鸭沙门菌的随机扩增多态性DNA分析

以5株同一血清型的鸭沙门茵为研究对象，分别提取基因组DNA后，用20条随机引物对其进行RAPD分析。结果，20条随机引物中不能扩出任何条带的引物有2条，能扩出条带但扩增图谱中没有特异性条带出现的引物有10条，能扩出条带且扩增图谱具有多态性的引物有8条。对筛选到的具有多态性的8条引物进行分析，共扩增出46个DNA片段，片段大小为0．2～3．2kb，其中5个菌株共有的片段有13条，显示多态性的片段有33条。     

鸭疫里氏杆菌鸭源致病性大肠埃希氏菌和鸭沙门菌的RAPD研究

以4株不同血清型的鸭疫里氏杆菌、5株不同血清型的鸭源致病性大肠埃希氏菌和5株同一血清型的鸭沙门为研究对象，分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析。结果，从20条随机引物中筛选出了38条能在这3种菌中有较好多态性的随机引物，8个有效引物共扩增出了102个DNA片段，其中14个菌株共有的谱带仅有1条，显示多态性的片段有101个，占99．0％；对RA的4个菌株扩增出的谱带数为51条，共同片段有12条，多态性片段39条，占76．5％；对沙门菌的5个菌株扩增出的条带数为46条，共同片段为13条，多态性片段33条，占71．79／6；对大肠埃希氏菌的5个菌株扩增出的条带数为48条，共同片段4条，多态性片段44条，占91．7％。在8条引物中进一步筛选出1条引物G12，其图谱中535bp的条带为鸭疫里氏杆菌所特有，330bp的条带为沙门菌所特有，1227bp的条带为大肠埃希氏所特有，表明G12可作为分子标记用来鉴别这3种细菌。     

肝片形明虫 长菲策吸虫及日本血吸虫DNA的多态性检测

本试验用随机扩增DNA多态性技术对肝片形吸虫、长菲策吸虫和日本血吸虫虫体总DNA的多态性进行检测，结果筛选出三条具有种鉴别意义的RAPD谱带。这些特征性条带可望标记成探针用于粪便学检查中虫卵的鉴定。     

应用PCR技术检测柞蚕微孢子虫

采用斑迹抽提法提取柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)基因组DNA,基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图谱中有大小约15kb的清晰、完整条带。选用已报道的微粒子属16S rRNA基因的保守序列设计P1/P2和N1/N22对引物,对柞蚕微孢子虫基因组DNA进行PCR扩增,结果2对引物分别扩增出1条大小不同的特异谱条带,其中用引物N1/N2扩增可检测出0.47ng的DNA模板。应用同样的PCR引物、体系和反应条件,可有效扩增出受感染柞蚕幼虫、成虫中的微孢子虫基因组DNA条带。该项检测技术有望应用于柞蚕微粒子病的早期诊断。     

甘肃省小麦条锈病主要流行小种的RAPD分析及Su11-4小种SCAR标记建立

本研究应用RAPD标记技术对甘肃省小麦条锈菌主要流行的8个生理小种进行多态性标记分析,旨在寻找小麦条锈菌不同生理小种的特异性标记,共选用220条10碱基随机引物进行筛选,其中有147条可得到稳定清晰的扩增条带。研究结果显示,通过使用147条引物对甘肃省流行的8个条锈菌的生理小种进行RAPD分析,发现各致病小种间遗传变异丰富,其中引物S301在条中33号中扩增得到约507bp的特异条带;引物S39在条中32扩增得到长度约183bp的特异条带;引物S36在Hybrid46-8扩增得到约510bp的特异条带;引物S2140在Su11-4扩增得到约317bp的特异条带。另外,本研究还对扩增得到的特异片段进行回收并进行测序分析,其中依据小麦条锈菌生理小种Su11-4特异条带的测序结果设计特异引物,成功将其转化为对Su11-4小种特异的SCAR标记,这对不同条锈菌生理小种的快速准确检测具有重要意义。     

三个蜂种的RAPD标记比较分析

利用4个蜜蜂RAPD标记对高加索蜂、卡尼鄂拉蜂和平湖意蜂进行了研究.其中W23(5'-GTACCGCCCG-3')和p8(5′-CCCACCCTTG-3')两条引物扩增出的条带多态性很明显.在W23引物扩增条带中,350bp、580bp和1060bp三个条带为平湖意蜂所特有,550bp条带为卡尼鄂拉蜂所特有.在P8引物扩增条带中,364bp和1256bp,尤其是364bp条带仅出现在卡尼鄂拉蜂和高加索蜂,并且比率很高,可以作为蜂蜜高产的特异性条带.而784bp和1200bp分别是卡尼鄂拉蜂和高加索蜂的特异性条带.     

