柔嫩艾美耳球虫野外分离株对3种化学合成药物的抗药性

取近年分离的 6个广东柔嫩艾美耳球虫 ( Eim eria tenella)野外株 ,以病变记分减少率 ( RLS)和抗球虫指数 ( ACI)作为判断指标 ,检测了它们对地克珠利、球净和球痢灵的抗药性。结果发现 ,5个野外分离株对地克珠利抗药 ,1个敏感 ;1个野外分离株对球净抗药 ,4个部分抗药 ,1个敏感 ;6个野外分离株均对球痢灵抗药。参考株 ( GD株 )对地克珠利、球净这 2种药物仍很敏感 ,但对球痢灵部分抗药。     

广东省鸡球虫的抗药性研究进展

文章分析了广东省不同地区分离的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella) 对球净，地克珠利，氯羟吡啶，球痢灵，氯苯胍和氨丙啉等6种化学合成抗球虫药和马杜拉霉素，盐霉素，拉沙霉素和森杜拉霉素等4种抗生素类抗球虫药的抗药性的现状，80％以上虫株仅对1种或2种药物敏感；各虫株至少对2种药物抗药，且80％以上虫株同时对4种或4种以上药物抗药。E.tenella野外分离株对抗生素类抗球虫药的抗药性要比对化学合成类药物的抗药性相对严重得多，部分虫株对早期上市的一些化学药物如氯苯胍，球痢灵等敏感，说明如果基于药物敏感性试验，有限制地使用这些药物会取得较好效果，在此基础上，重点对我省球虫病的药物防制对策进行了讨论并提出了合理用药原则和方案。     

柔嫩艾美耳球虫对四种抗球虫药的交叉抗药性试验

为了测试柔嫩艾美耳球虫的４种抗药虫株（抗地克珠利、抗拉沙里菌素、抗盐霉素和抗克球粉虫株）对４种抗球虫药（地克珠利、拉沙里菌素、盐霉素和克球粉）的敏感性进行了本试验。结果表明：柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药虫株对拉沙里菌素、盐霉素和克球粉均表现敏感,拉沙里菌素抗药虫株、盐霉素抗药虫株和克球粉抗药虫株对地克珠利也表现为高度敏感,因此,柔嫩艾美耳球虫对地克珠利与拉沙里菌素、地克珠利与盐霉素、地克珠利与克球粉３组药物不存在交叉抗药性。     

柔嫩艾美耳球虫野外分离株的药物敏感性试验及对策分析

本试验以广东湛江地区某肉鸡场１９９７年和１９９８年分离的２个柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）野外分离株ｚｊ９７、ｚｊ９８对球净、五球宁、马杜霉素、球痢灵、盐霉索、拉萨洛素、地克珠利等几种药物进行敏感性试验。结果发现，球净对二虫株的抗球虫指数（ＡＣＩ均在１８０以上，为优秀；五球对二虫株的抗球畅旨数（ＡＣＩ分别为１９０．９２和１６８．６１，即分别为优秀和良好；马杜霉素、拉萨洛素对二虫株     

2株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的抗药性

选择130只21日龄雏鸡，研究了柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)南京株和凤阳株对地克珠利（Diclazuril)、马杜霉毒（Maduramicin)、氯羟吡啶（Clopidol)、氯苯胍（Robenidine)和氨丙啉（Amprolium)的抗药性。试验鸡随机分成13组，其中每株球虫均设5个感染用药组，1个感染不用药组，另设1个不感染不用药组，每组10只鸡。以POAA，RLS，ROP，ACI作为指标。结果表明，2株柔嫩艾美耳球虫均对氨丙啉轻度抗药，对地克珠利敏感或轻度抗药，对氯羟吡啶中度抗药。对马杜霉和氯苯胍中度抗药或安全抗药。提示：目前在凤阳地区可合理地使用地克珠利和氨丙啉，对氯羟哟啶应慎用，对马杜霉素和氯苯胍须减少或暂停使用。     

鸡球虫湛江分离株的药敏试验

本试验以广东湛江地区某肉鸡场１９９７ 年和１９９８ 年分离的２ 个柔嫩艾美耳球虫（ Ｅｉｍ ｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ） 野外分离株ｚｊ９７ 、ｚｊ９８ 对球净、五球宁、马杜霉素、球痢灵、盐霉素、拉萨洛素、地克珠利等几种药物进行敏感性试验。结果发现,球净对二虫株的抗 球虫指数（ Ａ Ｃ Ｉ） 均在１８０ 以 上, 为优秀;五球宁 对ｚｊ９７ 和ｚｊ９８ 的 Ａ Ｃ Ｉ 分别为１９０ ．９２ 和１６８ ．６１ ,即分别为优秀和良好;马杜霉素、拉萨洛素对二虫株的 Ａ Ｃ Ｉ 均为无效;地克珠利对ｚｊ９７ 的 Ａ Ｃ Ｉ 为无效,球痢灵对ｚｊ９８ 的 Ａ Ｃ Ｉ 为无效。各药物的 Ａ Ｃ Ｉ 按 大小排序为：球净、五球宁＞ 马杜霉素＞ 球痢灵＞ 盐霉素＞ 拉萨洛素＞ 地克珠利。根据 敏感性的高 低, 应首选球净、五球宁。同时就合理用药程序进行了探讨。     

