新城疫La Sota、V4疫苗免疫鸡和免疫攻毒鸡的特异性IgA抗体动态变化规律比较

应用间接ELISA对新城疫LaSota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的IgA抗体动态变化进行了测定和比较。试验表明，LaSota和V4免疫鸡泪液中特异性IgA均在免疫后第5天出现，8天开始明显升高，与血清中IgG出现时间相似，免疫后21天达到高峰。LaSota免疫鸡的泪液IgA抗体水平略高于V4免疫鸡；而两免疫组哈德氏腺(HG)中的特异性IgA高峰出现较迟。免疫攻毒鸡泪液中的特异性IgA抗体水平均先呈短暂的升高，之后下降的趋势，而HG中的IgA则首先表现降低，之后很快升高，5天后趋于下降，两攻毒组差异不显著，对IgA回忆应答均不明显。     

鸡新城疫重组鸡痘病毒活疫苗的免疫持续期和加强免疫研究

本研究旨在评价表达新城疫病毒（NDV）血凝素-神经氨酸酶（HN）基因的重组鸡痘病毒（rFPV-12LSHN）活疫苗的免疫持续期和加强免疫对疫苗免疫效力的影响。用rFPV-12LSHN活疫苗免疫14日龄SPF鸡,103PFU/羽,7d即可检测到NDV HI抗体应答,对NDV强毒F48E8株攻毒保护率达100%。一次免疫18周后,对NDV强毒攻击依然提供完全保护。鸡痘病毒（FPV）疫苗免疫4周,再接种rFPV-12LSHN活疫苗,攻毒保护率降低至50%。相反,rFPV-12LSHN免疫4周,随后二次免疫可显著提高对NDV的体液免疫应答水平（P〈0.01）,对NDV强毒攻击的保护率仍然为100%。结果表明,表达NDV HN基因的重组鸡痘病毒（rFPV-12LSHN）活疫苗,能够快速建立坚强免疫力,免疫持续期至少可达18周,rFPV-12LSHN的二次免疫可以提高疫苗的免疫力。     

三种鸡传染性法氏囊病活疫苗免疫效力的比较研究

试验用3种不同亚型的鸡传染性法氏囊病（IBD）疫苗毒株制备单价、双价及三价活疫苗。将3种苗分别免疫10－14日龄的SPF鸡，于免疫后1－4周内用法氏囊标准强毒株攻击；攻毒后第3d、14d观察法氏囊病理变化并测定法氏囊重／体重比值；同时检测免疫鸡血清中和抗体水平。试验结果表明，双价及三价活疫苗有明显高的攻毒保护率；血清中和抗体产生早，抗体水平高。     

新城疫病毒HN标记疫苗的构建及免疫效力

将新城疫病毒AI4株的HN蛋白胞外区替换成禽副黏病毒2型T4株HN相应部分,构建获得了一株重组病毒r AI4-T4HNECD,该病毒具有较高繁殖性能,且毒力弱。将该病毒制成灭活疫苗免疫2周龄SPF鸡后,定期采血用于血凝抑制试验(HI),免疫后3周以基因Ⅶd亚型NDV强毒株JS-5-05攻毒,攻毒后定期采血用于HI检测。结果显示:免疫后,该疫苗可有效诱导抗体的产生,并能提供较强的免疫保护。血清学测定数据显示:攻毒前,免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价低于2 log_2,但感染后第5、7天免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价可分别达4.3 log_2和9.4 log_2,而免疫未攻毒组对AI4株的HI效价仍低于2 log_2,根据血清对AI4株HI效价的变化可区分免疫动物和感染动物。因此,重组病毒rAI4-T4HNECD可用于新城疫标记疫苗的开发。     