玳瑁遗传多样性的RAPD分析

应用RAPD技术分析了玳瑁的遗传多样性。用20个随机引物对中国南海海域玳瑁7个个体的基因组DNA进行了PCR扩增,共扩增出1 351条DNA片段,平均每个个体扩增出193条条带。在检测到的193条条带中,多态性条带为69条,多态性条带百分比为35.8%,条带大小在200 bp～3 000 bp之间,7个个体间遗传距离为0.082 9～0.1813,平均遗传距离为0.132 7±0.029 9,表明中国南海海域玳瑁的遗传多样性水平较低,应加强该区域玳瑁种质资源的保护。采用类平均聚类法（NJTREE）构建了7个个体相互关系的分子聚类图,表明该7个玳瑁个体没有形成种群的分化。     

贵州白山羊遗传结构的RAPD分析

用27条多态性引物对15份贵州白山羊个体基因组进行RAPD分析。结果共扩增出268条带，其中多态带为112条，多态频率在0～72．73％之间，平均多态频率为41．79％。单个引物获得的扩增带数在4～16条之间，平均每条引物扩增出9．92条带，扩增带分子量范围在230～2800bp。Nei氏公式计算品种内个体阃遗传相似指数平均为0．9156。结果表明：贵州白山羊个体间遗传变异较小，具有较高的遗传稳定性。     

贵州黑山羊遗传结构的RAPD分析

用27条多态性引物对15份贵州黑山羊个体基因组进行RAPD分析结果共扩增出258条带，其中多态带为119条，多态频率在0-77．78％之间，平均多态频率为46．12％．单个引物获得的扩增带数在4-14条之间，平均每条引物扩增出9．56条带、扩增带分子量范围为230bp-2800bp、用Nei氏公式计算品种内个体间的遗传相似性指数平均为0．9023结果表明：贵州黑山羊个体间的遗传变异较大，具有较丰富的遗传结构。     

五个品种(系)鸡的RAPD亲缘关系分析

本试验用DNA池法从40条随机引物中筛选出29条多态性、重复性好的引物,对贵州黄鸡、兴黔黄鸡、乌骨鸡三个培育品种(系)和地方品种兴义矮脚鸡及引进选育品种矮脚黄鸡共五个品种(系)进行随机扩增多态亲缘关系分析。结果表明,29条引物共扩增出稳定、清晰、重复性好的条带190条,其中多态性片段127条,在300bp￣3000bp之间。单个引物扩增出的RAPD条带在4￣13条之间,平均为6.55条。五个品种(系)间的亲缘关系符合它们的育种背景[1,2,3]。     

鹌鹑高低应激品系的RAPD标记研究

本研究对美国路易斯安那州立大学家禽系选育的高应激和低应激两个品系鹌鹑进行ＲＡＰＤ分析,评定其遗传多态性。采用两个Ｋｉｔ共４０个引物,至少能得到１个多态性片段的引物有３５个。扩增片段大小范围为２００～２６００ｂｐ。９个引物测得高低应激系中共享条带为１０～１３。２８个引物的品系内条带共享率为０５～０９１,６个引物为０３５～０４９。２８个引物的系间条带共享率在０７以上。两个Ｋｉｔ测定品系间遗传距离的差异显著,ＫｉｔＡＱ测得的遗传距离大于ＫｉｔＵ。结果表明两个品系的鹌鹑间存在遗传变异。利用ＫｉｔＡＱ和ＫｉｔＵ的引物进行ＲＡＰＤ分析,可以评定鹌鹑高应激和低应激品系的个体间、品系间的遗传变异。     

水貂自咬症病因的分子遗传研究

自咬症是笼养毛皮动物水貂、狐狸的常见病,严重影响着毛皮质量,然而其发病原因一直未得以明确。作者初步从分子遗传学角度探讨了水貂自咬症的发病原因。采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术分别对正常水貂组和自咬水貂组进行了遗传基因差异上的比对分析。从100个随机引物中筛选出40个重复性好的多态引物,提取水貂健康与患病群体DNA各40个,随机抽取10个构建基因池,进行RAPD标记研究。挑选出在健康组与患病组差异明显的S103引物（序列为AGACGTCCAC）并对其进行克隆,将克隆结果交上海生工生物有限公司测序。引物S103扩增出健康与患病水貂的特异条带,仅在患病水貂组中发现750 bp左右的DNA片段,而在健康组中发现600 bp左右的特异片段。此两条特异片段可初步作为区分健康和患病水貂群体的分子遗传标记,为进一步对水貂自咬症的深入研究奠定了基础。     

鲁梅克斯k-1杂交酸模及野生酸模遗传多态性分析

利用RAPD技术对鲁梅克斯k-1杂交酸模的3个繁育世代和野生酸模进行遗传多态性分析,结果表明:3个世代之间不存在多态性位点差异,3个世代是稳定遗传的;不同种和不同地点的同一个野生种之间存在着多态性位点差异;在合格种的12个单株间具有明显的遗传多态性;采用混合取样可消除品种内的个体遗传差异性,较好地代表群体遗传特征;从0PA组选出7个能扩增出清晰且稳定带谱的引物,7个引物共检测出4个位点,DNA片段的大小在300～200bp之间.     