柔嫩艾美球虫地克珠利和马杜拉霉素抗药株与敏感株孢子化卵囊18SrDNA基因的差异

为探讨抗球虫药物地克珠利和马杜拉霉素对柔嫩艾美球虫18SrDNA的影响，分别对人工诱导的柔嫩艾美球虫地克珠利抗药株（ETAD）、马杜拉霉素抗药株（ETAM）和药物敏感株（ETDS）孢子化卵囊的18SrDNA基因进行了克隆测序，并通过生物信息软件进行对比差异分析。结果显示，ETAM株有3个碱基发生突变（T170突变为C，T646突变为C，G694突变为C）；ETAD株有1个碱基发生突变（T646突变为C）。经进一步分析比较，发现ETAM株18SrRNA的二级结构与ETDS株的差异很大，而ETAD株18SrRNA的二级结构则与ETDS株的完全相同。这些碱基的突变有可能是导致E．tenella产生抗药性的原因之一。     

柔嫩艾美耳球虫2个抗药株的抗药性评估

为检测实验室长期保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株的遗传稳定性,采用鸡体试验法,以抗球虫指数、最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率和相对卵囊产量4项指标,评价2个抗药株对地克珠利、癸氧喹酯、马杜拉霉素等3种抗球虫药物的抗药性,并以柔嫩艾美耳球虫敏感株为对照。结果显示,柔嫩艾美耳球虫敏感株对3种抗球虫药物均无抗药性,4项指标全部阴性。柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株对马杜拉霉素为完全耐药,4项指标全部阳性;对地克珠利、癸氧喹酯则表现为无抗药性,4项指标全部阴性。柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株对地克珠利表现为完全耐药,4项指标全部阳性;对马杜拉霉素表现为中度耐药,2项指标阳性;对癸氧喹酯则表现为无抗药性,4项指标全部阴性。结果表明,在实验室已繁殖保存10余年的柔嫩艾美耳球虫2个抗药虫株对其诱导药物具有明显抗药性,实验室保种繁殖方法可行,虫株遗传稳定性良好,为利用该虫株进行球虫抗药性机制等相关研究奠定了基础。     

鸡球虫田间混合种和柔嫩艾美球虫单一种的抗药性试验

用上海某鸡场分离的球虫田间混合种及从其中分离纯化的4株柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella)单一种对常用抗球虫药的抗药性进行检测，发现该球虫田间种对氯羟吡啶（clopidol)，马杜拉霉素（maduramicin)，莫能菌素（monensin), 氨丙啉（amprolium)4种抗球虫药已产生完全抗药性，对氯苯胍（robenidine)轻度抗药，对地克珠利（diclazuril)无抗药性，4株柔嫩艾美球虫单一种对氯羟吡啶，马杜拉霉素，莫能菌素，氨丙啉的抗药谱与该球虫田间混合种基本一致。     

柔嫩艾美耳球虫扬州分离株对8种抗球虫药的抗药性

将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)扬州分离株感染14日龄苏禽黄羽肉鸡,设立8个用药组、1个感染不用药对照组和1个不感染不用药对照组,以相对卵囊产量、病变记分减少率、最适抗球虫百分数和抗球虫指数为指标对该虫株对盐霉素、马杜拉霉素、球痢灵、氯羟吡啶、氨丙啉、尼卡巴嗪、甲基三嗪酮、地克珠利等8种常用抗球虫药的抗药性进行了综合评定,分析了该地区球虫的抗药性及对策。结果表明,该虫株对甲基三嗪酮敏感,对氨丙啉具有中度抗药性,对盐霉素、马杜拉霉素、球痢灵、氯羟吡啶、尼卡巴嗪、地克珠利等其他6种药物具有完全抗药性。提示目前在扬州地区甲基三嗪酮抗球虫疗效最好,氨丙琳效果稍差,应合理使用,盐霉素等其他6种药物应慎用、减少或暂停使用。     