新城疫分离株免疫保护试验

对经过鉴定的新城疫病毒穴NDV雪分离株,按国家兽医生物制品质量标准制备油乳剂灭活疫苗,在隔离器中接种SPF鸡,设标准LaSota疫苗株作对照,进行免疫保护实验。免疫后,每7d采血监测NDV抗体。免疫后3周,利用ND强毒分离毒和F48E9分别进行交叉攻毒实验,同时设SPF鸡对照。每天观察,及时剖检发病鸡,检察鸡群病变,以确定疫苗的保护性,以便对常规生产中的免疫失败进行原因分析。     

鸡传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗免疫持续期的研究

应用3批鸡传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗进行了免疫持续期的试验。结果表明，鸡群免疫1次后，对A型强致病力菌株的攻毒保护率为83%，对C型强致病力菌株的攻毒保护率为51.5%，在首免后4周左右进行二免，则免疫鸡群对A型菌的保护率在免疫后13个月仍然保持100%，对C型菌的保护率在免疫后9个月内可达到90.5%。免疫鸡血清抗体也均保持较高的水平，其中B-ELISA的A型抗体的检出率为83%-100%、C型的检出率为33%-87%，血凝抑制试验（HI）的A型抗体阳性检出率为87%-100%，C型抗体的检出率为62.8%-93%，血清平板凝集抗体的检出率为62.8%-100%，此结果充分显示了鸡传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗的良好的免疫效力以及B-ELISA、HI及血清平板凝集试验较高的敏感性的特异性，研究还证实了HI抗体与攻毒保抗力的密切相关。     

马立克病毒感染对鸡体液免疫的影响

为了验证和探讨马立克病毒(MDV)对肉鸡的免疫抑制作用,同时对比研究MDV疫苗和强毒株对机体免疫力的影响,试验通过人工攻毒MDV,建立MD模型,各组SPF鸡于2日龄注射NDV+H9N2 AIV灭活苗,7日龄时以LaSota株NDV弱毒疫苗饮水免疫,在SPF鸡14,21,28,35,42日龄时,各组无菌采血25份,分离血清,利用血凝/血凝抑制试验研究各组ND和H9N2的体液抗体水平。结果表明:在整个试验周期,疫苗对照组和空白对照组NDV和H9N2 AIV抗体水平差异不显著;攻毒组SPF鸡在21~42日龄时,NDV和H9N2 AIV抗体水平显著或极显著低于对照组。     

甲硝唑对鸡新城疫病活疫苗免疫效果影响的观察

本研究进行观察甲硝唑药物对鸡ND疫苗初次免疫的影响。结果显示高母源抗体雏鸡免疫ND疫苗前应用甲硝唑，用药鸡免疫后抗NDV抗体滴度明显升高；免疫后应用甲硝唑，抗NDV抗体滴度也明显高于未用药鸡；左旋咪唑具有类似作用。甲硝唑用药鸡ND疫苗二次免疫后，鸡血清抗NDV抗体滴度明显高于未用药鸡；左旋咪唑也具有类似作用。     

反向遗传技术致弱的基因Ⅶ型新城疫病毒对SPF鸡的免疫效力评价

为评估致弱的基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)的免疫效力,本研究采用反向遗传技术构建的一株基因Ⅶ型NDV减毒疫苗株(MG7株),通过滴鼻点眼接种4周龄SPF鸡后,检测其体液免疫、细胞免疫以及攻毒后保护效率和排毒情况等指标,评价MG7株的免疫效果。结果表明:MG7株免疫3周后,能够诱导SPF鸡抗体的产生,且抗体水平(6.08log_2)高于La Sota株免疫组(5.2log_2)。MG7株免疫1~3周内,PBMCs中CD8α+T淋巴细胞亚群比例呈逐渐上升趋势;MG7免疫后第3周,PBMCs中CD4~+T淋巴细胞亚群的比例明显增加(p0.05);同时,MG7株免疫组的血清IFN-γ含量也呈递增趋势,与空白对照组存在极显著差异(p0.01)。此外,以基因Ⅶ型NDV强毒株进行攻毒试验,在攻毒后第2 d~6 d,MG7株免疫组SPF鸡未检测出排毒;LaSota株免疫组则存在不同程度排毒现象,而空白对照组全部死亡。实验表明,与LaSota株免疫组相比,MG7株能够有效诱导NDV特异性抗体产生和T细胞免疫反应,提高SPF鸡的保护效率和有效阻止排毒。本研究对MG7株免疫效力的评估结果表明其具有作为新型基因Ⅶ型NDV疫苗株的潜力,有助于我国ND的防控和根除。     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制

