绵羊肺炎支原体分子致病机理研究进展

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）引起的支原体肺炎（Mycoplasma pneumonia）是严重危害养羊业的重要呼吸道疫病。绵羊肺炎支原体感染具有隐蔽性、持续性,造成患病羊生产性能下降,严重影响养羊经济效益。综合近期国内外关于绵羊肺炎支原体分子致病机制的文献报道,从绵羊肺炎支原体与呼吸道上皮细胞黏附、致下呼吸道损伤和引起机体免疫抑制三方面进行综述,以期为后续深入研究绵羊肺炎支原体致病机理、开发新型防控技术奠定基础。     

山羊传染性胸膜肺炎的防治技术

<正>山羊传染性胸膜肺炎又称山羊支原体肺炎,是由多种支原体引起的羊的一种高度接触性传染病,俗称"山传"。有绵羊肺炎支原体与山羊肺炎支原体,也有绵羊、山羊混合感染的肺炎支原体。该病从中国南部到北部,从西部到东部,从山羊到绵羊均可感染。     

浅谈绵羊肺炎支原体研究现状

绵羊肺炎支原体是引起引起绵羊、山羊,特别是羔羊增生性、间质性、高度接触传染性胸膜肺炎（非进行性肺炎）的病原体。本文主要从病原特征、致病机理等方面对绵羊肺炎支原体进行介绍;对绵羊肺炎支原体的研究概况进行总结。     

绵羊肺炎支原体标准株Y98与丝状支原体丝标准株PG3、绵羊肺炎支原体分离株HD-1、标准株FH抗原的差异性研究

试验采用SDS—PAGE和免疫印迹分析技术研究了绵羊肺炎支原体标准株Y98与绵羊肺炎支原体分离株HD-1、丝状支原体丝状亚种PG3以及肺炎支原体标准株FH间细胞膜蛋白免疫原性的异同。结果表明：绵羊肺炎支原体标准株Y98同绵羊肺炎支原体分离株HD-1间细胞膜蛋白免疫印迹结果基本一致,而绵羊肺炎支原体标准株Y98与丝状支原体丝状亚种PG3和肺炎支原体标准株FH抗原差异较大,缺乏共同抗原成分。     

丝状支原体簇及绵羊肺炎支原体双重PCR方法的建立及应用

为了快速检测和鉴别丝状支原体和绵羊肺炎支原体,试验采用2对检测丝状支原体和绵羊肺炎支原体的特异性引物,成功建立了一种能同时检测丝状支原体和绵羊肺炎支原体的双重PCR方法.结果表明:该方法特异性强、敏感性高,对临床病料的检测效果好.     

绵羊支原体肺炎诊断及病原的分离与鉴定

通过对送检病羊的临床症状、剖检变化、病料染色镜检,初步诊断为绵羊支原体肺炎。又经无菌采取病料接种改良Frey培养氏液,再取培养液接种于固体培养液后分离到可疑绵羊肺炎支原体。然后将培养生长的支原体分别进行革兰氏染色、姬姆萨染色、瑞氏染色和碱性复红染色;进行了各种生化试验,进行动物和鸡胚接种试验和平扳凝集等血清学试验;最后确诊为绵羊支原体肺炎,并分离获得了绵羊肺炎支原体。该结果为绵羊支原体肺炎的防制奠定了基础。     

绵羊肺炎支原体对肺及肺外脏器影响的研究

绵羊肺炎支原体（M ovipneumoniae）是引起绵羊胸膜肺炎的病原体。一般认为绵羊肺炎支原体可引起羊的胸膜肺炎。通过病原培养和PCR检测，除了肺脏外，在其它脏器也能检测到支原体，特别是危重病羊在肺外其它脏器分离出支原体的几率更高。绵羊肺炎支原体除主要引起肺脏的病变外，还可以造成心、肝、脾、肾、脑、淋巴结的损害。肺脏不是肺炎支原体感染的唯一靶器官。     