Female-specific DNA sequences in geese

1. The OPAE random primers (Operon Technologies, Inc., CA) were used for random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting in Chinese, White Roman and Landaise geese. One of these primers, OPAE-06, produced a 938-bp sex-specific fragment in all females and in no males of Chinese geese only. 2. A novel female-specific DNA sequence in Chinese goose was cloned and sequenced. Two primers, CGSex-F and CGSex-R, were designed in order to amplify a 912-bp sex-specific polymerase chain reaction (PCR) fragment on genomic DNA from female geese. 3. It was shown that a simple and effective PCR-based sexing technique could be used in the three goose breeds studied. 4. Nucleotide sequencing of the sex-specific fragments in White Roman and Landaise geese was performed and sequence differences were observed among these three breeds.     

以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术筛选意大利蜜蜂重要农艺性状遗传标记

为了获得意大利蜜蜂重要农艺性状的分子遗传标记 ,本研究以 30种RAPD随机引物对平湖浆蜂、美意、澳意、苏意等 4个在产浆、采蜜和抗病性上存在较大差异的意蜂品系的基因组DNA进行RAPD_PCR扩增筛选。试验结果显示 ,随机引物W 1 8(5′_CGGACGGCGG_3′)和W2 3(5′_GTACCGCCCG_3′)的扩增图谱呈多态性。其中 ,在引物W 1 8所扩增出的 9条片断中 ,2 35 2bp和 36 4bp条带为美意所特有 ,表明可将之用于鉴别美意 ;2 0 92bp条带仅出现于蜂蜜高产的美意和澳意中 ,意味着该条带为一个蜂蜜高产性状的遗传标记 ;而 6 32bp条带在王浆高产品系平湖浆蜂中出现的频率 (0 91 )显著高于 (P <0 0 1 )美意(0 0 4 )、澳意 (0 0 2 )和苏意 (0 0 0 ) ,说明 6 32bp条带可能为王浆高产性状的一个遗传标记。在W2 3引物扩增条带中 ,6 5 1bp条带为澳意所特有 ,可用于澳意鉴别     

Random Amplification of Polymorphic DNA Fingerprinting of Trypanosoma evansi

The total genomic DNAs from Trypanosoma evansi isolates of bubaline, equine and cameline origin were amplified by polymerase chain reaction using eight arbitrarily selected 10-base primers. Informative band patterns were obtained for all isolates analysed. Depending upon the T. evansi isolate–primer combination, between 1 and 11 reproducible DNA fingerprints of 205 to 3016 bp were amplified, suggesting minor and major differences in their RAPD (random amplified polymorphic DNA) profiles.     

鹅细小病毒和番鸭细小病毒双重PCR检测方法的建立

根据GenBank上登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)基因序列,分别设计合成针对GPV非结构蛋白(NS)和MDPV NS2-VP1基因片段的2对引物GPV U/L和MDPV U/L,将GPV和MDPV提取核酸混合后作为模板,优化PCR反应条件,建立了能同时检测这2种病毒的双重PCR。特异性试验结果显示,引物GPV U/L仅特异性扩增出GPV-GZ1和GPV-GZ2株730bp核酸片段,引物MDPVU/L仅特异性扩增出MDPV的624bp核酸片段,双重PCR扩增出长度分别为730bp和624bp的2条特异性片段,而扩增鸭瘟病毒(DPV)和鹅副黏病毒(GPMV)的核酸扩增结果均为阴性。敏感性试验结果显示,双重PCR能同时检测到14.4pg的GPV核酸和28.8pg的MDPV核酸。结果表明,建立的双重PCR可用于GPV和MDPV的鉴别诊断和联合检测。     

淮南猪遗传特异性的RAPD分析

试验用150个10碱基随机引物对引入品种杜洛克猪、长白猪、大约克猪及河南地方品种淮南猪4个猪种基因组池DNA进行了RAPD分析。电泳检测结果发现,其中72个引物扩增出明显的多态性条带,共检测到911条扩增片段,其中多态性片段462条,占50.71%。统计分析结果表明,大约克猪与长白猪之间的遗传距离指数为0.0064,遗传关系最近;淮南猪与杜洛克猪、大约克猪遗传距离指数相近,分别为0.0068、0.0069,遗传关系较近;淮南猪与长白猪遗传距离指数为0.0072,遗传关系最远。结果显示,河南省地方品种淮南猪与其他引入品种之间有遗传的相似性,也存在差异,同时也证明了RAPD技术可以作为分子标记,很好地检测猪种群内的遗传变异及区分不同猪种的遗传检测方法。