体mRNA转录水平的动态变化

为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。     

雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究

参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡Toll样受体(ChTLR)mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR1 mRNA在法氏囊、肾脏和盲肠组织中转录水平较高;ChTLR2 mRNA在脾脏、法氏囊和肝脏等组织中转录水平较高,在肾脏、肺脏和皮肤未检测到转录;ChTLR4 mRNA在所检测组织中转录水平差异较小,在脾脏、十二指肠和胸腺转录水平较高;ChTLR5 mRNA在肾脏、脾脏和空肠中的转录水平较高;ChTLR15 mRNA在法氏囊中转录水平最高,其次为脾脏和盲肠。本研究建立了检测ChTLRs mRNA在不同器官组织中表达水平的实时定量PCR方法,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。     

雏鸡不同组织TLR3、TLR7和TLR21 mRNA转录水平研究

参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡T011样受体（ChTLR）mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR3、ChTLR7和ChTLR21在雏鸡不同器官组织中的转录水平。3种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR3 mRNA在肾脏、胸腺、盲肠、空肠、肝脏和十二指肠转录水平较高,在皮肤中未检测到转录;chTLR7 mRNA在脾脏、肾脏、盲肠、胸腺和十二指肠转录水平较高,在肝脏和皮肤中转录水平很低;ChTLR21 mRNA在所检测组织中均有转录,其中在脾脏转录水平最高,其次为法氏囊、胸腺和十二指肠。结果表明,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。     

SPF雏鸡感染REV后IL-2 mRNA表达的动态变化

为研究SPF鸡感染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)后白细胞介素2(IL-2) mRNA表达的动态变化,本研究应用荧光定量RT-PCR方法,对SPF鸡感染REV后主要免疫器官的IL-2 mRNA转录水平进行了初步研究.结果显示,与对照组相比,REV感染组鸡的脾脏、胸腺和法氏囊中IL-2基因的表达量在感染后7d、14d、21d、28 d、35 d、42 d和49 d均呈现升高,而且除21日龄、28日龄鸡的脾脏外,均为差异显著(p＜0.05).本研究表明REV感染后可以诱导鸡的机体表达IL-2.     

REV感染SPF鸡中白细胞介素18的定量检测

建立并利用鸡白细胞介素18（chicken interleukin-18,ChIL-18）荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）感染SPF鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平除感染后14d脾脏外,在感染后7,14,21,28,35,42,49d均显著升高（P〈0.05）。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础。     

荧光定量RT-PCR检测雏鸡感染NDV强毒后胸腺和法氏囊中TLR2与TLR4 mRNA的表达

Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在识别病原微生物过程中发挥重要作用。为了定量检测TLR2、TLR4 mRNA表达水平,研究病原与机体的相互作用,本研究建立了检测鸡TLR2、TLR4 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,检测了新城疫病毒强毒(vNDV)感染SPF雏鸡后36h、48h时胸腺、法氏囊中TLR2、TLR4 mRNA表达量变化。结果显示该方法特异性好,RRT-PCR产物分别在85.5℃、83.3℃出现单特异峰,对TLR2、TLR4的扩增效率分别为105.91%和95.30%,相关系数分别为0.9980、0.9996,最低检测限分别为108拷贝/反应和461拷贝/反应。感染后36h vNDV显著抑制TLR2、TLR4基因在法氏囊、胸腺中的表达;感染后48h时,法氏囊、胸腺中TLR2基因的表达水平显著升高,胸腺中TLR4基因的表达显著升高,而法氏囊中TLR4基因的表达仍处于抑制状态。本研究证明TLR2和TLR4参与了鸡体对NDV的感染应答。     

鸡传染性贫血病对雏鸡新城疫疫苗免疫的抑制机理Ⅱ.T,B细胞功能变化

１日龄健康雏鸡感染ＣＩＡＶ后８天进行ＮＤ疫苗免疫和免疫后２９天用ｖＮＤＶ攻击，于免疫后７、１４、２８天和攻毒后１０天取材检测。结果，感染ＣＩＡＶ雏鸡ＮＤ免疫后，胸腺和脾脏Ｔ细胞增殖反应分别于７天和７－１４天比未感染免疫对照鸡明显减弱（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）法氏囊和脾脏Ｂ细胞增殖反应均于７－１４天明显减弱（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。ｖＮＤＶ攻击后，脾脏和胸腺Ｔ细胞增殖反应均比未感染ＣＩＡＶ     

宿主细胞粘附相关基因表达与鸡传染性喉气管炎病毒组织嗜性相关性的研究

为探究宿主细胞粘附相关基因与鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染组织嗜性的相关性,本研究采用ILTV特异性定量PCR方法检测了ILTV NP-3毒株感染雏鸡后ILTV在不同组织中的分布情况,并通过RT-qPCR方法在转录水平上检测了攻毒后不同组织中细胞粘附相关基因CDH11、NEGR1和VCAN的转录水平。结果显示,ILTV感染雏鸡后在喉头、气管、哈德氏腺及骨髓中病毒载量相对较高,而在法氏囊、脾脏、胸腺和肝脏中呈阴性。同时,ILTV感染显著促进了细胞粘附相关基因CDH11、NEGR1和VCAN在组织中的表达,且与ILTV在相应组织中的分布呈显著相关性(P<0.05),表明宿主细胞粘附活性对ILTV组织嗜性具有重要作用,具体机制有待进一步研究。本研究探索了ILTV感染组织嗜性与细胞粘附分子间的关系,以期为新型免疫制剂的研制奠定了基础。     