绵羊支原体肺炎诊断及病原的分离与鉴定

通过对送检病羊的临床症状、剖检变化、病科染色镜检，初步诊断为绵羊支原体肺炎。又经无茵采取病料接种改良Frey培养氏液，再取培养液接种于固体培养液后分离到可疑绵羊肺炎支原体。然后将培养生长的支原体分别进行革兰氏染色、姬姆萨染色、瑞氏染色和碱性复红染色；进行了各种生化试验，进行动物和鸡胚接种试验和平扳凝集等血清学试验；最后确诊为绵羊支原体肺炎，并分离获得了绵羊肺炎支原体。该结果为绵羊支原体肺炎的防制奠定了基础。     

绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用

为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体545 bp和精氨酸支原体806 bp的特异性片段,而对其他病原的DNA扩增均为阴性。该双重PCR方法对绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的最低检测限分别为100和10 pg/μL。40份鼻拭子检测结果显示,双重PCR检测方法与分离培养法符合率高达92.5%,均能鉴定出绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可用于绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的临床快速诊断。     

山羊支原体性肺炎流行病学调查

山羊支原体性肺炎是威胁山羊养殖的重要传染病,为了解其流行情况,对四川省主要山羊养殖地区的山羊支原体性肺炎进行了流行病学调查。从四川省7个地区山羊养殖场采集肺脏和鼻腔棉拭子样本共135份,经过分离鉴定得到42株支原体,其中绵羊肺炎支原体36株,丝状支原体6株;其中6个羊场仅分离到绵羊肺炎支原体,1个羊场同时分离到绵羊肺炎支原体和丝状支原体。本试验结果表明,绵羊肺炎支原体是引起四川省山羊支原体性肺炎的主要病原,个别地方存在绵羊肺炎支原体和丝状支原体混合感染。     

绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究

为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 ku蛋白带处存在共同抗原。     

宁夏不同绵羊品种中绵羊肺炎支原体的调查

为了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)在不同品种绵羊中的感染情况,项目采集宁夏盐池、平罗两地的4个绵羊品种(滩羊、陶寒杂、杜寒杂和滩寒杂)的鼻拭子标本403份,提取DNA并用绵羊肺炎支原体特异性PCR进行检测,统计不同品种、年龄段绵羊体内绵羊肺炎支原体的检出情况。结果表明,滩羊、陶寒杂、杜寒杂和滩寒杂的绵羊肺炎支原体的检出率依次为52.0%、83.0%、75.5%和85.7%;滩羊在3月龄以下及8月龄以上的检出率最低,分别为24.2%和34.4%,3月龄至8月龄的检出率为94.3%;陶寒杂、滩寒杂在各年龄段的检出率均在74.0%以上;杜寒杂3月龄以下的检出率为56.3%,3月龄以上的检出率在82.0%以上。结果表明,宁夏地区规模化饲养的绵羊中,绵羊肺炎支原体广泛存在,较滩羊而言,其他杂交品种羊更易感染绵羊肺炎支原体。     

互助藏羊肺炎病原绵羊肺炎支原体的PCR检测与分析

青海省互助某羊场藏系绵羊发生肺炎疾病,为了快速准确诊断藏羊肺炎发病的致病病原微生物,及时防控和治疗,采集病死绵羊肺样品,利用PCR分子生物学方法进行鉴定与生物信息学分析。经过分子鉴定,此羊场引发肺病的病原是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, MO);测序结果显示样品中鉴定的为同一株病原,鉴定的菌株的16S rRNA基因与参考序列EU265779的同源性达到99.86%。同时遗传进化树显示,鉴定的菌株与GenBank中的绵羊肺炎支原体聚成一大支,其关系最近,在进化角度证实此次鉴定的确实为绵羊肺炎支原体。结果表明,此羊场引发肺炎疾病的病原是绵羊肺炎支原体,提示要对羊群进行相关的病原学研究和流行病学调查,为针对性地对细菌性病原进行对症治疗提供参考。     

绵羊肺炎支原体诊断方法的建立

从青海省海晏县发生胸膜肺炎的绵羊群中采集3份肺组织病料,进行病原的分离培养和特异性PCR检测。结果从3份肺组织中均分离到支原体,经鉴定为绵羊肺炎支原体,表明建立的PCR方法能对绵羊肺炎支原体做出正确诊断。     

山羊传染性胸膜肺炎诊治

<正>1病原引起本病的病原主要有丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体丝状亚种和绵羊肺炎支原体。该类支原体均为细小的多形性微生物,革兰氏染色呈阴性,用姬姆萨氏法、卡斯坦奈达氏法或美蓝染色法着色良好。2流行病学自然条件下,丝状支原体山羊亚种只感染山羊,以感染3岁以下的山羊为多,绵羊肺炎     