柔嫩艾美球虫抗药株第二代裂殖子的双向电泳图谱比较

对实验室诱导的柔嫩艾美球虫马杜拉霉素、地克珠利抗药株及其同母源敏感株第二代裂殖子的蛋白质进行双向电泳，构建了稳定的双向电泳图谱。经Imagemaster 2D Elite软件分析，敏感株和抗药株平均可分离900个点；以敏感株平均胶作为参考胶，抗药株平均胶与之比较，得到差异蛋白质斑点，其中地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株各有4个表达差异点。这些差异表达的蛋白质可能参与了球虫抗药性产生的过程。     

江门鸡球虫野外分离株的药物敏感性调查

以广东江门地区某肉鸡场１９９８年和１９９９年分离的２个柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）野外分离株ｊｍ９８、ｊｍ９９对球净、五球宁（球杀威）、马杜霉素、球痢灵、氨丙啉、拉萨菌素、常册酮等几种药物进行敏感性试验。结果发现，五球宁（球杀威）、马杜霉素、球痢灵、氨丙啉、拉萨菌素、常山酮等几种药物进行敏感性试验。结果发现，五球宁（球杀威）、对两虫株的抗球虫指数（ＡＣＩ）均在１８０以上，为优秀     

柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对几种抗球虫药的敏感性

为了探讨鸡柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对常用抗球虫药的敏感性,采用尼卡巴嗪、氯苯胍、球痢灵、地克珠利和常山酮5种抗球虫药,对由晋球1号球虫疫苗虫株复制的病鸡进行防治试验,通过相对卵囊产量(ROP)、相对增重率、抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)和最适抗球虫活性百分率(POAA)5项指标进行综合评定.结果表明,柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对盐酸氯苯胍无抗药性,对地克珠利有轻度抗药性,对常山酮、球痢灵、尼卡巴嗪有部分抗药性,它们的抗球虫指数为187.46～246.75,达到了抗球虫效果.     

上海地区鸡球虫对6种抗球虫药的抗药程度研究

为了解上海地区的鸡球虫抗药性状况,作者采集了上海市9个区县10个鸡场的球虫,进行了对地克珠利（Diclazuril)、氯苯胍（Robenidine)、氯羟吡啶（Clopidol)、氨丙啉（Amprolium)、马杜拉霉素（Maduramicin)、莫能霉素（Monensin)的抗药性研究。试验设6个药物组和感染不用药、不感染不用药2个对照组,以抗球虫指数（ACI）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）、最适抗球虫活性百分率（POAA）为试验指标,进行综合评定,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性、完全抗药性4个等级。结果显示来自10个鸡场的球虫中,对地克珠利有90％未产生抗药性,对氯苯胍有90％为无抗药性和轻度抗药,对驻杜拉霉素有50％为无抗药性和轻度抗药,对氯羟吡啶有80％达到完全抗药,对氨丙啉有90％达到中度和完全抗药,对莫能霉素则全部达到中度以上的抗药程度,作者认为目前在上海地区以放心地理合理使用地克珠利和氯苯胍,对马杜拉霉素要慎使用,对氯羟吡啶、氨丙啉、莫能霉素须减少或暂停使用。     

银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。     

柔嫩艾美耳球虫对地克珠利和百球清的交叉耐药性检验

分别采用地克珠利和百球清饮水剂对3株来源和特性不同的柔嫩艾美耳球虫株进行了交叉耐药性检验。结果表明，从未接触过百球清的敏感株和由敏感株诱导而成的地克珠利耐药株均表现出对百球清高度敏感；而曾使用过二种药物的野外分离虫株，则表现出对两种药物高度耐药。由此可见，两种药物并不存在必然的交叉耐药性。     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株的实验室诱导

采用药物浓度递增法,以0．07mg／L地克珠利为起始诱导浓度连续传代,以最适抗球虫指数（POAA）、病变记分减少率（RLS）和相对卵囊产量（ROP）3项指标综合判定抗药性。经12次传代,该诱导虫株对1．5mg／L地克珠利具有完全抵抗力。试验结果表明,用实验室方法诱导柔嫩艾美耳球虫抗药株完全可行。     

广西河池市鸡球虫抗药程度研究

为了解广西河池市常用抗球虫药物的疗效,选用地克珠利、磺胺喹噁啉钠和盐酸氯苯胍等3种常用药物进行抗药性试验。用卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫活性百分率(POAA)和抗球虫指数(ACI)等4项指标进行综合判定。结果显示:磺胺喹噁啉钠有2项指标阳性,2项指标阴性;地克珠利有3项指标阳性,1项指标阴性;盐酸氯苯胍的4项指标均为阳性。结果表明,河池市分离的鸡球虫对抗球虫药磺胺喹噁啉钠中度抗药,对地克珠利和盐酸氯苯胍完全抗药。