采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原，用提纯的IBV抗原包被微量板，建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug／ml、1：200和1：3200。与IDEXX试剂盒相比，其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测，结果表明所建立的ELISA特异性为95．6％，与IDEXX试剂盒符合率为95．6％。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后，第4天即可检测到IgG抗体，峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后，第5天抗体滴度明显上升。我们认为，该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。     

新城疫La Sota疫苗对山东分离株的免疫保护试验

用标准疫苗株La Sota活疫苗在隔离器中接种SPF鸡,进行免疫保护试验.免疫后,每7 d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)潍坊毒SGM01、昌乐毒SCL03、东营毒HY、日照毒SRZ03、莘县毒SSX03和标准强度F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照.每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,确定疫苗的保护性.结果表明,La Sota疫苗能对除SGM01和HY以外的病毒攻击的SPF鸡提供较好的保护.     

新城疫病毒接种鸡血清中IgM、IgG的动态变化

将１６只ＳＰＦ鸡分成４组，每组４只，分别接种新城疫油乳剂苗，新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联油乳剂苗，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗。接种后每隔２ｄ采血１次，用ＥＬＩＳＡ测定新城疫特异性ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体。结果：油乳剂灭活苗接种组均无特异性ＩｇＭ抗体出现，特异性ＩｇＧ抗体高峰期出现在接种后２２ｄ，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗接种组均有特异性ＩｇＭ抗体出现，高峰期为接种后第９ｄ。各接种组经强毒攻击后，均出现ＩｇＭ反应，ＩｂＧ呈典型的回忆反应。进一步试验用ＬａＳｏｔａ灭活苗经肌肉、静脉接种和加氢氧化铝胶佐剂后肌肉接种，经测定，接种鸡均无或仅有很低水平的特异性ＩｇＭ抗体产生。     

Effect of the Immunity Efficacy of IBD Immune Complex Vaccine on ND La Sota Vaccine

1-day-old SPF chickens and commercial Jingfen chickens were vaccinated with IBD immune complex(IC) vaccine, NDV La Sota vaccine were inoculated simultaneously every one week and every two weeks.NDV La Sota immunization alone was as the control group.At the 2nd, 3rd, 4th and 5th week post inoculation, blood samples were taken and the ND HI antibody were tested.Experimental chickens were challenged with high virulent NDV at the 5th week post inoculation, the protective rate of each group was calculated.The results showed the ND HI antibody were not significant different in the combined immunization of IBD IC vaccine priming and NDV La Sota vaccine boost and NDV La Sota vaccine alone immunization (P>0.05).The results indicated that IBD IC vaccine has no immunosuppression on NDV La Sota vaccine in SPF chickens and commercial Jingfen chickens.     

NDV地方分离株与La Sota株抗原交叉性研究

用新城疫弱毒疫苗株La Sota阳性血清测定NDVMM，NDVLD，NDV-NH3株新城疫病毒地方分离株和标准株La Sota，F48E9的HI效价，以La Sota阳性血清对La Sota疫苗株的HI效价为参照，分析NDV地方分离株与疫苗株抗原交叉性。结果表明，NDV-MM，NDV-LD 2个野毒株HI效价与NDV-LD HI效价相近，但比La Sota HI效价低2．3个～2．7个滴度；NDV-NH与F48E9 HI效价相近，比La SotaHI效价低4．2个～4．3个滴度，提示以上3个野毒株与疫苗株之间的抗原相关性差异较大。动物免疫保护试验结果表明，经La Sota免疫（HI效价〉2^5）后攻毒保护率为80％-100％。     