IBDV感染雏鸡法氏囊和脾脏中抗病毒基因Mx的表达变化

Mx蛋白是由干扰素诱导产生的在多种脊椎动物中发挥抗病毒作用的效应分子。为探究雏鸡感染传染性法氏囊病病毒(IBDV)后鸡抗病毒基因Mx m RNA在法氏囊和脾脏中的表达变化,采用IBDV感染雏鸡70只,分别于感染后0、24、72、120、168、192 h随机选取6只,收集法氏囊和脾脏,利用q RT-PCR技术检测IBDV感染后不同时间点鸡Mx m RNA表达变化。结果显示,雏鸡感染IBDV后,法氏囊和脾脏中Mx m RNA表达水平均极显著高于对照组(P0.01),对照组各时间点之间几乎无变化;且随着感染时间延长,法氏囊和脾脏中Mx m RNA表达量呈先增高后降低的趋势,法氏囊和脾脏分别在72和24 h Mx表达量达到最高,是对照组的66.13和25.40倍。结果表明,法氏囊和脾脏中Mx的转录水平随着IBDV在法氏囊中的增殖而迅速升高,而IBDV减少后Mx的转录水平下降;脾脏中Mx对IBDV感染的转录水平变化比法氏囊更为快速。     

禽呼肠孤病毒感染鸡胚成纤维细胞后IL-17、IL-18和IFN-γ mRNA转录水平的动态变化

为了分析禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)S1133株感染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)后,对其细胞因子IL-17、IL-18和IFN-γmRNA转录水平的影响,探讨禽呼肠孤病毒感染机制和宿主之间的作用关系。本试验将ARV-S1133感染CEF细胞后,运用荧光定量PCR技术,测定和分析ARV结构蛋白σC和CEF细胞的IL-17、IL-18及IFN-γ的mRNA动态转录水平。结果表明,ARV-S1133感染CEF细胞10h后病毒结构蛋白σC mRNA的相对表达量开始迅速上升,在48h达到最高峰(13 162.73倍);ARV-S1133感染后引起CEF细胞中的IL-17、IL-18和IFN-γmRNA表达量发生变化,IL-17和IFN-γmRNA转录水平在感染早期迅速上调,感染后6h达到第一个峰值,分别上调8.77倍和11.17倍,随后下降,在感染36、48、60h后大幅度上升,且在48h达到峰值,表达量分别为97.19倍和111.58倍。IL-18mRNA转录水平在整个感染过程中表达量较低,在感染6h后微量上调(1.39倍),在感染中后期,其表达量呈下调趋势,感染48h时,IL-18mRNA表达量最低,与对照组相比下调0.19倍;5个不同滴度的ARV病毒感染CEF细胞24h后,3个细胞因子mRNA的表达量与病毒滴度线性相关,IL-17和IFN-γmRNA转录水平与病毒滴度正相关,IL-18mRNA转录水平与病毒滴度负相关。结果表明,ARV感染后可诱导CEF分泌IL-17、IL-18、IFN-γ的mRNA转录水平上调,说明IL-17、IL-18、IFN-γ可能与禽呼肠孤病毒的复制和致病机制相关。     

H-FABP基因在芦花鸡等3种优质肉鸡胸肌中的差异表达

利用实时荧光定量PCR技术对110日龄芦花鸡、黄鸡和麻鸡胸肌中H-FABP基因mRNA表达水平的差异进行了检测。结果表明,H-FABP基因在3种优质肉鸡胸肌中的表达水平呈现出显著的品种差异,其中麻鸡胸肌中H-FABP基因的表达水平显著比芦花鸡和黄鸡小174.8%,170.07%（P〈0.05）,而芦花鸡与黄鸡差异不显著（P〉0.05）。这为进一步研究3种肉鸡的肌肉品质和脂肪性状提供了依据。     

1株鸡传染性贫血病毒野毒株对不同日龄SPF鸡的致病性

从山东省某商品代肉鸡场表现生长迟缓的20日龄病鸡群分离到1株鸡传染性贫血病毒(CAV)SDLY08株,通过口服和肌肉注射2种途径分别感染1,7,21日龄SPF鸡,12d后检测CAV对SPF鸡体质量、免疫器官和血液指标的影响。结果表明,于3个不同日龄感染后12d,SDLY08株均可导致增重减缓,胸腺显著萎缩,脾脏肿大,同时还可引起白细胞、红细胞数及红细胞压积的显著减少。且1日龄和7日龄鸡易感性大于21日龄鸡,肌肉注射比口服感染组的致病性更强。     