海晏县绵羊传染性胸膜肺炎的血清学诊断

用绵羊传染性胸膜肺炎（MO）间接血凝试验,对来自青海省海晏县的110份绵羊血清,进行了绵羊传染性胸膜肺炎血清检测。结果：从110份绵羊血清中检出抗绵羊传染性胸膜肺炎抗体的阳性血清28份,阳性率为25．45％;表明海晏县的绵羊群中存在绵羊肺炎支原体的感染。     

内蒙古地区绵羊肺炎支原体的分离鉴定及序列分析

本试验无菌采取内蒙古地区某发病羊场的绵羊病变肺脏组织,接种于支原体液体培养基进行分离培养后获得1株支原体,根据分离株的培养特性、形态学观察及生化试验等,初步鉴定为绵羊肺炎支原体。然后提取分离株的基因组,用通用引物体外扩增出分离株16S rRNA序列,将该序列与GenBank中已知33种支原体序列进行比较,结果表明该序列与绵羊肺炎支原体标准株Y-98的16S rRNA序列的同源性为99%,鉴定该分离株为绵羊肺炎支原体。     

山羊中绵羊肺炎支原体的分离及鉴定

从四川省乐至县发生胸膜肺炎性传染病的山羊群中采集12个鼻拭子及4个肺组织病料,进行病原分离培养和特异性PCR检测。结果从9个鼻拭子和4个肺组织中分离到支原体,经鉴定均为绵羊肺炎支原体,未发现丝状支原体簇成员及多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌。结果表明,绵羊肺炎支原体是引起该山羊群发生胸膜肺炎的病原,同时说明绵羊肺炎支原体也是山羊支原体性肺炎的重要病原之一。     

青海省同德县绵羊流产类疾病血清学检测

应用虎红平板凝集试验(Rose-Bengal Plate Agglutination Test,RBPT)、衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体间接血凝试验(Indirect Hemagglutination Assay,IHA),对2013年采自青海省同德县部分乡镇的201份绵羊血清样品进行了布鲁氏菌、衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体的血清学检测。结果:未检出布氏杆菌阳性血清;分别检出衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体阳性血清2份、4份和7份,其阳性率分别为1.00%、1.99%和3.48%。此外,对于抗体阳性的血清样品采用PCR方法进行了抗原检测,结果表明,青海省同德县地区绵羊中存在衣原体、弓形虫和绵羊肺炎支原体的感染。     

绵羊肺炎支原体人工感染SPF鸡胚的研究

为探索SPF鸡胚作为绵羊肺炎支原体实验室感染模型的可行性,本试验用不同浓度绵羊肺炎支原体（10⁸、10⁹、10¹⁰ ccu/mL）经由卵黄囊和尿囊腔两个部位接种7日龄SPF鸡胚,通过统计鸡胚死亡情况和不同鸡胚组织样品中绵羊肺炎支原体检测阳性率（PCR检测和支原体分离鉴定）,确定绵羊肺炎支原体鸡胚感染方式、感染剂量和最佳分离部位,再用3株不同来源的绵羊肺炎支原体分离株感染鸡胚,观察其对鸡胚的致病力。结果表明,绵羊肺炎支原体感染鸡胚最佳接种途径为卵黄囊接种,感染剂量为10⁹ ccu/mL、0.2 mL/只,最佳分离部位为卵黄液。3株支原体均能感染和致死鸡胚,并均能从卵黄液中分离到绵羊肺炎支原体,但对鸡胚的致病性存在一定差异：FL3株致鸡胚死亡率为45%,略高于MoGH3-3株（40%）,二者均高于A3株（25%）,但差异均不显著（P>0.05）;FL3株鸡胚检测阳率为100%,高于MoGH3-3株（85%）及A3株（90%）,但差异也不显著（P>0.05）。本试验初步确定了绵羊肺炎支原体可感染和致死SPF鸡胚,不同分离株对SPF鸡胚致病力有差异,表明SPF鸡胚可作为下一步建立绵羊肺炎支原体实验室感染模型的候选,为绵羊肺炎支原体致病性研究和疫苗研制奠定基础。