新城疫CHR株与La Sota株2种疫苗近期免疫效力比较试验

鸡新城疫CHR 株冻干疫苗中试产品3 批以及La Sota 株冻干疫苗( 符合质量要求) , 以5 种免疫途径: 肌注、滴鼻、喷雾、饮水、拌料分别接种11 日龄雏鸡。每批疫苗每种途径接种1 组, 20 只/ 组, 共20 组。雏鸡群免疫前血凝抑制抗体(HI) 效价为1∶2-13 , 于14 d 、28 d 后再测HI抗体水平, 并分别用10 000 鸡胚半数致死量(ELD50) 新城疫标准强毒北京株攻击。从而检测2 种疫苗用5 种免疫途径免疫后在不同时间的近期免疫效力。结果表明, 近期内CHR 株疫苗HI抗体呈上升趋势, 而La Sota 株疫苗HI抗体先升高后下降; CHR 株疫苗以饮水和拌料途径效果较好, 其它3 种途径效果相似。接种后14 d 攻毒, 2 种疫苗均能较好保护强毒攻击; 28 d 后, CHR 株保护率高于La Sota 株。     

Isolation of a monoclonal antibody with specificity for commonly employed vaccine strains of Newcastle disease virus

A monoclonal antibody, AVS-I, was produced from a hybridization of murine myeloma cells and splenocytes from mice immunized with the La Sota strain of Newcastle disease virus (NDV). The hybridoma producing AVS-I, selected from 184 NDV-positive supernatants, is one of two supernatants that reacted exclusively with lentogenic strains in an indirect enzyme-linked immunosorbent assay. AVS-I can also be assayed by hemagglutination-inhibition (HI), which was used to test selected reference avian paramyxovirus (PMV) strains of types 1 to 3. NDV vaccines La Sota and B1 and field isolates from chickens, turkeys, pigeons, and cockatoos were also used as antigens. AVS-I had a high binding affinity for all La Sota and B1 strains, including vaccines. The antibody bound with a lower titer to the Australian Queensland V4 and Ulster strains, but it did not bind to the F strain, a lentogenic strain from England. AVS-I was HI-negative against the other PMV reference strains. AVS-I may be valuable for identifying field isolates antigenically similar to La Sota and B1 and rapidly differentiate those vaccine strains from more virulent viruses.     

新城疫分离株疫苗免疫保护试验

用经过鉴定的新城疫病毒分离株按国家兽医生物制品质量标准制备油乳剂灭活疫苗，与标准的La Sota疫苗分别免疫带有新城疫母源抗体的白来航鸡，免疫后每7d采血监测新城疫抗体，并于免疫后21，28，35d用鸡新城疫分离毒和F48E9分别进行人工感染试验。结果显示，分离株灭活苗对鸡新城疫分离株的免疫保护效力优于La Sota灭活苗。     

Comparison of the immunogenicity of Newcastle disease virus strains V4, Hitchner Bl and La Sota in chickens

The immunogenicity of three Newcastle disease virus (NDV) strains--V4, Hitchner B1 and La Sota, was assessed in chickens that had varying levels of maternal antibody to the virus. Chickens were immunised at different ages by the eye drop and aerosol methods. The immune response of chickens to similar doses of the strains was affected by the presence of maternal antibody. Both the level of maternal antibody and the strain of virus used affected the result. Strain La Sota was least affected as it took higher levels of maternal antibody to depress response to it than were required to have a similar effect on Hitchner B1 and V4. Strain V4 was the strain most affected by circulating maternal antibody. The results demonstrated that strain V4 was less immunogenic than Hitchner B1 and La Sota when used in chickens with maternal antibody to NDV.