乌鸡与AA肉鸡肉中钙、铁含量的比较

用火焰原子吸收法对乌鸡和AA肉鸡肉中钙、铁含量进行了测定，结果证明乌鸡肉含钙量400mg/kg-450mg/kg，含铁量70-80mg/kg;AA肉鸡含钙量250-300mg/kg，含铁量35-40mg/kg。加标回收率，铁97%-102%，钙97%-104%，同时对释放剂氯化镧、氯化锶作了选择性实验，实验表明，同时测定Ca、Fe时，选择氯化锶做释放剂果较好。     

肉种鸡鸡舍夏季通风降温试验

在两栋长145m，跨度5.4m的双坡式有窗封闭舍内，采用三层笼养方式分别饲养700只235日龄的艾维菌肉种鸡，将其中采用轴流式风机加湿帘纵向通风系统的一栋鸡舍作为试验组，而将另一栋采用窗户自然通风的鸡舍作为对照组，于夏季进行为期15d的试验，结果表明试验组与对照组的舍内温度在1d内明显不同，且舍外温度越高，试验组的舍内降温效果越好，相应地，试验组也减轻了肉种鸡的夏季热应激。     

Genetic Diversity Analysis of Three Newly Discovered Native Chicken Breeds in Yunnan Using mtDNA D-loop Region Sequences

This study was aimed to evaluate the information of their genetic background of Frizzle chicken (FM),Naked-neck chicken (CB) and YN chicken (YN) that were three newly discovered native chicken genetic resources with excellent characteristics,which had been found in Nujiang prefecture and mountainous area of Yunnan province.The variation in a total of 168 individuals sampled from the three chicken populations was assessed using the mitochondrial DNA (mtDNA) D-loop region sequences as genetic marker.The results showed that there were a total of 27 haplotypes were defined in the three native chicken as well as the haplotype diversity of these three chicken were 0.947,0.938 and 0.596,respectively.The nucleotide diversity of these three chicken were 0.01268,0.01434 and 0.00239,respectively.Phylogenetic tree displayed that all 168 individuals distributed in maternal lineage A,B,C,E,F and G.Frizzle chicken contained lineages E,F and G,and Naked-neck chicken contained all 6 lineages,of which the main lineages were E,F and G.YN chicken included lineages E,F and G,and lineage E was the highest percentage in this population.Also,it found that YN chicken was closely related to Gallus gallus murghi,White Plymouth Rock chicken,White Leghorn chicken and New Hampshires chicken,while Naked-neck chicken was closely related to Gallus gallus spadiceus,Gallus gallus jabouillei,Gallus gallus gallus Linnaeus,Indonesian cockfight and Laos chicken.The Frizzle chickens shared more haplotypes with Naked-neck chicken,and the evolutionary relationship between the two species was closer.This study provided a basis for the origin and genetic assessment of three newly discovered Yunnan local chicken breeds.     

安徽省3个地方鸡品种的遗传多样性分析

运用微卫星标记对淮南麻黄鸡、皖南三黄鸡和五华鸡3个地方品种遗传多样性进行了分析。在5个座位中,共检测到23个等位基因数,平均有效等位基因数为1.5396,杂合度为0.2920,多态信息含量为0.4156。3个地方品种中,淮南麻黄鸡遗传多样性最低,五华鸡遗传多样性最高。根据5个微卫星座位等位基因频率计算群体遗传一致度和标准遗传距离并构建系统发生树,五华鸡与皖南三黄鸡遗传关系最近,皖南三黄鸡与淮南麻黄鸡最远。研究结果与这些地方品种的地理分布、育成历史相一致,同时也佐证了微卫星标记是研究鸡群体遗传关系的一个有用工具。     

谷氨酰胺在鸡营养中的研究进展

谷氨酰胺在动物的生命活动中有重要的作用,参与动物体内蛋白质、氨基酸、核酸、嘌呤,嘧啶核苷酸,NAD+以及氨基糖的代谢,能促进肠道细胞的增殖,并能提高机体的免疫力,在提高消化酶活性方面也有重要作用。本文综述了谷氨酰胺在鸡营养中的作用效果及机理,为谷氨酰胺在养鸡业中进一步运用奠定理论基础。     

寿光鸡杂交试验

用寿光鸡与黑乌骨鸡、斗鸡和AA鸡进行杂交试验，结果表明：①寿光鸡与黑乌骨鸡杂交，其F2代体增重介于两品种之间，跖长比寿光鸡降低17．2％；羽型多表现为扁羽，约15％为丝状羽；皮肤为白色；均为5趾。②鲁西斗鸡与寿光鸡杂交F3代与寿光鸡相比，体增重降低6．3％，料重比增加5．9％，胸宽增加5．3％。③寿光鸡与AA鸡杂交，F1代增重速度比寿光鸡本身提高85．2％，料重比降低14．3％。④白乌骨鸡比黑乌骨鸡增长快，F1代比黑乌骨鸡100日龄增重提高24％，比白乌骨鸡本身增重快9．1％。